^(99m)Tc标记的抗心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体在心肌损伤大鼠体内的分布

目的研究99mTc标记的抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体(AcTnIMA)在实验性心肌损伤大鼠体内的分布,探讨99mTc-AcTnIMA是否可以作为心脏放射免疫显像剂。方法第一批大鼠实验组:20只急性心肌损伤大鼠注射99mTc-AcTnIMA0.2mci,分别于注射后2、4、6、8h处死(每次5只),取血液、肝、脾、肾、正常肌肉、肺、心脏,计算每克组织计数占总注入计数的百分比(ID%/g)及心-肺ID%/g比(HLR);药物对照组:20只急性心肌损伤大鼠注射99mTc标记的非特异性免疫球蛋白(N-IgG)0.2mci,处死方法同实验组。取肺及心脏,计算ID%/g及HLR;空白对照组:20只正常大鼠注射99mTc-AcTnIMA0.2mci,处理方法同药物对照组。第二批50只心肌损伤大鼠分别于发生心肌损伤后2、4、6、8、12、24h,3、5、10、15d分10次静脉注射99mTc-AcTnIMA0.2mci(每次5只),注射后4h处死,计算出ID%/g及HLR。结果损伤心肌摄取99mTc-AcTnIMA为特异性摄取,摄取的高峰时间为4h;损伤心肌摄取99mTc-AcTnIMA与损伤发生时间无关。结论99mTc-AcTnIMA有望作为心脏放射免疫显像剂诊断心肌损伤。

^(99m)Tc标记抗心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体在实验性急性心肌损伤大鼠体内分布的研究

目的:研究99mTc标记的抗心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体(AcTnIMA)在实验性急性心肌损伤大鼠体内的分布,探讨99mTc-AcTnIMA是否可以作为心脏放射免疫显像剂。方法:实验组:20只急性心肌损伤大鼠注射99mTc-AcTnIMA0.2mci,分别于注射后2、4、6、8h处死(每次5只),取血液、肝、脾、肾、正常肌肉、肺和心脏,以计算每克组织放射性计数占总注入计数的百分比(ID%/g)及心-肺ID%/g比(HLR)。药物对照组:20只急性心肌损伤大鼠注射99mTc标记的非特异性免疫球蛋白(N-IgG)0.2mci,处死方法同实验组。取肺及心脏,计算ID%/g及HLR;空白对照组:20只正常大鼠注射99mTc-AcTnIMA0.2mci,处理方法同药物对照组。结果:急性损伤心肌对99mTc-AcTnIMA为特异性摄取,摄取的高峰时间为4h。结论:99mTc-AcTnIMA有望作为心脏放射免疫显像剂诊断急性心肌损伤。

人心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体及多克隆抗体的制备

目的:以重组人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)为抗原制备鼠源单克隆抗体(McAb)及兔源多克隆抗体,并鉴定抗体的特性。方法:以纯化的重组人cTnⅠ为抗原免疫BALB/c小鼠,取鼠脾细胞同Sp2/0骨髓瘤细胞融合,利用选择培养基筛选融合的杂交瘤细胞,用有限稀释法分离获得能够稳定分泌抗cTnⅠ的McAb阳性克隆,并利用体内诱生法大规模制备McAb,用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗体;兔多抗制备以cTnⅠ为抗原常规免疫后取其血清;用间接ELISA和Western印迹鉴定抗体的性质。结果:经ELISA鉴定,筛选出5株能分泌cTnⅠMcAb的杂交瘤细胞株,即C5B2、C5B3、C5B4、C5B1、B1A6,效价最高的B1A6株分泌的McAb为IgG3型,纯化后效价为1∶10000,亲和常数为1.08×10-9mol/L,Western印迹鉴定表明cTnⅠMcAb有良好的特异性;兔多抗纯化后的效价为1∶8000。结论:制备了具有良好特性的cTnⅠMcAb和多克隆抗体。

心脏肌钙蛋白Ⅰ与抗心肌抗体对类风湿关节炎的临床意义

目的:探讨心脏肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)与抗心肌抗体(AHA)对类风湿关节炎的诊断价值。方法:选择27例类风湿性关节炎(RA)患儿应用酶联免疫吸附试验法对其血清进行cTnI与AHA的测定,并同时检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)。结果:27例幼年性RA患儿中12例cTnI阳性,16例AHA阳性,正常对照组cTnI,AHA,CK-MB全部阴性,且AHA阳性组cTnI,CK-MB值明显高于AHA阴性组。结论:RA患儿cTnI,AHA敏感性高于CK-MB,且AHA阳性组心血管受累的可能性大,从而提示cTnI,AHA对RA患儿心脏受累及早期给予保护措施,具有重要的指导意义。

