家族性肥厚型心肌病β型肌凝蛋白重链基因突变研究

1990年Tanigawa等连续报道了β-MHC的错义突变与FHC有关,这些突变集中在β-MHC的10个外显子,即外显子5,9,13,14,15,16,19,20,21,23.本文设计了9对PCR引物,限制性扩增β-MHC基因突变集中发生的9个外显子,用两轮扩增提高扩增产量,两步扩增法提高扩增产物的特异性.产物在中性聚丙烯酰胺上电泳进行SSCP分析.对6个肥厚型心肌病家系进行了β-MHC突变分析,结果显示,6个肥厚型心肌病家系中无一个家系找到β-MHC突变,表明突变的机率比国外报道的明显的低.

聚丙烯酰胺凝胶电泳在心肌肌凝蛋白重链研究中的应用

本文分析了变性SDS PAGE、非变性焦磷酸盐PAGE、梯度SDS PAGE以及双向PAGE等分析心肌MHC的特点及其应用研究 ,介绍了分析骨骼肌MHC的SDS PAGE方法以及从SDS PAGE凝胶中回收蛋白质对纯化MHC及制备其特异性抗体用于心脏病的研究、诊断及治疗的意义。

心肌肌凝蛋白重链启动子的心血管组织特异性基因表达及其活性

目的 探讨心肌肌凝蛋白重链 (cMHC)基因启动子的心血管组织特异性及其表达活性 ,构建心血管组织靶向性表达的基因载体。方法 分别采用PCR法合成大鼠cMHC基因启动子片段 (- 16 0 0～ +32 )和酶切法获得CMV启动子片段 ,以取代 pAdSV4nlacZ载体中的LTR启动子 ,获得pAdSV4nlacZ、pAdMHCnlacZ和 pAdCMVnlacZ。上述载体分别转染培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)、心肌细胞 (CM )、心肌成纤维细胞 (CF)和人胚肾细胞 (2 93细胞 ) ,观察lacZ基因在上述细胞中的表达活性。结果 β-半乳糖苷酶活性在 pAdSV4nlacZ和 pAdCMVnlacZ转染的各组细胞间无显著差异 ;pAdMHCnlacZ在转染的CM中lacZ基因的表达明显高于其他各组细胞 ,β -半乳糖苷酶活性在VSMC组低于CM组 ,高于CF和 2 93细胞 (P <0 0 1) ,在CF和 2 93细胞间无差异 (P >0 0 5 )。结论 cMHC启动子的转录活性相对低于CMV启动子和LTR启动子 ,而在CM和VSMC中的表达活性高于CF和 2 93细胞 ,具有良好的心血管组织定向表达能力 ,适合用于心血管疾病的基因治疗。

抗心肌肌凝蛋白抗体亲梗死心肌显像的研究进展

本文介绍了抗心肌肌凝蛋白单克隆抗体及抗肌凝蛋白重链单克隆抗体亲梗死心肌显像的研究进展、存在的缺点和对其所做的技术改进以及通过基因工程制备之单链抗体的优点。对利用噬菌体抗体库技术所生产的单链抗体及其抗肌凝蛋白显像在心脏病学中的应用前景进行了展望。

大鼠肥厚心肌缩短速度和肌凝蛋白重链同功酶谱的变化

用聚丙烯酰胺电泳分离并测定了大鼠左室肌凝蛋白ＡＴＰ酶活性依次降低的同功酶Ｖ_１，Ｖ_２和Ｖ_３的百分比（ＭＩ谱），从乳头肌力－速度曲线读取心肌最大缩短速度（Ｖ_（ｍａｘ）），观察到：（１）正常大鼠出现增龄性Ｖ_１向Ｖ_３迁移和Ｖ_（ｍａｘ）下降，与８周龄组（Ｓ_０）相比，１６周和２４周龄组（Ｓ_８和Ｓ_（１６））的Ｖ_１／Ｖ_３比，分别下降３８．９％和６１．０％；Ｖ_（ｍａｘ）下降８．３％和１３．３％。（２）高血压肥厚心肌ＭＩ谱的迁移和Ｖ_（ｍａｘ）下降的程度大大超过增龄效应：高血压８周和１６周组（Ｈ_８和Ｈ_（１６））的Ｖ_１／Ｖ_３比值较术前对照Ｓ_０分别下降８４．４％和９３．５％，较同龄假手术对照Ｓ_８和Ｓ_（１６）组也分别低７４．５％和８３．３％，而Ｖ_（ｍａｘ）则比Ｓ_０组下降３３．３％和４８．３％。（３）６组４８只大鼠结果相关分析表明，Ｖ_（ｍａｘ）与Ｖ_１％高度正相关，与Ｖ_３％高度负相关。（Ｐ均小于０．０１）。上述结果提示：高血压肥厚心肌收缩速度明显下降，其主要生化机制似与同功酶谱由Ｖ_１优势向Ｖ_３迁移有关。

