肺炎支原体快速培养法与抗原量子点免疫层析法快速检测技术在支原体肺炎诊断中的应用

目的探究肺炎支原体抗原量子点免疫层析法快速检测技术对支原体肺炎(MP)的诊断效果。方法研究对象为2015年6月至2016年6月收入的80例支原体肺炎病人,分别采用肺炎支原体抗原量子点免疫层析法快速检测技术与肺炎支原体快速培养法进行检测。比较两种检测方法的阳性率、特异性、敏感度。结果抗原量子点免疫层析法灵敏度(91.25%)、特异度(96.25%)显著高于快速培养法的灵敏度(81.25%)、特异度(72.50%)(χ2=4.206、30.549,P<0.05)。抗原量子点免疫层析法阳性率(97.50%)与快速培养法阳性率(92.50%)比较差异无统计学意义(χ2=2.632,P>0.05)。结论抗原量子点免疫层析法在灵敏度及特异度更具优势,且检测时间短。

肺炎支原体抗原量子点免疫层析法的建立及初步应用

目的建立肺炎支原体(Mp)抗原量子点免疫层析的检测方法,初步评价其在临床辅助诊断中的应用价值。方法在偶联剂碳二亚胺EDC和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)作用下,使鼠抗人Mp单克隆抗体(针对P1蛋白)与羧基量子点(CdSe/ZnS)偶联,制备量子点标记抗体包被在玻璃纤维膜上,以另一株Mp单抗(针对P1蛋白)作为捕获抗体包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上,建立双抗体夹心量子点免疫层析法检测肺炎支原体抗原。该方法检测130份临床咽拭子标本,并与荧光聚合酶链反应方法相比较。结果经过一系列的反应条件优化,确定偶联剂EDC用量为0.4mg/mL,sulfo-NHS用量为0.58mg/mL,标记抗体浓度1∶100稀释,捕获抗体浓度为0.75mg/mL,反应时间为10min。量子点免疫层析法检测临床标本,阴性符合率为96.4%,阳性符合率为90.0%。结论量子点(CdSe/ZnS)标记免疫层析法检测Mp与荧光聚合酶链反应法具有较好的符合性,该方法操作简便、检测快速、灵敏度高,适用于Mp感染的早期诊断。

肺炎支原体抗原量子点免疫层析法快速检测技术对支原体肺炎(MP)的诊断效果

目的分析肺炎支原体(Mp)抗原量子点免疫层析法快速检测技术对支原体肺炎(MP)的诊断效果。方法以2017年12月-2018年12月间入本院治疗的80例MP患者为研究主体。分成A组和B组,各40例。A组给予Mp抗原量子点免疫层析法检测,B组给予肺炎支原体快速培养法检测。对比检测效果。结果A组的检测阳性率为90.0%,B组为87.5%,对比无差异(P>0.05)。A组的检测敏感度为97.2%,特异度为75.0%,B组分别为77.1%和20.0%(P<0.05)。结论为MP患者行免疫层析法检测可提高灵敏度与特异度,具有检测优势,可推广使用。

