重组恶性疟原虫红细胞结合抗原175功能区的制备及联合免疫

目的 :全合成恶性疟原虫 eba- 1 75 f2基因并在毕氏酵母中进行高效分泌表达 ,用该重组蛋白与我室研制的疟疾疫苗候选抗原 Pf CP- 2 .9进行联合免疫以观察是否存在竞争性免疫抑制。方法 :采用不对称 PCR法拼接合成 eba- 1 75 f2基因(95 9bp) ,用电转化方法将合成基因导入毕氏酵母中并进行诱导表达 ,采用离子交换层析和分子筛层析纯化 EBA- 1 75 F2蛋白。 结果 :全合成 eba- 1 75 f2基因在毕氏酵母中高效分泌表达。重组 EBA- 1 75 F2和 Pf CP- 2 .9联合免疫后 ,以 EL ISA和IFA检测 ,针对 2个蛋白联合免疫的抗体滴度明显高于 2个蛋白单独免疫的滴度。 结论 :重组 EBA- 1 75 F2和 Pf CP- 2 .9联合免疫时不存在竞争性免疫抑制 ,这

基于大模型的MHC Ⅱ抗原肽-T细胞受体结合预测

T细胞受体(TCR)与抗原肽的特异性结合在调节和介导免疫的过程中发挥着关键作用,为肿瘤疫苗设计提供了必要的基础。近年来的研究主要集中在主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类抗原的TCR预测,针对MHCⅡ类抗原的TCR预测研究尚不充分,仍存在较大的提升空间。本研究利用ProtT5大模型进行MHCⅡ类抗原肽和TCR结合预测研究,探究其特征提取能力。此外,对模型进行微调,并构建前馈神经网络结构进行融合从而实现预测模型。实验结果显示,本研究提出的方法较传统方法表现更佳,预测准确度达到0.96,AUC达到0.93,验证了本文提出模型的有效性。

噬菌体随机环7肽库筛选恶性疟原虫EBA-175的结合肽

目的从噬菌体随机环7肽库中筛选恶性疟原虫EBA175抗原的结合肽。方法以EBA175重组蛋白为靶筛选噬菌体随机环7肽库,通过ELISA、竞争抑制试验、Westernblot等方法鉴定获得的噬菌体短肽与EBA175之间的结合特性。对阳性克隆进行DNA序列测定,推导其氨基酸序列并与GPA氨基酸全序列进行了同源性比较。结果获得9株可与EBA175结合的阳性噬菌体克隆,序列分析显示为3种氨基酸序列,P1(MLLITIR)、P2(TRKLPRT)、P3(KRLMPLK)。其中出现频率最高的P1序列中LLI与EBA175的受体GPA的108110位氨基酸同源。竞争性ELISA显示展示序列P1的噬菌体能竞争抑制EBA175与其单抗的结合。结论获得了可与EBA175特异结合的阳性噬菌体短肽,·LLI··几位氨基酸可能对EBA175与GPA的结合起重要作用。

雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7 RCAS1表达的影响

目的探讨体外雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7表达SiSo细胞上的受体结合肿瘤抗原（RCAS1）分子的影响。方法用浓度为10^12～10^-8mol／L的雌激素或浓度为10^-9～10^-5mol／L的孕激素作用乳腺癌细胞MCF-7后，用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测MCF-7细胞RCAS1 mRNA水平的变化，用蛋白免疫印迹试验分析MCF-7细胞表达RCAS1蛋白水平的变化。结果在10^-12～10^-8mol／L范围内随着雌激素浓度的增加，MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈递增趋势，在10^-11、10^-10、10^-9、10^-8mol／L范围内雌激素组与未处理对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。随着10^-9～10^-5mol／L的孕激素浓度的增加，MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈下降趋势，孕激素各组与未处理对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。用RCAS1单克隆抗体能检出相对分子质量为32000的条带，其灰度随着雌激素浓度的增加而增强，随孕激素浓度的增加而减弱。结论雌激素可上调MCF-7细胞的RCAS1分子表达，孕激素可下调MCF-7细胞的RCAS1分子表达。

RCAS1在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探究表达于Si So细胞系的受体结合型癌抗原(RCAS1)在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义。方法 48例食管鳞状细胞癌患者作为观察组,48例食管黏膜组织正常的其他疾病患者作为对照组,对比两组RCAS1阳性率,对比观察组中不同特征患者RCAS1阳性率。结果观察组RCAS1阳性率(83.33%)高于对照组(66.67%),差异具有统计学意义(P<0.05);观察组低分化患者RCAS1阳性率(95.83%)高于高分化(70.00%)和中分化(71.43%)患者,差异具有统计学意义(P<0.05);Ⅲ期患者RCAS1阳性率(92.86%)高于Ⅱ期(70.00%)患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 RCAS1在食管鳞状细胞癌病变越严重的患者中阳性可能性越高,RCAS1可作为食管鳞状细胞癌的预后指标。

