建立一种用重组蛋白检测抗口蹄疫病毒抗体的间接ELISA方法

目的研究以重组蛋白作为包被抗原检测口蹄疫病毒(FMDV)感染后的动物血清中特异性抗体的可能性,为建立一种非病毒颗粒的ELISA检测试剂盒提供实验依据。方法利用自行构建表达的O型口蹄疫病毒VP1表位肽重组蛋白(VP1epi)作为包被抗原,采用间接ELISA方法确定抗原的最佳工作浓度和包被方法,优化各项实验条件,并以FMDV感染后的豚鼠血清作为标准阳性血清确定ELISA方法的特异性和灵敏度。结果FMDV感染后的阳性豚鼠血清可以很好地识别VP1epi重组蛋白,用此蛋白包被检测抗FMDV抗体的灵敏度可达1∶3200,并证明所检测的抗体是FMDV特异性的。结论VP1epi重组蛋白可以替代FMDV颗粒用于建立检测抗FMDV抗体的ELISA试剂盒。

抗口蹄疫病毒单克隆抗体1C7重轻链可变区基因的克隆及序列分析

应用分子生物学技术 ,从分泌抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞 1C7中提取总RNA ,经反转录 ,PCR扩增及克隆 ,分别得到VH 基因及VL 基因。序列测定结果表明 :1C7的VH 基因为 36 8bp ,VL 基因为 32 3bp。用NCBIGenBank分析表明 ,VH 和VL 均符合小鼠抗体可变区特征 ,为功能性重排的抗体可变区基因。根据Kabat分类体系 ,1C7的VH 基因中的VH基因片段隶属于抗体重链第 7183家族 ,其VL 基因中的VL基因片段隶属于抗体K轻链 2 0家族 ,VH 基因由VH76_1BG_DFL16 .1_JH4重排而形成 ,VL 基因由VKbw2 0_JK2重排而形成。 1C7的VH 和VL

金丝桃素对口蹄疫病毒的体外抗病毒实验

本文报道了金丝桃素体外抗口蹄疫病毒(FM DV)的研究结果。采用双抗体捕获抗原法、病毒滴度测定、M TT法、组织细胞培养等方法均检测到抗病毒作用。结果显示:金丝桃素在BHK-21细胞感染FM DV前、后及同时加入,都有明显抑制细胞病变的作用。金丝桃素使FM DV的TC ID50从8.5下降到6.25。双抗体捕获抗原法检测到金丝桃素有效抑制FM DV和BHK-21细胞的吸附、融合,抑制率可达59.72%。研究结果提示:金丝桃素在体外有抗口蹄疫病毒作用,抑制口蹄疫病毒与宿主细胞的吸附、融合是抗病毒的重要途径之一。