RhCE表型对RhD抗原量及抗-D效价测定的影响研究

目的目前对Rh系统抗-D的定量或效价检测(相对定量)方法皆依赖于试剂红细胞。日常工作中,绝大多数实验室采用单人份红细胞作为效价测定的试剂红细胞,若RhCE表型对RhD抗原表达量影响显著,则不同RhCE表型必然会产生不同的抗-D效价测定结果。本研究旨在通过RhCE分型,RhD抗原定量试验及相应抗体进行效价测定,比较分析RhCE表型对RhD抗原量及抗-D效价测定的影响。方法采用血清学方法筛选获得CCee、Ccee、ccEE、CcEe表型的RhD阳性标本,并使用流式细胞术检测上述红细胞RhD抗原量,最后使用不同RhCE表型单人份标本红细胞对同一份抗-D进行效价测定。分析RhCE表型对RhD抗原量及抗-D效价测定的影响。结果在99例细胞红细胞标本进行Rh血型血清学分型后,对CCDee(n=17)、CcDee(n=15)、CcDEe(n=8)、ccDEE(n=8)分型细胞进行流式免疫荧光检测,发现CcDee与ccDEE及CcDEe间、CCDee与ccDEE之间RhD抗原的荧光量比较存在较大统计学意义差异(P<0.001),CcDee与CCDee比较存在统计学意义差异(P<0.01),其余各组间均不具统计学意义的差异;再对其中CCDee(n=15)、CcDee(n=14)、CcDEe(n=8)、ccDEE(n=8),使用同1份抗-D血浆进行效价测定分析,将效价结果与红细胞RhD抗原免疫荧光值(MFI)进行比较后,发现红细胞表面RhD抗原量与效价二者呈现正相关关系(r=0.907;P<0.001),对效价与RhD抗原MFI值进行统计分析发现:对同一份抗-D血浆,效价值为32、64、128各组内红细胞MFI具有统计学意义的差异(P<0.05);将效价与RhCE分型进行统计分析,发现CCEE与Ccee间、CcEe与Ccee间存在统计学意义的差异(P<0.05)。结论不同的RhCE表型会造成D抗原表达差异,D抗原量对效价测定有较大影响,提示在效价测定试验中,使用相同RhCE分型红细胞作为试剂细胞或对RhD抗原进行定量分析可提高效价试验的准确度。

动物血清和单克隆抗体用于ELISA测定灭活脊灰疫苗的抗原量

一、材料与方法 1.病毒和疫苗 病毒:用脊灰Ⅰ型Mahong株、Ⅱ型MEF株和Ⅲ型Saukette株的Hela细胞感染培养收获液,经氯化铯反复梯度离心提纯的D抗原制剂;及D抗原加热60℃2小时制成的C抗原制剂。由滴定法测量D抗原制剂的TcID_(50),Lowry法确定蛋白质含量。 疫苗:用CL疫苗(包括Salk和纯化D抗原型),RIV和IM疫苗;并以RIV的PU_((78)—(02))三价苗作为原价参考疫苗。 2.动物血清 兔抗脊灰I、Ⅱ、Ⅲ型病毒血清:系新西兰白兔用100μg纯化D抗原,2至多次超免(间隔1个月)疫制备的,其中和抗体效价≥1∶20000; 山羊抗脊灰病毒血清:系山羊感染I-Mahoney,Ⅱ-MEF及Ⅲ型-Lansing株后免疫制备的。

Peg-IFNα-2a联合ADV治疗对高病毒载量e抗原阳性乙肝的疗效观察

目的:探讨聚乙二醇干扰素α-2a(Peg-IFNα-2a)联合阿德福韦酯(ADV)治疗对高病毒载量e抗原阳性乙肝患者的疗效。方法:将132例高病毒载量e抗原阳性乙肝患者随机分为干扰素组、ADV组和联合组,每组44例,干扰素组给予Peg-IFNα-2a治疗,ADV组给予ADV治疗,联合组首先给予ADV治疗控制病毒载量下降后,再进行联合Peg-IFNα-2a治疗。观察三组治疗48周后的乙肝病毒标志物转化、血清学标志物转化情况、病毒学、血清学应答情况,治疗前及治疗48周后的血清干扰素-γ(INF-γ)和白细胞介素-10(IL-10)水平。结果:联合组的丙氨酸氨基转移酶(ALT)复常率、HBV-DNA阴转率、HBsAg阴转率显著高于干扰素组和ADV组(P<0.0167),HBeAg血清学转换率显著高于ADV组(P<0.0167);联合组的完全病毒应答率显著高于干扰素组和ADV组(P<0.0167),无应答率显著低于干扰素组和ADV组(P<0.0167);治疗后,三组血清INF-γ显著上升(P<0.05),IL-10水平显著降低(P<0.05),联合组变化幅度显著大于干扰素组和ADV组(P<0.05);联合组和干扰素组的流感样症状、失眠、脱发、中性粒细胞数减少、血小板计数减少的发生率对比,差异无统计意义(P>0.05),均显著高于ADV组(P<0.0167)。结论:Peg-IFNα-2a联合ADV治疗高病毒载量e抗原阳性乙型肝炎患者疗效显著,利于提高抑制病毒复制能力和病毒学、血清学应答率,可安全推广于临床中。