胃癌患者血清SiSo细胞表达的受体结合肿瘤抗原水平检测及临床意义

目的 探讨胃癌患者血清SiSo细胞表达的受体结合肿瘤抗原（RCAS1）表达水平及临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测61例胃癌患者血清RCAS1水平,以31例正常人作为对照,并比较38例胃癌患者手术前后血清RCAS1水平.结果 胃癌患者血清RCAS1水平[（40.46±13.83） U/ml]明显高于正常对照组[（14.09 ±4.66） U/ml],两者差异有统计学意义（P＜0.01）;血清RCAS1水平与胃癌患者性别、年龄无明显相关,与胃癌患者临床分期、肿瘤细胞分化程度明显相关;Ⅳ期[（59.17±6.06） U/ml]明显高于Ⅲ期[（45.61±5.74） U/ml]、Ⅲ期明显高于Ⅱ期[（34.28±6.26）U/m]、Ⅱ期明显高于Ⅰ期[（22.02±8.38） U/ml]、Ⅰ期明显高于正常对照组[（14.09±4.66） U/ml],两两比较差异有统计学意义（P＜0.05）.肿瘤细胞分化程度较差（低分化腺癌、黏液腺癌）胃癌患者血清RCAS1水平[（45.19±13.38） U/ml]明显高于肿瘤细胞分化程度较好（高分化腺癌、中分化腺癌）胃癌患者[（36.70±13.19） U/ml];胃癌患者术后血清RCAS1水平[（31.74 ±9.59） U/ml]明显低于术前[（32.10±9.56） U/ml],两者差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 RCAS1参与胃癌的发生发展过程.

DCO技术对急诊腹部创伤患者凝血功能、外周血sCD14-T/mCD14水平及临床结局的影响

目的探讨损伤控制性手术(DCO)对急诊腹部创伤患者凝血功能、临床结局的影响,并分析其对外周血可溶性白细胞分化抗原14分子亚型(sCD14-T)/膜结合白细胞分化抗原14(mCD14)水平的影响。方法选取2019年1月—2023年1月本院收治的102例急诊腹部创伤患者为研究对象,按照入院先后顺序分为对照组(n=51)和观察组(n=51),对照组予以常规急救措施治疗,观察组予以DCO技术治疗。比较两组手术相关指标、临床结局及治疗前后急性生理学评分(APS)、慢性疾病评分(CPS)、急性生理和慢性健康评估Ⅱ评分(APACHEⅡ)、生理指标(pH值、体温、血氧饱和度)。比较两组治疗前后凝血功能[凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FIB)]及外周血sCD14-T/mCD14水平。结果观察组手术相关指标、临床结局改善程度优于对照组(P<0.05);观察组治疗后APS、CPS、APACHEⅡ评分均低于对照组(P<0.05);观察组pH值、体温、血氧饱和度治疗前后差值大于对照组(P<0.05);观察组治疗后PT、APTT、D-D、sCD14-T水平低于对照组,FIB、mCD14水平高于对照组(P<0.05)。结论DCO应用于急诊腹部创伤患者可降低不良事件发生率,改善生理功能、凝血功能,同时首次证实可调节sCD14-T/mCD14水平,抑制炎性反应,改善临床结局。

RCAS1蛋白在正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变和宫颈癌中的表达

目的检测RCAS1在正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变及宫颈癌组织中的表达,探讨RCAS1在宫颈癌发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学S-P法,分别检测89例宫颈癌、82例子宫颈上皮内瘤样病变(CIN)及24例正常宫颈组织中RCAS1蛋白的表达。临床分期:Ⅰ期34例,Ⅱ期41例,Ⅲ～Ⅳ期14例;病理分级:G137例,G228例,G324例;病理类型:鳞癌58例,腺癌31例;有盆腔淋巴结转移者36例;肿瘤直径:≥4cm31例,<4cm58例。另取同期因子宫肌瘤行子宫全切术的正常宫颈组织标本24例作为对照。结果免疫组化结果显示:正常宫颈组织、CINⅠ级、CINⅡ～Ⅲ级和宫颈癌组织中RCAS1蛋白的阳性表达率分别为0、31.4%、44.7%和77.5%。宫颈癌组与正常宫颈组和CIN各组间比较差异有显著性(P<0.05);正常宫颈组与CIN组比较差异有显著性(P<0.05)。RCAS1阳性表达率在低分化宫颈癌组显著高于高、中分化癌组(P<0.01);RCAS1阳性表达率在淋巴结转移组中为94.4%,而在无淋巴结转移组中为66.0%,两者相比差异有显著性(P<0.01);肿瘤直径≥4cm的宫颈癌组织中RCAS1水平明显高于肿瘤直径<4cm者(P<0.05);但RCAS1阳性表达与患者年龄、临床分期及组织学分型无关(P>0.05)。结论RCAS1表达与宫颈癌的发生、发展密切相关。随着宫颈病变恶性程度的进展RCAS1的表达逐渐增强,RCAS1的过度表达可作为宫颈癌恶性程度和不良预后的重要指标。

