抗大豆胰蛋白酶抑制剂单链抗体表达与纯化方法优化

[目的]利用大肠杆菌毒素蛋白VTB的五聚体化结构域（VT1B）及梭菌纤维素酶的纤维素结合结构域（CBD）,异源表达其与抗大豆胰蛋白酶抑制剂单链抗体（anti-BBI Sc Fv）的融合蛋白,对该单链抗体表达与纯化方法进行优化。[方法]构建CBD-VT1B-anti-BBI Sc Fv融合蛋白大肠杆菌表达系统;应用Ni-NTA树脂与微晶纤维素两步亲和层析法提纯单链抗体融合蛋白。[结果]单链抗体融合蛋白在大肠杆菌中得到大量表达,通过两步纯化法获得了高纯度的融合蛋白,纯度比Ni-NTA树脂一步纯化法提高约12~34%;五聚体融合蛋白与纤维素的结合能力及蛋白纯化效率比单体蛋白提高约1倍。[结论]通过增加纤维素标签和五聚体化结构域,抗大豆胰蛋白酶抑制剂五聚体化单链抗体融合蛋白的纯化效果得到提高。