鸡新城疫病毒抗原超滤技术研究

应用分子筛过滤技术超滤浓缩鸡新城疫病毒 ,并就NDV抗原量对鸡免疫应答的影响作了动态研究。试验结果显示 ,将NDV鸡胚尿囊毒浓缩 4倍体积 ,HA效价提高了 2个滴度 ,病毒回收率达 1 0 0 % ;病毒活性亦未发生改变。免疫 1 1天后 ,ND浓缩苗和ND_IBD二联苗组鸡的ND_HI抗体水平远远高于免疫对照组 ,差异极显著。结果表明 ,所建超滤技术适用于NDV抗原的浓缩应用 ;适量增加NDV抗原量能够加快鸡的体液免疫应答 ,增强鸡只的特异免疫保护力。

抗原对CD8^+T细胞记忆的贡献

基于T细胞的逆线性分化假说建立了非线性理论模型 .利用此模型 ,得出记忆T细胞逆线性分化模型确有记忆机制 。

健康儿童中稀释水痘活疫苗的剂量滴定研究

为了了解延长贮藏对疫苗安全性和免疫力的影响,本研究对健康儿童给予单剂量市场近期销售的稀释水痘活疫苗(3625pfu)或部分加热灭活疫药(1125或439pfu)。

应用聚凝胺筛选-D-表型红细胞的研究

目的 -D-表型是Rh血型系统中较为特殊的血型表型,该表型仅表达RhD蛋白而不表达RhCE蛋白,其发生频率小于十万分之一。由于目前尚缺乏简单有效的筛选方法,该表型及其基因在中国地区的频率目前还未见报道,本研究拟应用该表型D抗原表达量与正常表型D抗原表达量的差异,开发一种新型筛选试剂对该稀有血型进行初步筛选。方法利用流式细胞术对-D-表型及表型基因携带者D抗原表达量进行检测;再利用抗原表达差异,通过调整筛选体系内聚凝胺浓度,使得RhD抗原表达量较高的红细胞与筛选试剂发生凝集,达到对-D-表型及其基因携带者的初步筛选目的。结果从流式细胞术免疫荧光值定量结果(MFI)分析,-D-表型细胞RhD抗原表达量(284 360±16 698,n=3)为正常RhD阳性细胞抗原表达量(98 642±35 908,n=9)的约3倍(P<0.01),RHD--杂合子RhD抗原表达量(181 109±39 455,n=4)为正常RhD阳性细胞抗原表达量的约2倍(P<0.01);15μL 3%新鲜红细胞悬液与筛选用体系35μL(1μL IgG抗-D,29μL凝聚胺聚凝胺,及5μL低离子强度溶液)的反应体系筛选出的阳性细胞经流式检测RhD抗原表达量(144 538±227 445,n=7)为正常RhD阳性细胞抗原表达量的约1.5倍。结论聚凝胺初筛体系可用于-D-表型高通量筛选,为该表型的人群频率等研究提供可靠的的技术手段。

有关乙型肝炎疫苗的一些问题

本文指出对乙型肝炎疫苗的一些问题应作较为细致的研究 :注射途径 (皮下或肌肉 )、抗原 (Ag)量、佐剂 (需要与否 )、HBs Ag的抗原性和分子结构。重要的是获得高的血清阳转率 ,而不是高滴度抗体 (保护性免疫力并非取决于抗体滴度 )。两种疫苗可以使用 ,并作进一步研究。何不在健康成人和儿童中使用小剂量疫苗 (1.5～ 2 .5 μg HBs Ag) ?它可能无需佐剂并作皮下注射。2 0

单向免疫扩散试验的安全模拟方法

单向免疫扩散试验是医学检验专业学生必须做的一个验证性实验，单向免疫扩散试验是用已知抗体测定未知量的相应抗原，使待测的抗原从局部向琼脂内自由扩散，在一定区域内形成肉眼可见的沉淀环，从而根据沉淀环的直径与面积对抗原量作出计算。本实验以单向免疫扩散的方法对待检人血清免疫球蛋白（Ig）G进行定量测定。学生在实验室做单向免疫扩散试验时要用人血清，人血清即使是健康人血清也不是十分安全，也可能有其他病毒，为了能够让学生安全地上好这个实验课，笔者采用了模拟方法，效果满意，现报告如下。

鸡传染性法氏囊超强毒油乳剂灭活苗

中国农科院哈尔滨兽医研究所的科技人员从鸡场采集鸡传染性法氏囊(IBD)超强毒,经分离鉴定,筛选培育,得到一株高毒价的细胞适应株,灭活后制成油乳剂疫苗。该疫苗适用于各品种蛋、种鸡和肉鸡群,可有效地预防超强毒引起的IBD。其主要特点:1.毒价高。