抗恶性疟原虫EBA-175单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的制备抗恶性疟原虫EBA-175的单克隆抗体(McAb),为恶性疟原虫的诊断及疫苗研究奠定基础.方法以恶性疟原虫EBA-175(Ⅱ区F2段)重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,间接ELISA筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Western blot试验分析其特异性.结果筛选获得6株稳定分泌抗重组EBA-175 McAb的杂交瘤细胞株1F3、2E8、2H5、4A1、4C3、4H9,6株McAb经鉴定其亚类5株为IgG1,1株为IgG2a,6株McAb的培养上清ELISA效价为1:256～1:512,腹水效价为1:12 800～1:25 600,间接ELISA显示其中4株McAb 1F3、2H5、4A1、4H9能与恶性疟原虫抗原发生特异性结合,而只有1F3、4A1、4H9在Western blot试验中识别恶性疟原虫Mr约35000的虫源蛋白.结论获得了能稳定分泌高特异性抗EBA175 McAb的杂交瘤细胞.

肺癌患者血清中RCAS1水平及其临床意义

目的探讨肺癌患者血清中SiSo细胞表达的受体结合肿瘤抗原(RCAS1)水平并进行分析,为临床诊治提供依据。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测90例肺癌患者、60例良性肺部疾病患者和102名健康体检者血清RCAS1水平,并进行比较分析。结果肺癌组血清RCAS1水平与良性肺疾病组和健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);随病程进展肺癌患者RCAS1的阳性率逐步升高,肺癌Ⅲ、Ⅳ期患者RCAS1阳性率(82.8%、95.8%)明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者(42.9%、56.5%)(P值均<0.05);有淋巴结转移的患者RCAS1阳性率(80.6%)明显高于未转移患者(44.4%)(P<0.05)。RCAS1诊断肺癌的敏感度为73.3%,特异性为96.9%,准确性为88.5%。结论 RCAS1对肺癌的辅助诊断有一定的临床价值,可以作为一项新的肺癌标志物应用。

重组人CD11α单克隆抗体生物学活性测定方法的优化

用竞争性荧光免疫抑制细胞实验法对重组人CD11α单克隆抗体注射剂进行生物学活性测定,对LFA1转染的293细胞的培养、抗体包被时间及活性测定过程中样品的制备等条件进行了优化,建立了规范可行的操作方法。3批样品的生物学活性分别为:1.03×104U/mg蛋白,0.98×104U/mg蛋白及0.97×104U/mg蛋白,5次测定的RSD分别为4.554、5.039及1.443。

RCAS1和CEA联合检测在恶性胸腔积液中的诊断价值

目的探讨表达在SiSo细胞上的受体结合肿瘤抗原(RCAS1)、癌胚抗原(CEA)联合检测在恶性胸腔积液中的诊断价值。方法收集24例恶性胸腔积液和29例良性胸腔积液患者的临床资料,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清和胸腔积液中RCAS1水平,放射免疫法检测CEA水平。结果恶性胸腔积液的RCAS1浓度显著高于良性胸腔积液(P<0.05),两组血清RCAS1水平差异无统计学意义。RCAS1浓度以6.978 U/ml为最佳诊断界值,诊断恶性胸腔积液的灵敏度为70.8%,特异度为86.2%;以CEA浓度5 ng/ml为恶性胸腔积液诊断标准,诊断恶性胸腔积液的灵敏度为87.5%,特异度为96.6%。串联两项检测特异度可提高至100%,并联获得95.8%的灵敏度。结论 RCAS1检测对于恶性胸腔积液的诊断有一定价值,与CEA联合检测可显著提高恶性胸腔积液诊断的灵敏度和特异度,但RCAS1并不比CEA诊断价值高。