新型量子点荧光免疫层析法测定血清淀粉样蛋白A的应用研究

目的探讨新型量子点荧光免疫层析法测定血清淀粉样蛋白A(SAA)的应用。方法采用双抗夹心法结合量子点荧光免疫层析技术制备以二硝基苯酚(DNP)-牛血清白蛋白(BSA)系统为质控线的SAA检测试剂盒。通过鸡IgY-羊抗鸡IgY系统作为对照评价了DNP-BSA系统作为质控线的可行性,并通过优化量子点微球与抗体的偶联条件,进一步提高试剂盒的性能,并对试剂盒的空白限、检出限、线性范围、精密度、准确度、特异度、稳定性,以及临床实际样本测定等方面进行了评价。结果以DNP-BSA系统作为质控线的SAA试剂盒受干扰成分浓度的影响小,稳定性高,热稳定性好。量子点微球与SAA抗体偶联比例为100μg/mg,偶联反应液浓度为25 mmol/L 3-吗啉丙磺酸pH 7.4,与DNP-BSA偶联比例为100μg/mg,偶联反应液浓度为25 mmol/L吗啉乙磺酸pH 6.0时偶联效果最佳。试剂盒最低检出限为0.5 mg/L;线性范围为1~200 mg/L,R2≥0.99;批内精密度变异系数(CV%)≤5.31%,批间精密度CV%≤15%;在低、高浓度的回收率分别为101.42%、98.83%;在血红蛋白浓度≤5 g/L,胆红素浓度≤0.15 g/L,胆固醇浓度≤15 g/L,甘油三酯浓度10 g/L时,SAA的检测结果无干扰;试剂盒在50℃放置21 d,稳定性良好;试剂盒与Roche的SAA电化学发光试剂盒同步检测67例样本结果具有高度一致性。结论研制的SAA检测试剂盒灵敏度、线性、精密度、准确度、特异度及加速稳定性都满足试剂盒的要求,与鸡IgY-羊抗鸡IgY系统相比DNP-BSA系统作为质控线独立性好,测定临床样本准确度和热稳定性更佳。

人肺炎支原体抗原量子点免疫层析法的建立

目的采用量子点标记技术和免疫层析技术,建立人肺炎支原体抗原的检测体系,并对其临床应用进行初步探讨。方法在偶联剂碳二亚胺EDC和N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide,NHS)作用下,使兔抗人肺炎支原体(Mp)多克隆抗体与羧基量子点(Cd Se/Ze S)偶联,制备量子点标记物,以针对Mp P1蛋白的单抗作为捕获抗体,建立双抗体夹心量子点免疫层析法检测肺炎支抗原。该方法检测50份临床咽拭子标本,并与培养法相比较。结果量子点免疫层析法检测临床标本Mp,阴性符合率为96.6%;阳性符合率为100%;最低检出浓度为0.5 ng/m L。结论量子点(Cd Se/Zn S)标记免疫层析法检测肺炎支原体与Mp培养法具有较好的符合性,该方法操作简便、检测快速、灵敏度高,适用于Mp感染的早期诊断。

量子点免疫层析技术在兽药残留快速检测中的应用

近年来,免疫层析技术在动物源食品的现场快速检测中发挥了重要作用,对开展兽药残留高效监管提供了有力保障。量子点作为新型荧光材料,用作免疫层析检测中的标记材料,能够有效提高检测性能,在快速检测技术研究领域具有广阔的应用前景。文章总结了量子点的分类、合成及免疫探针的制备,综述了量子点免疫层析技术在动物源食品兽药残留快速检测中的应用进展,并对量子点免疫层析检测技术在量子点合成、兽药人工抗原及抗体制备方面的研究进行了展望。

量子点微球荧光免疫层析定量检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星

目的建立一种快速定量检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的新方法学。方法以量子点荧光微球为新型标记探针,通过参数优化,制备获得量子点荧光微球免疫层析试纸条;进一步以T/C比值法建立定量检测恩诺沙星的新方法。结果在最优条件下,该试纸条检测缓冲液中恩诺沙星半数抑制浓度为1.04 ng/mL,检出限为0.13 ng/mL;检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的定量检测范围为8.75~560.00μg/kg,半数抑制浓度为72.45μg/kg,加标回收实验显示该方法定量检测组织样本中恩诺沙星的回收率在83.03%~124.00%之间,变异系数小于15.00%,检测15个实际含有恩诺沙星的水产以及畜禽肉组织样本,其结果与液相色谱-串联质谱法检测结果高度一致;此外,加速保存实验结果显示该试纸条在室温下可保存一年。结论本研究以量子点荧光微球为新型标记探针,构建了高灵敏定量检测恩诺沙星的新方法,实现了水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的简单、快速、定量分析。