α-Gal抗原定量检测试剂盒的研发

目的:通过优化α-Gal抗原检测的方法及改善相关试剂的稳定性,研发α-Gal抗原定量检测试剂盒,并评价该试剂盒的稳定性、可靠性和适用性。方法:以医疗器械行业标准(YY/T 1561—2017组织工程医疗器械产品动物源性支架材料残留α-Gal抗原检测)中的α-Gal抗原检测酶联免疫抑制方法为基础,通过评价回收率、相关系数R2、最大吸收值和一抗的最高结合抑制率,对一抗、酶标二抗和固相抗原包被反应条件进行优化。预先制备好抗原包被板以及即用型试剂,制备成套试剂盒。通过考察Gal-BSA标准品的Gal抗原含量,评价试剂盒的检测回收率、标准曲线的R2值、最高反应的吸收度(A)和最高结合抑制率,考察其稳定性。使用优化好的试剂盒检测几种样品的Gal抗原,考察试剂盒的适用性。结果:经过优化后的试剂盒Gal抗原最低检测限为5.64×1012个/每反应,检测回收率80%~120%;相关系数R2>0.98;6批次的板内、板间检测的相对标准偏差RSD<5%;阴性参考品无Gal抗原检出。使用该试剂盒能够准确检测小鼠脏器Gal抗原含量,其结果显示小鼠各脏器Gal抗原表达趋势与Gal抗原调控基因的m RNA表达趋势完全一致,间接地佐证了该试剂盒的准确性和可信性。检测生物型硬脑膜补片原材料Gal抗原含量为(8.34±1.17)×1014个·mg-1,产品Gal抗原含量为(4.16±2.56)×1012个·mg-1,计算得抗原清除率为99.5%。结论:该试剂盒具有较好的灵敏度,特异性,适用于依照行业标准YY/T 1561—2017进行动物源医疗器械/生物材料α-Gal抗原残留量的定量和Gal抗原清除率检测,为行业标准的实施提供技术保障。

特异性水解α_(s1)-酪蛋白过敏原IgE作用表位aa 83~105的蛋白酶筛选

探索特异性水解α_(s1)-酪蛋白作用表位的蛋白酶筛选方法。首先通过固相合成法合成α_(s1)-酪蛋白作用表位aa 83~105,纯化鉴定后,偶联牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)制备完全抗原,然后免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,进而建立间接竞争酶联免疫吸附测定方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),以α_(s1)-酪蛋白制备的单克隆抗体及建立的方法为对照。结果表明:合成作用表位的纯度在90%以上,与BSA偶联比为6.31。单克隆抗体的亚型为IgG_(1),效价可达到1∶320 000,可以与α_(s1)-酪蛋白发生特异性免疫反应,与大豆蛋白无交叉反应。建立的间接竞争ELISA,竞争抑制曲线回归方程为y=-9.22x+100.78(R^(2)=0.989 1),方法重复性、精确性均较好,检出限低于α_(s1)-酪蛋白单克隆抗体建立的方法,初步筛选到木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶水解液的抗原残留量较小,需要进一步通过体内实验验证结果。α_(s1)-酪蛋白作用表位aa 83~105 G_(1)型单克隆抗体制备成功,为新型α_(s1)-酪蛋白作用表位aa 83~105低致敏配方粉的开发,提供了ELISA检测高灵敏专用单克隆工具抗体。

丙基硫氧嘧啶诱发的小血管炎和原发性小血管炎抗髓过氧化物酶抗体亲和力的比较

目的 比较丙基硫氧嘧啶(PTU)相关性小血管炎和原发性小血管炎抗髓过氧化物酶(MPO)抗体亲和力的大小及其与临床表现的关系。方法 以纯化的人MPO为抗原,采用抗原抑制性酶联免疫吸附法对我院确诊的13例PTU相关性小血管炎和19例原发性显微镜下多血管炎(MPA)的患者血清中抗MPO抗体的亲和力进行检测,分析其与临床表现的关系,并对两组抗体的亲和力大小进行比较。亲和常数(aK)的值以使血清抗MPO抗体百分结合率下降5 0 %所需的抑制抗原的摩尔浓度的倒数表示。结果 PTU组不同患者血清抗MPO抗体百分结合率下降5 0 %所需的抑制抗原量差异较大,从<0 .1μg ml到>5 0 μg ml不等。亲和常数的范围为<0 .2 8×10 7mol L到>14 0×10 7mol L ,其中位数为0 .75×10 7mol L。血清中抗 MPO抗体的亲和常数与伯明翰小血管炎活动性评分(BVAS)呈正相关(r=0 .5 83,P =0 .0 37) ,与抗体滴度、受累器官数、血红蛋白(Hb)、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、血肌酐(Scr)浓度均没有相关性(P >0 .0 5 )。MPA组不同患者血清抗MPO抗体百分结合率下降5 0 %所需的抑制抗原量差异较PTU组小,从<0 .1μg ml到1.5 6 μg ml不等,亲和常数的范围为8.97×10 7mol L到大于14 0×10 7mol L ,其中位数为5 6 .0×10 7mol L。血清中抗MPO抗体的亲和常数与血?

乙型肝炎病毒特征与肝硬化及原发性肝细胞癌关系的研究进展

据世界卫生组织报道，每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌（HCC）。