基于纳米金与碳纳米管-纳米铂-壳聚糖纳米复合物固定癌胚抗原免疫传感器的研究

采用纳米金(nano-Au)、多壁碳纳米管-纳米铂-壳聚糖的纳米复合物(MWNT-Pt-CS)及电子媒介体硫堇(Th)固载抗体制得高灵敏癌胚抗原免疫传感器.首先,于壳聚糖溶液中用NaBH4还原H2PtCl6,并将多壁碳纳米管分散于其中制得碳纳米管-纳米铂-壳聚糖纳米复合物,并将其滴涂在玻碳电极上成膜;然后,吸附电子媒介体硫堇制得硫堇/碳纳米管-纳米铂-壳聚糖(Th/MWNT-Pt-CS)修饰电极.利用壳聚糖和硫堇分子中大量的氨基固定纳米金并吸附癌胚抗体(anti-CEA);最后,用辣根过氧化物酶(HRP)封闭活性位点从而制得高灵敏电流型免疫传感器.在优化的实验条件下,该传感器响应的峰电流值与癌胚抗原(carcinoembryonic antigen)浓度在0.5～10和10～120ng/mL的范围内保持良好的线性关系,检测限为0.2ng/mL.

HSP65-MUC1/HSP65抗体免疫复合物对人树突状细胞的活化作用

目的 :探讨免疫复合物能否诱导树突状细胞的活化与成熟。方法 :用免疫复合物刺激来自人外周血经细胞因子 IL - 4和 GM- CSF诱导的未成熟的树突状细胞 ,观察免疫复合物对未成熟树突状细胞的活化与成熟的影响。结果 :HSP6 5 - MUC1/ HSP6 5免疫复合物与 HSP6 5 - MU C1抗原或 HSP6 5抗体相比较 ,能够显著地活化树突状细胞 ,使其表面的协同刺激分子 CD86的表达显著上调 ,为激活细胞毒性 T淋巴细胞提供第二信号 ,这一结果说明免疫复合物具有交叉递呈的作用 ;同时 ,加入免疫复合物的树突状细胞培养上清中 IL - 6和 TNFα分泌量明显增加。结论 :免疫复合物能够诱导树突状细胞的活化与成熟 ,免疫复合物具有交叉递呈的作用。

感染弓形虫家兔血清循环抗原、免疫复合物及抗体消长规律的实验研究

本文应用酶联免疫吸附试验(ELISA)观察人工感染弓形虫家兔血清循环抗原(CAg)、免疫复合物(CIC)及抗体(CAb)的消长规律。发现在临床病程中,CAg消长情况与文献已证实的弓形虫的增殖消长情况相一致。对弓形虫活动性感染具有最好的诊断价值。感染兔临床各期的不同水平CAg、CIC及CAb构成的综合指标显示不同的免疫学特征,可用于弓形虫病临床分期。本文根据实验结果对血清学试验检测CAg、CIC及CAb的诊断价值及指标作了系统的评价。

新城疫疫苗(抗原)抗体复合物诱导鸡免疫应答

本文报道了用新城疫疫苗 (抗原 )与新城疫抗血清制备的新城疫疫苗 (抗原 )—抗体复合物诱导鸡的免疫应答反应试验。结果为 1日龄和 7日龄鸡接种新城疫灭活疫苗 (抗原 )—抗体复合物 (IV -Ab -C)和新城疫活疫苗 (抗原 )—抗体复合物 (V -Ab -C)后血凝抑制 (HI)抗体效价都很低 (3log2以下 ) ,但加强免疫一次后HI抗体效价迅速升高 ,达到 4log2以上。 1日龄接种新城疫病毒IV -Ab -C 2 8d后强毒攻击保护率达 91.6 7%— 10 0 %。以上结果表明 ,新城疫疫苗 (抗原 )—抗体复合物不能诱导 1日龄和

Monte Carlo模拟研究抗体-抗原复合物生长的标度行为

通过Monte Carlo模拟方法对抗体-抗原复合物在等活性和非等活性条件下生长的标度行为进行了研究.模拟所用算法的有效性通过在等活性条件下的模拟结果与解析结果之间的一致性得以证明.在模拟中,主要考察了抗体-抗原复合物的数量分布函数、重均聚合度以及特征关联长度在临界点附近的标度行为,给出相应的标度指数,并以其检验溶胶-凝胶相变的广义标度律.研究结果表明,非等活性对抗体-抗原复合物的生长具有显著影响,可为临床免疫分析提供相应的理论线索.

