抗噬菌体菌株C224发酵生产2KG的条件试验

以ZKG生产菌株球状节杆菌K1022为出发菌株,选育出的抗噬菌体菌株C224发酵条件试验的实验结果表明:C224菌能利用淀粉水解糖、葡萄糖酸钙、葡萄糖发酵产生2KG;以葡萄糖为原料发酵生产2KG的条件为:接种量8％以上,250mL摇瓶装量20mL,31℃265r/min,振荡培养72h;发酵最佳配比组成为:葡萄糖18％,玉米浆1.65％,尿素0％,KH_2PO_4 0.0015％,CaCO_3 5％。

抗噬菌体嗜热链球菌突变菌株Streptococcus thermophilus-21UD的选育

以高密度噬菌体培养处理嗜热链球菌菌株,筛选出1株噬菌体抗性菌株S-18,但其产酸、产黏、产香能力不如原菌株。通过照射距离20cm,照射时间60s的紫外线诱变和DES振荡70min的复合诱变,得到SUD-21菌株,其产酸力较敏感菌株提高了0.5%,产黏性提高了0.8%,产乙醛能力提高了0.2%,产丁二酮能力提高了0.1%,且具有遗传稳定性和抗109pfu/mL噬菌体浓度的能力。

抗噬菌体保加利亚乳杆菌突变菌株L.actobacillus burglarious-23UN的选育

在酸奶发酵生产过程中,易遭受噬菌体的感染,使生产不能进行。以高密度噬菌体培养处理保加利亚乳杆菌菌株,筛选出1株噬菌体抗性菌株L-13,但其产酸、产黏、产香能力不如原菌株。通过照射距离20 cm照射时间60 s的紫外线诱变和NTG振荡70 min的复合诱变,得到LUN-23菌株,其产酸力较敏感菌株提高了2.6%,产粘性提高了2.2%,产乙醛能力提高了1.1%,产丁二酮能力提高了3.8%,且具有遗传稳定性和抗109pfu/mL噬菌体浓度的能力。

2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌Ac9抗噬菌体菌株的选育

以2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌Ac9为出发菌株,采用紫外线诱变与添加噬菌体进行筛选相结合的方法,获得了两株抗性菌株Au4-2和Af3。在种子培养基中含有噬菌体的条件下,31℃,摇瓶培养24h,抗性菌株Au4-2与Af3的菌体生长光密度值OD650×20分别为0.74,0.55。镜检显示菌体量多,呈短杆状;而对照菌株Ac9的菌体光密度值则为0.14,镜检显示菌体量少,呈球状。在发酵培养基中添加噬菌体的条件下,31℃,摇瓶培养72h,抗性菌株Au4-2与Af3产酸分别可达15.45g/100mL,14.55g/100mL;而对照菌株则几乎没有产酸。

2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌荧光假单胞菌A46抗噬菌体菌株的选育

从2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)A46的异常发酵液中分离到1种噬菌体,将其命名为KS461。透射电镜观察表明,KS461呈近球形,直径为52nm。以荧光假单胞菌A46为出发菌株,利用紫外诱变的方法,获得了4株对噬菌体KS461具有抗性的2-酮基-D-葡萄糖酸高产菌株,并研究了这些变异株的遗传稳定性。研究结果表明,经8次传代,这些变异株对噬菌体的抗性及其发酵产酸能力没有改变。

2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌球状节杆菌K1022抗噬菌体菌株的选育

从 2 酮基 D 葡萄糖酸产生菌球状节杆菌K10 2 2的异常发酵液中分离到 3种噬菌体 ,分别将其命名为KS2 11、KS2 12和KS2 13。采用紫外诱变或自然选育的方法 ,获得了 6株具有抗噬菌体能力的 2 酮基 D 葡萄糖酸高产菌株。研究了抗株C2 2 4和K2 32的遗传稳定性 ,并在 5 0kL的发酵罐上进行了发酵生产试验。结果表明 ,经多次传代 ,菌株C2 2 4和K2 32对噬菌体的抗性及其发酵产酸能力没有改变 。

抗噬菌体菌株荧光假单胞菌A46在D-异抗坏血酸钠工业生产中的应用研究

荧光假单胞菌A4 6是通过紫外线诱变K10 0 5菌株所得到的一株抗噬菌体菌株。在噬菌体存在的情况下 ,使用菌株A4 6和K10 0 5在 50kL的发酵罐上进行了 2 酮基 D 葡萄糖酸的发酵生产。结果表明 ,荧光假单胞菌A4 6对噬菌体的抗性稳定 ,其发酵周期短 ,发酵转化率高 ;经过多次传代 ,荧光假单胞菌A4 6对噬菌体的抗性及其发酵生产 2 酮基 D 葡萄糖酸的能力没有改变 ;该菌株的发酵产物可以用于D

