建立结核分枝杆菌抗原K6IFN-γ ELISPOT用于结核病辅助诊断

目的:建立结核分枝杆菌抗原K6作为刺激源的IFN-γELISPOT检测方法,并初步评价该方法用于结核病辅助诊断价值。方法:结核病患者和非结核性肺部相关疾病患者外周血单核细胞(PBMC)分别加入预包被ELISPOT板对应孔,分别加入抗原K6、T-SPOT.TB试剂盒抗原A和B,每个PBMC样品设阴性对照孔和阳性质控孔。37℃、5%CO2培养20～24小时,弃细胞,依次加入酶标检测抗体、底物显色获得斑点。ELISPOT读板仪进行斑点计数和分析。结果:K6和T-SPOT.TB试剂盒检测敏感度分别为80.0%和85.9%、特异度分别为83.9%和73.2%,两者比较差异均无统计学意义。K6作为刺激原的IFN-γELISPOT诊断结核病阳性预示值为88.3%,阴性预示值为73.4%。结核病组,抗原B刺激PBMC分泌IFN-γ的细胞斑点数(SFC)平均值分别高于抗原A和K6(P=0.011和P=0.004),抗原A和K6刺激PBMC分泌IFN-γ的SFC平均值比较差异无统计学意义(P>0.05)。非结核性肺部相关疾病组,抗原A、抗原B和K6刺激PBMC分泌IFN-γ的SFC平均值两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:K6可作为结核病IFN-#ELISPOT诊断候选抗原之一。

比较结脑病人血液和脑脊液IFN-γ的表达水平

目的采用结核分枝杆菌特异性IFN-γ酶联免疫斑点(Elispot)检测结核性脑膜炎病人外周血和脑脊液细胞中IFN-γ的表达,评价该方法在结核性脑膜炎诊断中的应用情况。方法采用自建立的结核分枝杆菌特异性IFN-γElispot检测技术(简称Elispot)检测16例结核性脑膜炎病人PBMC和脑脊液中结核菌特异性IFN-γ水平。结果 ELISPOT检测两种细胞分别在ESAT6蛋白和Pool A多肽的作用下,释放的IFN-γ水平均没差别(P>0.05);两种标本ELISPOT检测阳性率没有差异(P>0.05)。结论建立的结核特异性的Elispot检测诊断方法适用于脑脊液标本的检测,并且其检测效果与外周血细胞的检测是基本一致。