兽用抗原-抗体复合物疫苗研究概况

综述了近年来国内外抗原-抗体复合物疫苗研究进展,着重介绍了兽用抗原-抗体复合物疫苗的优点、制备影响因素、作用机制以及实际应用情况,并对这类兼有药物作用的治疗型疫苗在我国的发展前景进行了评述。

抗原—抗体复合物诱发的免疫抑制(摘要)

脂多糖（LPS）激活的脾细胞培养物中加入免疫复合物〔马红血球（HRC）和抗马红血球抗体〕能选择性地抑制抗HRC的空斑形成细胞（PFC）反应,但不影响抗绵羊红细胞（SRC）的PFC。其抑制程度与免疫复合物的浓度呈正相关。F（ab′）2·HRC复合物的抑制能力与完整IgG·HRC相仿;后者加蛋白A后并不影响该免疫复合物的抑制程度。结果提示:免疫复合物对激活的多克隆B细胞的抑制是通过抗体轻链和（或）重链的恒定区引起的,与Fc段无关。

开放体系中抗体-抗原复合物生长的Monte Carlo模拟

为了研究更接近于真实的免疫反应系统中抗体-抗原复合物的生长,提出了一个开放的抗体-抗原系统模型,在这一体系中抗体、抗原分子能以一定的方式产生并参与反应.通过Monte Carlo模拟方法分别考察了线性体系和支化体系的演化过程,所采用的算法包含了一个自洽的叠代方法计算等待时间,以此算法为基础,研究了抗体和抗原分子不同输入方式对复合物数均和重均聚合度的影响,发现不同体系在演化过程中的相关统计特征都可以反映输入方式的变化,因而可以通过观测平均物理量来识别输入方式.

免疫荧光双标记技术检测胎盘HBsAg-抗-HBs复合物

目的 探讨乙肝病毒 (HBV)以何种形式感染胎盘滋养层细胞 .方法 通过免疫荧光双标记技术检测 12例血清HBs Ag阳性母亲的胎盘滋养层细胞 HBs Ag-抗 - HBs复合物 .结果 血清学 HBs Ag阳性母亲胎盘滋养层细胞中存在 HB-s Ag-抗 - HBs复合物 .结论 提示 HBV可能通过 HBs Ag与抗 - HBs结合成复合物的方式进入胞内 ,导致胎盘屏障的第一层细胞受到

Hsp70-肿瘤抗原肽复合物修饰的DC疫苗体内外特异性抗瘤作用

目的 :探讨树突状细胞 (DC)及Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的体内外特异性抗瘤作用。方法 :采用一定的生化技术 ,从H2 2肝癌细胞中提取肿瘤抗原肽 ,并在体外与Hsp70进行结合 ;采用细胞培养技术 ,培养rmGM CSF、rmIL 4诱导的小鼠骨髓细胞 ,体外获取大量的DC ,后者经Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后刺激小鼠脾淋巴细胞 ,通过MTT法进行检测淋巴细胞的激活 ;收集上述刺激传代培养的淋巴细胞 ,检测其对H2 2瘤细胞和艾氏腹水癌细胞的杀伤功能 ;采用H2 2瘤细胞肌肉接种和H2 2瘤细胞、艾氏腹水癌细胞腹腔接种 ,对接种小鼠给予经体外修饰的DC回输 ,观察其抑制肿瘤的效果。结果 :Hsp70 肿瘤抗原肽复合物可使DC成熟 ,大量分泌IL 12、TNF α、IL 1β等细胞因子 ,并能够使DC激活小鼠脾淋巴细胞 ;激活后传代培养的淋巴细胞对H2 2瘤细胞能够特异性地杀伤 ,而对艾氏腹水癌细胞无效 ;经Hsp 70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的DC可作为一种有效的瘤苗 ,体内能特异性地抑制小鼠H2 2肿瘤生长。结论 :Hsp70 肿瘤抗原肽复合物能够很好地修饰体外诱导获取的DC ,使后者成为一种有效的瘤苗 ,体外能够特异性地激活淋巴细胞 。