心肌肌钙蛋白I、抗心肌抗体与小儿心肌损伤的相关研究

目的 探讨心肌肌钙蛋白I(cTn -I)及抗心肌抗体 (AHA)与小儿心肌损伤的关系。方法 对 30例心肌炎 (MC)患儿及 1 8例正常儿童进行血清cTn -I、AHA、磷酸肌酸激酶同工酶 (CK -MB)测定。结果 ①MC组血清cTn -I、AHA、CK -MB的阳性率分别为70 .0 %、36 .7%、2 6 .7% ,均较对照组高 (P <0 .0 1 ) ,cTn -I与CK -MB阳性率比较差异有统计学意义 (P <0 .0 1 ) ;②MC发病病程≤ 1个月cTn -I阳性率较其他时期明显增高 (P <0 .0 5) ,而AHA阳性率较其他时期明显下降 (P <0 .0 1 ) ;③治疗 1 0dcTn -I下降≥ 50 %者及 2 0dcTn -I转阴者 ,临床症状和心律失常等改善明显优于cTn -I下降及转阴缓慢者 (P <0 .0 5)。结论 ①血清cTn -I的检测是判断心肌损伤的敏感指标 ,尤其适用于早期及微小心肌损伤的诊断 ;②血清AHA的检测是心肌损伤的后期诊断及预后判断指标。

实验性心肌损伤大鼠血清心肌肌钙蛋白Ⅰ的检测

目的应用抗人cTnI单克隆抗体检测大鼠血清cTnI。方法SD大鼠皮下注射异丙肾上腺素8mg/kg,对照组大鼠注射等体积的生理盐水,4h后处死,观察心肌组织病理改变;应用2株抗人cTnI单克隆抗体建立双抗体夹心ELISA法检测大鼠血清cTnI。结果大鼠注射异丙肾上腺素后心肌呈散在局灶性病变,表现为心肌纤维呈波浪样改变,部分心肌纤维断裂,心肌间质内炎细胞浸润、水肿。血清cTnI(OD值)明显高于对照组大鼠(1.28±0.78∶0.30±0.22,P<0.01)。结论本实验建立了大鼠血清cTnI双抗体夹心ELISA方法。血清cTnI能反映大鼠心肌病理变化,可作为诊断大鼠心肌损伤的一个可靠指标。

人心肌肌钙蛋白Ⅰ酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的建立检测人心肌肌钙蛋白Ⅰ的酶促化学发光免疫分析方法。方法采用两株抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ的单克隆抗体,一株包被聚苯乙烯化学发光板,一株标记辣根过氧化物酶,采用辣根过氧化物酶/鲁米诺/过硼酸钠体系,建立了测定人血清心肌肌钙蛋白Ⅰ的酶促化学发光免疫分析方法,并进行了方法学鉴定。用该法测定80例正常人血清,确定正常参考值范围;测定临床病理样品27例,与Beckman全自动化学发光试剂测定值进行相关性分析。结果本方法测定范围0.3～100μg/L,分析灵敏度0.16μg/L;37℃反应时间30min;回收率76.8%～111.1%;高浓度cTnI血清样品经系列倍比稀释后测定,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数0.999;批内、批间变异系数分别为3.90%～6.71%,7.66%～10.34%;与心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌钙蛋白C(TnC)、骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ(sKTnI)、骨骼肌肌钙蛋白T(sKTnT)、人心肌脂肪酸结合蛋白(h-FABP)、人心肌肌酸激酶(CK-MB)、人心肌肌红蛋白、C-反应蛋白(CRP)均无交叉;确定临床正常参考值小于0.304μg/L;与Beckman全自动化学发光试剂比较,两者测定值线性相关系数为0.925。结论该方法反应时间短、特异性强、重复性好,具有应用及推广价值。

牛心肌肌钙蛋白Ⅰ的纯化及鉴定

目的:提取和纯化牛心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)。方法:心室肌经匀浆、离心、盐析提取、CMSephadexC鄄50柱层析、DEAESephadexA鄄50柱层析,获得牛cTnⅠ。结果:从100g湿重牛心肌中获得15mg牛cTnⅠ,SDS鄄PAGE示牛cTnⅠ相对分子质量约为27ku,纯度约为90%,Western印迹证实纯化的牛cTnⅠ可被抗人cTnⅠ单克隆抗体识别。结论:实验从牛心肌中成功制备cTnⅠ。