量子点标记免疫层析技术检测布鲁氏菌病的方法研究

目的通过研究量子点标记免疫层析技术检测布鲁氏菌病抗体,制备量子点免疫层析试纸条,验证快速检测布鲁氏菌病的可行性。方法将蛋白A和布鲁氏菌全菌蛋白分别作为质控线和检测线喷涂在硝酸纤维素膜上,以量子点标记布鲁氏菌全菌蛋白,稀释后喷涂在玻璃纤维素膜上,最后进行组装、切割制成检测用试纸条。应用该试纸条检测布鲁氏菌病患者样本102例,健康人血清47例,以试管凝集试验为对照,比较两组方法的符合率。结果建立的量子点免疫层析试纸条性能较好,布鲁氏菌病抗体的检测敏感性为99.0%,特异度为95.8%,两者符合率为98.0%;将阳性血清稀释至128倍,通过荧光检测仪仍可检测到T线荧光值,该纸条重复性好,储存时间30 d内稳定性较好,其变异系数为4.1%。结论该方法操作简单、快速稳定、灵敏度高、成本低,15 min内完成检测,血清用量低,可实现现场快速检测,在布鲁氏菌病的早期检测中具有良好前景。

基于CdTe量子点测定中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白的免疫荧光层析法

建立了一种基于CdTe量子点标记技术测定中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）的免疫层析法。用水相法制备的CdTe量子点作为荧光探针标记于NGAL的一株单抗，采用双抗体夹心法，制备了检测NGAL的层析试纸条，用于测定NGAL的含量。NGAL的线性范围为41-2050μg·L^-1，检出限为27．35μg·L^-1。对NGAL不同浓度的质控品连续测定10次，测定值的相对标准偏差在3．6％-9．7％之间。方法应用于尿液样品的分析，结果与酶联免疫吸附测定法对照，两种方法所得结果间无显著偏差。

一种基于量子点免疫层析技术的轮状病毒检测方法

轮状病毒感染主要引起婴幼儿腹泻和胃肠炎,每年可导致数百万人住院治疗,对轮状病毒的快速测定是及时制定针对性治疗方案的关键,但现有检测技术存在或操作繁琐、耗时长,或灵敏度低、无法定量的问题。本研究将羧基化量子点微球与轮状病毒标记抗体Ab2偶联制备荧光标签,并喷涂在结合垫上,以轮状病毒捕获抗体Ab1和羊抗鼠IgG包被硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane,NC膜)分别作为检测线和质控线,将样品垫、结合垫、NC膜和吸水纸组装到PVC底板上,并切割成3 mm宽的试纸条。采用轮状病毒抗原检测国家参考品和临床样本,对所制备试纸条的特异性、灵敏度、稳定性和有效性进行考察。试纸条最低检测限为86.46 pg/mL,与柯萨奇病毒A16型、肠道腺病毒71型、大肠杆菌、副伤寒甲型沙门氏菌、副伤寒乙型沙门氏菌、副伤寒丙型沙门氏菌、痢疾志贺氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌及金黄色葡萄球菌均无交叉反应,常温保存2个月未造成其灵敏度和特异性下降,检测临床样本的结果与商品化胶体金试纸条方法符合率为100%。本研究所建立的量子点免疫层析方法灵敏度高、特异性强、操作方便、结合便携式荧光检测设备可实现定量分析,可用于粪便等样本中轮状病毒的快速和定量检测。