低毒力新城疫抗原抗体复合物疫苗研究

用低毒力新城疫病毒La Sota株作为复合物疫苗抗原,与新城疫特异性中和抗体混匀配制了不同比例的8种复合物疫苗,用1日龄SPF雏鸡进行免疫效果试验。试验1组～8组分别免疫复合物疫苗1～8,试验9组免疫常规新城疫活疫苗,试验10组为空白对照组。免疫后3周采血测定HI抗体效价,同时用新城疫强毒北京株F48E9攻击。试验1组～10组HI抗体效价分别为23.6、23.1、22.3、24.13、24.85、25.0、25.0、24.5、25.1、22.14。攻毒后1组～10组鸡的死亡率分别为30%、50%、90%、10%、0%、0%、0%、0%、0%、100%。结果表明,低毒力新城疫病毒LaSota株与特异性抗体制备的复合物疫苗,可以减轻疫苗的毒副作用,提高疫苗的安全性,其免疫效果比常规活苗好。

腰椎间盘突出症突出髓核中抗原抗体复合物测定的临床意义

目的 :探讨抗原抗体复合物在突出髓核中的分布及临床意义。方法 :应用免疫酶组织化学染色的方法 ,对 31例腰椎间盘突出症患者的突出髓核中抗原抗体复合物进行检测 ,与 2 0例正常椎间盘作对照并结合临床资料分析其意义。结果 :在突出髓核的标本中可在髓核细胞膜周围观察到显示阳性的棕色沉淀物存在 ,而在正常椎间盘对照组中却未见阳性显示。突出型及脱垂游离型髓核中 6 8.4 2 %显示为强阳性 ,31.5 8%显示为阳性 ,膨隆型髓核中 5 8.33%显示为阳性 ,4 1.6 7%显示为阴性。两组之间 P<0 .0 5 ,有统计差异。结论 :在突出髓核组织普遍存在抗原抗体复合物 ,而健康椎间盘中却不含有此免疫复合物。抗原抗体复合物阳性与强阳性表达与髓核暴露于机体免疫系统的程度相关 ,临床疼痛症状的程度与自身免疫反应的程度相关。髓核突出后引起的自身免疫反应是导致神经根慢性炎症的重要原因。

不同乙型肝炎表面抗原配制的免疫复合物的免疫原性

目的研究不同乙型肝炎表面抗原配制的免疫复合物(IC)的免疫原性,并进一步优选治疗性乙型肝炎疫苗最佳抗原。方法用不同重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)与不同的乙型肝炎表面抗体(anti-HBs)制备IC,分别免疫BALB/c小鼠,检测体液免疫及细胞免疫应答水平。结果IC诱生的抗-HBs效价、抗-HBsIgG2a/IgG1的比值及IFN-γ形成细胞数,YHB-IC组总体上略高于CHO-IC组,但差异无显著意义。结论IC的免疫效果优于单独HBsAg;不同乙型肝炎表面抗原配制的IC之间免疫原性差异无显著意义。

