带有6肽组氨酸的HBV S/S145真核表达载体的构建及应用

目的构建稳定表达带有6肽组氨酸的HBVS/S145蛋白的真核载体。方法应用PCR技术及体外基因重组技术,将S基因和nt587突变的S基因插入带有his-tag的pxF2RH载体中,扩增6个组氨酸和S/S145基因,最后与经NheI、SalI双酶切的线性载体pCI-neo连接,构建成带有6肽组氨酸的稳定表达S/S145的真核表达载体(简称pCI-his-S Y/S145)。用脂质体转染的方法将质粒转至人宫颈癌细胞,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中抗原的分泌情况。用West-ern-blot方法检测细胞中外膜蛋白的表达情况。结果真核表达载体pCI-his-SY/S145的测序结果与预期大小一致。ELISA方法可检测到细胞上清中的野生型表面抗原,但检测到145突变抗原表达水平低。应用Western-blot方法可以同时检测到野生型和G145R突变的外膜蛋白表达。结论带有his-tag的重组质粒pCI-his-S/S145可以在Hela细胞中成功表达融合蛋白,且组氨酸可作为检测蛋白的标志。