基于定向标记抗体的虾原肌球蛋白量子点免疫层析方法的建立及应用

目的利用量子点定向标记的单克隆抗体,建立竞争荧光免疫层析方法快速检测食品中虾原肌球蛋白(tropomyosin,TM)。方法使用杂交瘤细胞株免疫Balb/c小鼠,从小鼠腹水中制备得到单克隆抗体,将氨基化量子点通过具有抗体Fc端生物亲和性的重组蛋白共价固定于抗体Fc端。以量子点定向标记抗体作为检测抗体,以南美白对虾中的TM作为检测靶标,基于竞争法原理组装免疫层析试纸条。在对条件参数进行优化后,应用于市售食物样品中TM的检测。结果所建立方法的灵敏度为0.96μg/mL(%P=50%),检出限为0.15μg/mL(%P=20%),检测结果与文献中报道的相当。试纸条批内差和批间差的变异系数分别为6.81%~8.86%和8.27%~14.67%,均小于15%,在可接受范围之内。同时试纸条显示出了良好的特异性与准确性,实际样品的检测结果与过敏原标签一致。结论本研究所建立的荧光免疫层析试纸条检测方法适用于TM的快速、高效检测。

基于量子点标记技术的免疫层析法检测新型冠状病毒N蛋白IgG抗体研究

背景基于目前新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19),早诊断、早隔离、早治疗是防控传染的重要方法。建立方便快捷的免疫层析检测技术,对于防控SARS-CoV-2的传播十分必要。目的建立基于量子点标记技术的免疫荧光层析法检测抗SARS-CoV-2 N蛋白IgG抗体的方法,判断被检测者是否感染过SARS-CoV-2或者是否接种过SARS-CoV-2灭活疫苗。方法2020年8月将制备好的鼠抗人二抗和抗N蛋白抗体固定至硝酸纤维素(NC)膜上,分别作为检测线(T)和质控线(C),然后将量子点标记的SARS-CoV-2 N蛋白均匀喷洒在玻璃纤维上,干燥后组装、切割、包装成试纸条。用该试纸条分别检测35例COVID-19患者和50例健康人的血清,以酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒初筛结果作为对照,计算量子点荧光免疫层析法的检测特异度和灵敏度,并利用N蛋白抗体标准品检测试纸条灵敏度。结果本研究制备的试纸条特异度为100.00%,灵敏度为94.29%,灵敏性为8.53~17.06 ng/ml抗体浓度。结论采用量子点标记技术检测血清中的抗N蛋白IgG抗体,操作简单、快速,灵敏度及特异度强。

一种新型定量检测恩诺沙星量子点免疫层析方法的建立

恩诺沙星作为一种应用较为广泛的抗生素,因在实际抽检中出阳率较高引起了广泛的重视。本研究建立了一种可以快速定量检测恩诺沙星,采用量子点进行标记和示踪的免疫层析方法。通过对新型的纳米荧光材料量子点结合抗原抗体等活性材料的技术研究、样本前处理试剂的研发、浓度的筛选优化等技术实现量子点材料与食品基质的配适,建立定量检测恩诺沙星免疫层析的平台。通过对试剂盒整体的相关优化,本检测方法线性范围为2~1000 ng/m L,最低检测限为1.80 ng/m L,精密度可控在10%以内,热加速稳定性为37℃可稳定放置10 d,性能优越。与传统液相色谱方法比较,简便快捷,整体检测时间可控在20 min内,检测结果相关性较好,相关系数为0.98。本研究弥补国内对量子点与免疫层析技术相结合定量检测食品类抗生素残留方面研究的空缺,可实现大批量现场原材料的快速筛查,推动食品快检技术的发展。

一种基于量子点检测抗CCP抗体的免疫荧光层析法

抗环瓜氨酸多肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)抗体是类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)早期诊断的重要生物标志物.为了实现对RA的早期诊断,本研究建立了一种基于CdTe量子点标记技术检测抗CCP抗体的免疫荧光层析法.将CCP多肽与小牛血清白蛋白(bovineserum albumin,BSA)连接,再将CCP-BSA和羊抗鼠IgG分别在硝酸纤维素膜(nitrocellulosemembrane,NC膜)上划线,作为检测线(test line,T线)和质控线(control line,C线).制备量子点并在量子点上标记鼠抗人IgG,喷在玻璃纤维上并烘干,最后组装大卡、切割并封装制成检测试纸条.应用该试纸条检测了RA患者及健康人血清临床样本200份,以酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)为对照,计算免疫荧光层析法的检测灵敏度和特异性.结果显示,建立的量子点免疫荧光层析试纸条检测抗CCP抗体的灵敏度为97.5%,特异性为95.8%.该方法操作简单、快速,可实现床旁检测(point-of-care testing,POCT),能应用于RA的早期诊断.