流感裂解疫苗H3N2-抗H3N2免疫原性复合物滴鼻诱导小鼠黏膜免疫应答的研究

目的研究流感裂解病毒疫苗抗原抗体复合物滴鼻诱生小鼠黏膜免疫应答。方法分别以15μgH3N2、H3N2- CpG、H3N2-鼠抗H3N2及H3N2-PEG滴鼻免疫小鼠,检测肺泡灌洗液抗H3N2 IgA、血清抗H3N2 IgG效价。取免疫小鼠脾细胞,体外抗原刺激,用定量酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液IFN-γ及IL-4分泌水平。结果H3N2-抗H3N2免疫原性复合物诱生的抗H3N2 IgA效价明显高于H3N2单独免疫组(P<0．01),而与H3N2-CpG组无显著性差异。此外,复合物诱生的血清抗H3N2也高于H3N2单独免疫组(P<0．05)。H3N2-CpG组诱生的IFN-γ水平明显升高,而其他组之间无明显差异。结论流感病毒血凝素抗原抗体复合物、血凝素抗原加CpG佐剂可以诱生较强的局部黏膜免疫和体液免疫。这两组诱生的IgA效价均明显高于H3N2单独免疫组。另外,H3N2-CoG组小鼠的脾脏细胞经特异性抗原诱导后培养上清液中的IFN-γ水平明显升高。

小鼠肺腺癌热休克蛋白70-抗原肽复合物的纯化

目的 探索肿瘤热休克蛋白 70抗原肽复合物 (HCA70 )分离、纯化的方法。方法 采用低渗、反复冻融匀浆、ADP -Agarose亲和层析结合DEAE离子交换层析 ,从体外培养的小鼠肺腺癌细胞 (LA - 795)中纯化HAC70 ;通过SDS -PAGE电泳、Westernblot检测、小鼠移植瘤动物实验证实所获得蛋白是否为HAC70。结果 获得蛋白分子量为 70kD左右 ,与抗HSP70特异单抗结合 ,用此蛋白主动免疫的小鼠可抵抗LA795细胞的攻击 ,获得了高纯度的HAC70。结论 采用ADP -Agarose亲和层析结合DEAE离子交换层析可获得高纯度的HAC70。

鸡传染性喉气管炎抗原抗体复合物疫苗的研究

用传染性喉气管炎病毒K317株作为复合物疫苗抗原,与传染性喉气管炎抗体配制不同比例的5种抗原抗体复合物疫苗,用1周龄SPF雏鸡进行免疫效果试验。结果表明,传染性喉气管炎病毒K317株与特异性抗体制备的复合物疫苗,可以明显降低疫苗免疫接种引起的毒副作用,复合物疫苗安全性高,免疫效果总体上较ITLK317株常规活苗更好。

3-苯氧基苯甲酸纳米抗体免疫磁珠的制备及其鉴定

基于纳米抗体(nanobody,Nb)的免疫磁珠,因其独特的性能在免疫检测、细胞分离、生物大分子纯化等领域受到广泛关注。但目前国内外缺乏对基于Nb与生物源性磁颗粒(bacterial magnetic particles,BMPs)和化学合成的磁颗粒(magnetic particles,MPs)构建的免疫磁珠性能差异的研究。本研究以3-苯氧基苯甲酸(3-phenoxybenzoic acid,3-PBA)Nb作为研究对象,通过基因工程技术在其C-端引入半胱氨酸(cysteine,Cys),获得Nb-6His-Cys重组蛋白质。利用双功能交联试剂3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithiol)propionate,SPDP)将Nb-6His-Cys分别与BMPs和MPs进行偶联获得免疫磁珠,评价2种免疫磁珠的性能差异。结果表明,SPDP能够分别将Nb-6His-Cys定向固定在BMPs和MPs表面上;磁珠表征发现,BMP-Nb的水合粒径、电位和分散性均优于MP-Nb(BMP-Nb的水合粒径为68.43±24.54,电位-27.89 mV,分散性0.57;MP-Nb的水合粒径为27.31±5.28,电位-26.12 mV,分散性0.44);通过差值法计算发现,BMPs可展示更多的Nb-Cys(1 mg的BMPs上能够展示697±16μg 3-PBA Nb-Cys,1 mg的MPs上能够展示569±18μg 3-PBA Nb-Cys)。综上研究表明,Nb和BMPs构建的免疫磁珠性能优于Nb和MPs构建的免疫磁珠,本实验为合理选择免疫磁珠检测方法提供了理论依据,为实现3-PBA的环境快速检测提供物质支撑。