2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌荧光假单胞菌K1005抗噬菌体菌株的选育

从 2 -酮基 -D -葡萄糖酸产生菌荧光假单胞菌K1 0 0 5的异常发酵液中分离到两种噬菌体 ,分别将其命名为KS5 0 2和KS5 0 3。电镜观察表明KS5 0 2呈微球形 ,直径为 61nm ;KS5 0 3呈蝌蚪形 ,具有直径为 68nm的六角形头部及 85nm长的尾部。利用紫外线诱变的方法 ,经多次分离筛选 ,获得了 2株抗性稳定且产酸水平超过对照敏感菌的抗噬菌体菌株 。

高产磷酯酶C菌株筛选及其抗血小板功能的研究

在湖北省、湖南省、江苏省、山东省、广东省 15 6个点采土样 12 6 8份 ,利用卵黄琼脂的LB培养基初筛获得产生乳白色晕圈的菌株 6 48株 ;再用卵黄琼脂滤纸圆片检测获得产生乳白色晕圈和透明圈菌株 2 6 6株 ;这些菌株用卵黄琼脂杯蝶法筛选出产生大于 13 0mm乳白色晕圈及少量透明圈共 73株 ,经过菌生物量、卵黄杯碟法和抗兔血小板聚集率的测定 ,从 73株菌中筛选出 15株 ,菌号为 :183,198,2 47,42 4,5 87,5 96 ,6 92 ,744 ,75 4 1,791 2 ,779,970 ,998,110 7,1182 ;将此 15菌株经菌生物量、卵黄琼脂杯碟法、NPPC法和抗人血小板聚集率的测定 ,从中选出 75 4 1,779,970 ,110 7四株菌进行分类鉴定和已知菌CW W 90 3菌对照比较的研究。

嗜热链球菌抗噬菌体菌株的选育

研究以酸奶生产菌株嗜热链球菌S2为出发菌株。采用自然选育的方法筛选出其抗噬菌体突变株。获得4株生产性能较好的抗噬菌株KS21、KS22、KS23、KS24,溶源性检测其为非溶源菌。对4株抗性菌株进行20次传代和酸奶发酵实验,结果表明抗性稳定,其中KS23发酵酸奶产酸达109°T,凝乳时间与出发菌株相当。细胞全蛋白SDS-PAGE电泳分析显示突变菌株与出发菌株在某些蛋白表达上有所差异,可能是抗性产生的原因。

抗噬菌体谷氨酸高产菌株选育

从污染的谷氨酸发酵废液中分离纯化噬菌体,并以高滴定度侵染生产敏感菌,借助菌的自发突变筛选出抗噬突变株,再运用紫外线、亚硝基胍复合诱变手段经过初筛、复筛,最后选育出抗噬谷氨酸高产菌株。其过程简单、便利,可靠性高,是选育抗噬谷氨酸高产菌株的好方法,对发酵行业具有指导意义。曾选育到抗噬谷氨酸高产菌株,其摇瓶发酵产量比对照提高26.4%。

保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株的原生质体制备及融合

为获得具有抗噬菌体功能且发酵性能优良的乳酸菌融合子,采用单亲灭活及正交分析方法,研究了保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株的原生质体制备及融合条件。结果表明:保加利亚乳杆菌原生质体制备的最适条件是以磷酸盐缓冲液和甘露醇制作的高渗溶液为原生质体稳定剂,1.0 mg/m L的溶菌酶36℃处理30 min,原生质体的形成率为(89.02±2.31)%,再生率为(4.62±0.22)%。嗜热链球菌抗噬菌体菌株原生质体制备的最适条件是以Tris-HCl和蔗糖制作的高渗溶液为原生质体稳定剂,0.1 mg/m L的溶菌酶42℃处理30 min,原生质体的形成率为(99.15±0.23)%,再生率为(5.79±0.17)%。单亲灭活保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株原生质体融合的最适条件为聚乙二醇6000(质量浓度为400 g/L,添加0.01 mol/L Ca Cl2、0.02 mol/L Mg Cl2)40℃促融2 min,融合率可达(1.85±0.12)×10-6。所得融合子各项性能优良,适合于酸奶生产。