同位素稀释液相色谱-串联质谱法和量子点荧光免疫层析法快速测定花生油中黄曲霉毒素B_(1)的比较

采用同位素稀释液相色谱-串联质谱法(国标法)和量子点荧光免疫层析法检测花生油中黄曲霉毒素B;的含量。样品经提取、净化后,采用国标法和量子点荧光免疫层析法进行检测比较。结果表明,这2种检测方法的回收率分别为83.2%~94.6%和78.6%~88.3%,精密度为1.5%~3.5%和1.6%~3.8%,满足GB/T 27404—2008中附录F对回收率的要求,两种方法的相对偏差为0.05%~9.76%,将量子点荧光免疫层析法的检测结果与国标法的结果进行T检验,结果无显著性差异,准确度高。量子点荧光免疫层析法的灵敏度为92.1%,假阴性率为7.9%。可见量子点荧光免疫层析法可应用到花生油中黄曲霉毒素B;现场监管中,且有益于提高其检测效率和监管效率。

基于上转发光和量子点免疫层析技术的牛免疫球蛋白G检测方法的研究与评价

为了建立一种快速检测牛免疫球蛋白G(IgG)的方法,试验从牛血清中提取和纯化IgG,用微量紫外分光光度计检测浓度,并每2周1次、分4次用牛IgG分别免疫2只大耳白兔制备兔抗牛IgG多克隆抗体,用酶联免疫吸附试验检测抗体效价。分别以上转发光颗粒(UPT)和量子点(QD)作为生物示踪物,结合双抗体夹心法和双抗原竞争法原理制备4种试纸条,分别为UPT-LF-夹心法、UPTLF-竞争法、QD-LF-夹心法和QD-LF-竞争法试剂条;4种试纸条层析膜质控带均为2 mg/mL羊抗兔抗体,夹心法和竞争法检测带分别为3 mg/mL兔抗牛IgG多克隆抗体和2 mg/mL牛IgG;配制0,0.1,0.3,0.5,0.7,1,3,5,7,10,30,50,70,100μg/mL浓度的牛IgG标准品,分别用4种试纸条进行检测,对试纸条的检出限、线性和精密性进行研究,筛选最优试纸条。用筛选到的最优试纸条和折光仪同时检测52份乳样中牛IgG含量,并抽取7份乳样用液相色谱进行检测。结果表明:提取的牛IgG浓度为67.6 mg/mL,2份血清中兔抗牛IgG多克隆抗体浓度分别为34 mg/mL和70 mg/mL,兔抗牛IgG多克隆抗体效价均为1∶102400。UPT-LF-夹心法、UPT-LF-竞争法、QD-LF-夹心法和QD-LF-竞争法试纸条的检出限分别为0.3,3.0,0.1,0.5μg/mL,线性拟合的相关系数(R2)分别为0.976,0.990,0.945,0.974,4种试纸条的精密性由大到小依次为UPT-LF-夹心法、UPT-LF-竞争法、QDLF-夹心法和QD-LF-竞争法,QD-LF-竞争法试纸条为最优的试纸条。折光仪和QD-LF-竞争法试纸条检测50份牛初乳样中牛IgG含量分别为20~80 mg/mL和50~230 mg/mL。7份乳样的QD-LF-竞争法试纸条与液相色谱检测牛IgG含量的相关性高达0.9759,而折光仪与液相色谱检测牛IgG含量的相关性仅为0.8274。说明与折光仪相比,QD-LF-竞争法试纸条检测牛IgG含量的准确性更高。