Receptor-binding cancer antigen expressed on SiSo cells can be detected in metastatic lymph nodes from gastrointestinal cancers

AIM： To investigate the expression of receptor-binding cancer antigen expressed on SiSo cells （RCAS1） in metastatic lymph nodes from gastrointestinal cancer. METHODS： Metastatic lymph nodes from gastrointestina cancer were detected for RCAS1 by immunohistochemica staining and mRNA in situ hybridization.RESULTS： A total of 102 metastatic lymph nodes from bile duct, gastric, colon, and pancreatic cancer were investigated for RCAS1 expression. The immunoreactivity of RCAS1 was identified in 100% of metastatic lymph nodes. Both local and distant metastatic lymph nodes showed RCAS1 expression. On the contrary, specimens of non-cancerous lymph nodes were negative for RCAS1. The result of mRNA in situ hybridization was also confirmed by the finding of immunohistochemical staining. RCAS1 mRNA was detected in all tumor cells that metastasized to lymph nodes. CONCLUSION： All metastatic lymph nodes express RCAS1 in tumor cells at both protein and mRNA levels, and RCAS1 should be used as a complementary factor for identification of metastatic lymph nodes from gastrointestinal cancers.

康莱特注射液联合洛铂治疗非小细胞肺癌恶性胸腔积液的临床研究

目的探讨康莱特注射液联合洛铂治疗非小细胞肺癌(NSCLC)伴发恶性胸腔积液的临床疗效。方法选择2016年2月—2018年3月海南省人民医院收治的NSCLC伴发恶性胸腔积液108例,随机分为对照组和治疗组,每组各54例。对照组胸腔注射注射用洛铂,30 mg/m^2溶于5%葡萄糖注射液50 mL。治疗组在对照组基础上胸腔注射康莱特注射液,100 mL/次,1次/d。两组患者均在21 d后重复1次,连续治疗2次。观察两组患者临床疗效,同时比较治疗前后两组患者胸水中血管内皮生长因子(VEGF)和SiSo细胞受体结合肿瘤抗原(RCAS1)表达水平。结果治疗后,对照组和治疗组临床有效率分别为70.4%和87.0%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者胸水中VEGF和RCAS1表达均显著减低,同组比较差异具有统计学意义(P<0.01);且治疗组胸水中VEGF和RCAS1表达水平显著低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论康莱特注射液联合洛铂可以显著减低NSCLC伴发恶性胸腔积液患者胸水中VEGF和RCAS1表达,临床疗效显著,使用安全。

恶性疟疾多价疫苗的构建及表达

目的构建恶性疟原虫多表位融合抗原基因(PfCP2E9),并在毕氏酵母中进行高效分泌表达。方法选取本实验室前期构建的融合蛋白PfCP-2.9与疟原虫红内期疫苗候选抗原EBA175IIF2,按一定的次序拼接成该融合基因,并克隆至酵母表达载体,用电转化方法将拼接基因导入毕氏酵母中进行分泌表达。结果拼接的基因在毕氏酵母中高水平分泌表达。结论构建的恶性疟原虫多表位融合抗原基因能在毕氏酵母中高水平分泌表达,为探讨其免疫学功能及作为多价联合疫苗的成分提供了基础。

联合检测RCAS1和CA19-9对胰腺癌的诊断价值

[目的]检测胰腺癌患者血清和组织中RCAS1和CA19-9的表达,以探讨RCAS1和CA19-9联合检测在胰腺癌诊断中的价值。[方法]采用ELISA法分别检测43例胰腺癌患者(胰腺癌组)、30例正常人(正常对照组)血清中RCAS1和CA19-9含量。采用Western Blot法和RT-PCR法检测20对胰腺癌组织和癌旁组织中RCAS1和CA19-9的表达。综合评价联合检测RCAS1和CA19-9对诊断胰腺癌的价值。[结果]ELISA法检测胰腺癌组TNM分期I+Ⅱ期的患者血清RCAS1和CA19-9明显高于正常对照组(P<0.01)。Ⅲ+Ⅳ期的患者血清RCAS1和CA19-9明显高于I+Ⅱ期(P<0.05)。RCAS1和CA19-9联合检测胰腺癌的灵敏度是95.3%,较单独检测CA19-9明显增高(P<0.05)。Western Blot和RT-PCR结果示胰腺癌组织中RCAS1和CA19-9的表达均明显高于癌旁组织(P<0.05)。[结论]胰腺癌患者血清和组织中RCAS1和CA19-9表达明显增加,两者联合检测可提高胰腺癌的早期诊断率,对诊断胰腺癌及判断预后有重要价值。