卡那霉素链霉菌(Streptomyces kanamyceticus)抗噬菌体菌株的筛选

安徽朝阳化工厂在卡那霉素发酵生产中曾多次出现噬菌体感染。1977年春,我们从卡那霉素链霉菌的异常发酵液中分离出了噬菌体。电子显微镜研究说明,这是一种蝌蚪状的噬菌体。应用亚硝基胍或紫外光诱变并结合噬菌体处理,筛选得若干对噬菌体具有抗性的菌株,其中某些抗性菌株的卡那霉素产量在摇瓶发酵中大约比对照高百分之十六。

嗜热链球菌抗噬菌体菌株的富集培养

研究了在乳清培养基中添加不同营养物质对嗜热链球菌抗噬菌体菌株生长的影响,进一步采用正交实验优化筛选了其乳清发酵培养基。结果表明:在乳清培养基中添加番茄汁、乳清蛋白水解物可显著促进嗜热链球菌抗噬菌体菌株的生长,利用L934正交实验筛选出培养基的最佳配比为:乳清500 m L/L,酵母膏2.5 g/L,抗坏血酸0.5 g/L,酪蛋白胨10.0 g/L,葡萄糖10.0 g/L,番茄汁60 m L/L,乳清蛋白水解物4.0 g/L;实验菌株在此培养基中经培养条件优化,活菌数可达8.6×1010m L-1,较对照乳清培养基的活菌数提高71.67倍。

螺旋霉素产生菌抗噬菌体菌株的选育

用Ｃｏ６０处理螺旋霉素产生菌ＰＳ，获得了一株抗噬菌体且摇瓶发酵单位比原菌株稍高的突变株Ｒ１０，继而对Ｒ１０进行理性化筛选，在加有２－脱氧葡萄糖的分离培养基上分离到一株抗噬菌体稳定、摇瓶发酵单位又比Ｒ１０高２０％的新突变株，且其摇瓶发酵周期缩短１２ｈ、能耐受更高浓度的自身代谢产物——螺旋霉素。

限制和修饰系统LlaBIII在构建抗噬菌体菌株中的作用

LlaBIII,isolated from the naturally occurring plasmid pJW566 from Lactococcus lactis subsp.cremoris W56,encoded a restriction and modification (R/M) system. The plasmid pJK1 carrying the R/M system LlaBIII was transformed into L.lactis IL1403 with type I R/M system located on chromosome and the strain MG1614[pAW601] with AbiS gene on plasmid pAW601, respectively. The transformants obtained showed stacking resistance against bacteriophages. The plasmid pJK1 was transformed into industrial strains L.lactis SMQ86 and CHCC2281,the transformants showed the EOP of the bacteriophages decreased by 10 -3 and 10 -5, respectively.The results indicated that the R/M system LlaBIII could protect strains from bacteriophages in dairy fermentation.

以原生质体融合技术构建广谱抗噬菌体菌株

利用１５株不同品系的噬菌体作筛子筛选的噬菌体抗性自发突变株只对其相应的筛于噬菌体具抗性，为窄谱抗株。利用原生质体融合技术把北京棒杆菌７３３８与钝齿棒杆菌Ｔｓ－Ｌｉ进行融合得融合于ＺＧ８８，通过噬菌体吸附试验，血清学试验证明ＺＧ８８细胞表面结构发生了较大的改变，失去了噬菌体的吸附位点。因此ＺＧ８８是广谱稳定的噬菌体抗性菌株。

单亲灭活保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株融合子的选育

为获得具有抗噬菌体功能且发酵性能优良的乳酸菌酸奶生产菌株,将生产用保加利亚乳杆菌制备原生质体后高温灭活,灭活后的原生质体与嗜热链球菌抗噬菌体菌株的原生质体通过PEG6000诱导进行融合,并对融合子性能进行研究。结果从20株融合子中挑选出3株具有噬菌体抗性且发酵性能优良的乳酸菌融合子。融合条件为:以PEG6000(浓度为400 g/L,添加0.01 mol/L Ca Cl2、0.02 mol/L Mg Cl2)为促融剂,40℃融合2 min。此条件下,融合率可达1.85×10-6。获得的融合子在凝乳、产酸、产粘性物质、产香气成分及抗噬菌体方面性能优越,适合于酸奶生产。

德氏乳杆菌保加利亚亚种抗噬菌体菌株的选育

从酸奶异常发酵液中分离纯化保加利亚乳杆菌Lb2噬菌体LP5。以自然选育方法筛选出其抗噬突变株,再经紫外线诱变,获得3株产酸与出发菌株相当的抗噬株N491,N492,N761。对三抗株进行多次传代和酸奶发酵试验,结果表明,三抗株的抗噬性稳定,其中N761酸奶发酵产酸达94°T,酸奶的组织状态及风味优于Lb2,可应用于酸奶的发酵生产。