运用抗原芯片原理与竞争免疫层析技术制备鱼类病原性溶藻弧菌快速检测试纸

本文将抗原芯片法原理与竞争免疫层析技术相结合,利用兔抗溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)多克隆抗体标记20nm胶体金颗粒后制得金标垫,将溶藻弧菌的外膜蛋白、鞭毛蛋白、胞外产物和全菌破碎蛋白4种抗原组分以及羊抗兔IgG喷涂在硝酸纤维素膜上,分别作为4条检测线和1条质控线,制备溶藻弧菌胶体金免疫层析快速检测试纸,并确定检测结果的判定方法。使用该试纸同时对溶藻弧菌、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)、哈维氏弧菌(V.harveyi)、鳗弧菌(V.anguillarum)和鱼肠弧菌(V.ichthyoenteri)进行检测,检查结果显示其能够准确区分溶藻弧菌感染与其他弧菌的交叉反应,排除了交叉反应对结果判定的干扰。溶藻弧菌快速检测试纸的最低检测限为5×10~5cfu·mL^(-1),检测时间为10~15min。该试纸具有操作简便、快速、准确、特异性强的优点,适用于普通人员在养殖现场对鱼类溶藻弧菌的快速检测。

应用3种抗原的芯片系统检测结核分枝杆菌

目的探讨3种抗原的芯片系统检测结核分枝杆菌的敏感性及特异性。方法以3种结核抗原的芯片检测系统,对临床确诊的100例肺结核标本及100例非结核标本进行检测。结果芯片检测的敏感度为88%,两项或三项指标同时阳性时,特异度可达100%;芯片检测结核组与非结核组结果有高度显著性差异(P<0.01)。结论结核分枝杆菌3种抗原的芯片敏感性高、特异性强。

结核分枝杆菌多抗原蛋白芯片对儿童结核病的诊断价值

目的探讨结核分枝杆菌(MTB)多抗原蛋白芯片对儿童结核病的诊断价值。方法选取2005年4月至2006年4月在首都医科大学附属北京儿童医院诊断为结核病的住院患儿作为结核病组。选取同期住院,患感染性疾病,同时除外结核病的患儿作为非结核病组;选取体检纯化蛋白衍生物(PPD)试验阳性,既往无结核病史,无明显结核中毒症状,胸部影像学及腹部B超检查未见结核病灶的儿童作为结核感染组;选取同期行健康体检,卡疤试验阳性,无基础疾病,无结核接触史的儿童为健康对照组。各组留取血清标本。计算结核病组PPD试验阳性率及细菌学检查阳性率。应用MTB多抗原蛋白芯片同时检测标本中脂阿拉伯甘露糖(LAM)、相对分子质量16000和38000蛋白IgG抗体,通过蛋白芯片阅读仪判断结果,其中任意1种或1种以上抗体检测阳性,即判为蛋白芯片检测阳性。分别计算各组抗体检测阳性率,并计算该方法检测儿童结核病的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值等指标。应用Logistic回归及χ2检验分析蛋白芯片检测阳性率与患儿年龄、病程、抗结核治疗时间、激素使用以及结核病类型的关系。结果研究期间共纳入结核病组79例,非结核病组33例,结核感染组15例,健康对照组30例。蛋白芯片检测结核病组的阳性率为34.2%(27/79),低于PPD试验阳性率(84.8%,67/79),高于细菌学检查阳性率(12.7%,10/79)。在非结核病组阳性率为6.1%(2/33),结核感染组和健康对照组阳性率为0。蛋白芯片检测结核病组的灵敏度为34.2%,特异度为97.4%。阳性预测值93.1%,阴性预测值58.5%。Logistic回归发现蛋白芯片检测阳性率仅与病程相关,且随病程延长而阳性率升高。病程<1个月,蛋白芯片检测阳性率为18.8%(6/32),病程在～3个月,蛋白芯片检测阳性率为21.6%(8/37),病程>3个月,蛋白芯片检测阳性率为100%(13/13)。目前的统计结果尚未发现蛋白芯片检测阳性率与患儿年龄、抗结核治疗时间、激素使用情况有显著相关关系。结核病分型不同所造成的蛋白芯片检测阳性率的差异主要是由于其病程分布不同所致。结论MTB多抗原蛋白芯片对儿童结核病的诊断有一定价值,可作为一种诊断补充手段。但该方法灵敏度较低,不适用于早期诊断。

鱼类病原性弧菌血清学诊断芯片技术构建

针对鱼类致病性肠道弧菌(Vibrio ichthyoenteri)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、河流弧菌(Vibrio fluvialis)和哈维氏弧菌(Vibrio harveyi),制备了牙鲆(Paralichthys olivaceus)抗血清,提取了各弧菌的外膜蛋白、胞外产物、鞭毛蛋白和全菌蛋白,分析了牙鲆抗血清与各抗原蛋白的免疫反应,发现各弧菌抗血清与各自的抗原反应最强,与其他弧菌抗原有不同程度的交叉反应。将6种弧菌的抗原组分固定于芯片载体形成微阵列,构建了其血清学诊断抗原芯片,使用辣根过氧化物酶标记的抗牙鲆IgM单抗2D8作为检测抗体,确定了检测结果判读方法;将抗原芯片应用于牙鲆和大菱鲆(Scophthalmus maximus)的弧菌病诊断,并利用ELISA技术,验证了该抗原芯片用于弧菌病诊断的准确性。本研究为鱼类弧菌病的血清学诊断提供了有力工具。

高通量芯片检测SLE家系成员自身抗体的临床价值探讨

目的探讨采用高通量芯片检测系统性红斑狼疮(SLE)家系成员的自身抗体的价值。方法选择该院确诊的7例SLE患者(来自3个SLE家系)作为病例组,家系1中未诊断为SLE的4名健康者作为对照组。通过高通量芯片法检测病例组和对照组自身抗体水平,比较检测结果的差异。结果热图结果显示,病例组120种自身抗体水平总体较对照组上调。与对照组比较,病例组抗dsDNA抗体、抗ssDNA抗体、抗染色体DNA抗体、抗胶原Ⅵ抗体、抗硫酸软骨素C抗体、抗GP210抗体、抗U1-snRNP 68/70抗体、抗U1-snRNP C抗体水平升高(P<0.05)。结论SLE家系自身抗体水平总体高于对照组,不同家系间表现出自身抗体的异质性,基于SLE家系筛选出自身抗体可为SLE诊断和精准治疗提供参考。