白细胞介素-6量子点荧光免疫层析法的建立及性能验证

目的研发出快速检测白细胞介素(IL)-6的量子点荧光免疫层析法试剂盒。方法通过量子点荧光材料标记IL-6抗体,研发出一种能快速定量检测IL-6浓度的量子点免疫荧光层析法试剂盒,验证其灵敏度、回收试验、精密度、特异度、稳定性及其与贝克曼化学发光IL-6检测试剂盒的相关性。结果试剂盒线性范围为10~4000 pg/mL,试剂盒决定系数R^(2)≥0.950;最低检出限为2 pg/mL;在低、中、高浓度范围内的回收率均值分别为95.68%、101.23%、104.45%;批内精密度的变异系数(CV)为2.21%~3.93%,批间精密度的CV为2.42%~5.36%;特异度试验中交叉反应率均小于0.1%。结论该研究自制的试剂盒灵敏度、准确性、精密度、特异度及稳定性都较好,能够准确、快速地完成临床样品IL-6浓度的定量检测。

同位素稀释液相色谱-串联质谱法和量子点荧光免疫层析法快速测定谷物中呕吐毒素的比较研究

采用同位素稀释液相色谱-串联质谱法和量子点荧光免疫层析法检测玉米粉和小麦粉中呕吐毒素的含量。样品经提取、净化后,采用国标方法和量子点荧光免疫层析法检测比较。结果表明,2种检测方法的回收率分别为92.9%~98.0%及85.5%~101.1%,精密度为1.3%~3.4%及0.4%~3.0%,满足GB/T 27404—2008中附录F对回收率的要求,两种方法的相对偏差为0.16%~4.75%,检测结果与国标方法的结果进行T检验,结果无显著性差异,准确度高。量子点荧光免疫层析法的灵敏度为98.1%,假阴性率为1.9%。通过与同位素稀释高效液相色谱法的比较研究,确定量子点荧光面应层析法测量呕吐毒素的可靠性及可行性,可见量子点荧光免疫层析法应用到现场监管中,有益于提高检测效率和监管效率。

基于量子点微球荧光免疫层析法定量检测克百威的研究

建立了一种定量检测克百威的量子点微球荧光免疫层析法,优化了抗体标记量、探针体积以及抗原喷膜浓度。通过荧光试纸条检测仪读取试纸条上检测线和质控线的信号强度,以克百威标准品的浓度为横坐标,以检测线和质控线信号强度的比值为纵坐标建立标准曲线。结果表明,方法的定量检测范围为0.05~2.00 ng/mL,检测限为0.025 ng/mL,半抑制率为0.506 ng/mL。本方法具有简单、灵敏度高、快速和可定量等特点,适用于大批量样品中克百威的筛查。

量子点荧光微球免疫层析试纸条定量检测恶性疟原虫

以羧基化Cd Te/Zn Se量子点荧光微球为荧光标记物,采用1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺（EDC）法偶联抗恶性疟原虫富组氨酸蛋白（Pf）单克隆抗体制备荧光探针;以羊抗恶性疟原虫组氨酸多克隆抗体和驴抗鼠二抗分别喷涂硝酸纤维膜,形成试纸条检测线和质控线,建立了免疫层析试纸条定量检测血清中恶性疟原虫的方法。所使用的羧基化量子点荧光微球的荧光强度为单个量子点的2800倍。实验结果表明,该荧光试纸条定量检测血清中恶性疟原虫线性范围为5.8-8010 Parasite/μL,最低灵敏度达到5.8 Parasite/μL,单个样品检测时间只需15 min。加标回收实验显示,试纸条批内回收率为93.0%-111.8%,批间回收率为98.3%-115.1%,且批内、批间的相对标准偏差均小于5%。