核素标记的抗肌凝蛋白抗体心肌显像技术在心肌炎诊断中的应用

作为“金标准”的心肌活检技术(EMB)在心肌炎诊断中敏感性较低,而核素标记的抗肌凝蛋白抗体(antimyosin antibody)及其Fab片段心肌显像技术作为 一种非创伤性诊断心肌坏死的高敏感手段,可认成为可疑心肌炎患者做心肌活检前明确活检必要性的重要方法。

大鼠左室肌凝蛋白重链同功酶谱的增龄性变化

用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法分析了５—６０周龄的大鼠左心室肌凝蛋白重链同功酶（ｍｙｏｓｉｎｈｅａｖｙｃｈａｉｎｉｓｏｅｎｚｙｍｅｓ，ＭＩ）。结果表明：大鼠幼年期ＭＩ以高ＡＴＰ酶活性的Ｖ１形式存在（５周龄：Ｖ１＝９８．９２±１．４７％），随着年龄增长，Ｖ２（１０周龄：３．５４±２．４２％）和Ｖ３（１５周龄６．３１±３．４８％）依次出现并逐步增加，到２８周时Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３分别为６１．３６±１１．７１％、２０．１１±４．９８％和１３．５２±５．３２％，随后基本稳定于该水平；以Ｖ１／Ｖ３为指标分析各周龄组大鼠，可见Ｖ１／Ｖ３具有增龄性的下降趋势，但均以Ｖ１占优势（６０周：Ｖ１／Ｖ３＝３．８５±０．９５）；同功酶谱变化以及它与左室重量相关分析表明，同功酶谱增龄性变化主要发生在大鼠生命的早期，并且这种变化可能与左室重量的增长有关。

抗HLA-A~*0201重链卵黄抗体的制备及初步鉴定

目的制备高效价特异性鸡卵黄免疫球蛋白(Yolk immunoglobulin,IgY)抗体。方法用纯化HLA-A*0201重链抗原加完全福氏佐剂免疫岭南黄鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后,用ELISA鉴定其免疫学活性,测定纯化后蛋白含量,并用SDS-PAGE进行分析鉴定。结果获得ELISA效价为1×106的抗重链IgY抗体,蛋白含量为9.77 mg/ml。经SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度达90%以上。结论用重链抗原加福氏佐剂免疫种鸡制备的IgY抗体产量多、效价高,为结合HLA-A*0201复合体诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞活化奠定了基础。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂对压力负荷增加所致小鼠心肌肥厚的影响

目的观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂对心肌肥厚小鼠心脏及心肌肥厚标志基因的影响,并探讨该类药物影响心肌肥厚的可能机制。方法观察压力负荷增加及用可溶性环氧化物水解酶抑制剂干预后心脏的病理学改变,并用半定量逆转录聚合酶链反应法检测心肌肥厚基因(心房钠尿肽基因、α肌凝蛋白重链基因、β肌凝蛋白重链基因和骨骼肌α肌纤蛋白基因)表达的差异,用Western检测核因子κB的活化情况。结果可溶性环氧化物水解酶抑制剂可以明显使心脏重与体重的比值、左心室短轴缩短率和左心室收缩期末腔径明显改善,并减少压力负荷增加引起的小鼠心肌肥厚基因的表达,抑制核因子κB的表达。结论可溶性环氧化物水解酶抑制剂能抑制压力负荷增加所致的心肌肥厚,这一作用有可能通过抑制核因子κB途径来实现。

蛋白激酶D2在血管紧张素Ⅱ诱导的病理性心肌肥大中的作用

目的研究蛋白激酶D2(PKD2)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的病理性心肌肥大中的作用。方法通过AngⅡ诱导新生大鼠和成年大鼠病理性心肌肥大,应用siRNA干扰抑制心肌细胞PKD2基因表达,探讨PKD2对AngⅡ诱导的病理性心肌肥大形成过程中的调控作用。结果AngⅡ上调新生大鼠和成年大鼠心肌细胞的PKD2基因表达;沉默PKD2阻断AngⅡ诱导病理性心肌肥大基因心房利尿因子(ANF)和β-肌凝蛋白重链(β-MHC)表达上调和细胞表面积增大。结论PKD2参与AngⅡ诱导的病理性心肌肥大,可能是预防干预和逆转心肌肥大的潜在靶点。