心肌肌钙蛋白Ⅰ免疫层析试纸条的研制

目的制备人心肌肌钙蛋白Ⅰ免疫层析试纸条,建立一种快速检测人心肌肌钙蛋白I的检测方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记肌钙蛋白I单克隆抗体,喷于玻璃纤维纸上制成胶体金结合物垫。将另一株肌钙蛋白I单克隆抗体和抗鼠二抗分别喷于试纸条的检测线和质控线处,组装成试纸条并进行灵敏度、特异性及临床样品测定。结果该试纸条检测灵敏度为1μg/L,15min内可判断结果;与C-反应蛋白、人心肌脂肪酸结合蛋白、肌酸激酶、人心肌肌红蛋白无交叉反应;测定健康人血清样本40例,结果均为阴性;测定14例心肌梗死患者血清,结果均为阳性,且T线显色程度与发光法测定值呈正相关。结论该试纸条灵敏度高、特异性强、操作简便,结果判断直观,可用于急性心肌梗死的早期筛查。

人心肌肌钙蛋白Ⅰ鲁米诺化学发光酶免疫分析法的建立

目的:制备两株抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ(human cardiac troponinⅠ,cTnⅠ)单克隆抗体,建立鲁米诺化学发光酶免疫分析法。方法:制备腹水型单抗、饱和硫酸铵沉淀法和亲和层析柱Protein G纯化抗体,并通过SDS-PAGE和ELISA对抗体特异性进行鉴定,建立鲁米诺化学发光酶免疫分析法,并对30份临床血清样本进行检测。结果:本实验制备的两株单抗(分别命名为Ab1、Ab3;亚型都是Ig G1)能够识别以cTnⅠ单体、cTnⅠ-C复合物和cTnⅠ-T-C复合物不同形式存在的cTnⅠ。Ab1、Ab3的效价分别为1∶80万和1∶40万,亲和力常数分别为1.62×109L/mol、2.60×108L/mol。利用2株单抗建立的鲁米诺化学发光酶免疫分析法检测范围为:6.25~400 ng/ml。对30份临床样本进行检测,阳性检出率为77.3%,阴性检出率为100%。结论:建立了可以检测以cTnⅠ单体、cTnⅠ-C和cTnⅠ-T-C复合物形式存在的cTnⅠ的鲁米诺化学发光酶免疫分析法,具有更高的实用性。

一种检测血清心肌肌钙蛋白I的生物传感器

目的 :建立一种新的血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)定量检测法。方法 :用亲和层析法提纯cTnI,免疫BALB C鼠及新西兰兔 ,并用杂交瘤技术及膜渗滤亲和层析法 ,制备了特异性抗cTnI单克隆抗体和多克隆抗体。以葡萄球菌蛋白A作基底膜 ,特异性多克隆抗体作捕捉抗体 ,单抗 9F5作第二抗体 ,制成了表面等离子体共振生物传感器。比较了直接法和夹心免疫法检测血清cTnI的性能。结果 :夹心免疫法的最低检测限 (0 8μg L)是直接法的 5倍 (4 μg L) ,检测范围为 (0 8～ 2 0 ) μg L ,批内及批间精密度分别达 3 8%～ 5 1% ,6 3%～ 8 1%。用该夹心法及国外试剂盒分别检测 4 0名健康献血队员和 2 8例急性心肌梗死患者血清cTnI水平 ,两者符合率分别为 97 5 %和 94 6 %。结论 :所建立的夹心免疫法操作简单 ,特异性强 ,灵敏度高 ,符合临床诊断要求。

血清人心肌肌钙蛋白I快速测定方法的建立

目的 :建立一种简便、快速、准确检测人心肌肌钙蛋白I(cTnI)的胶体金免疫层析法。方法 :应用cTnI免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 /0骨髓瘤细胞进行细胞融合筛选 ,获得分泌高效价抗cTnI抗体细胞株 6株。其中 3F10作为金标抗体 ,3A7作为生物素化抗体 ,链霉亲合素结合于硝酸纤维素膜 ,制成免疫层析测试条 ,依据测试条上出现肉眼可见的红色线条判定结果。结果 :检测灵敏度可达 0 4ng/ml。测定 30例急性心肌梗塞 (AMI)患者血清cTnI,并与国外同类产品比较 ,两者符合率为 93 6 %。结论 :该方法快速检测cTnI特异性强 ,灵敏度高 ,简便 。

心肌肌钙蛋白I单克隆抗体制备及酶免疫法的建立

目的 研制人心肌肌钙蛋白I(cTnI)单克隆抗体 ,建立双单克隆抗体两点一步夹心酶免疫法 (简称“双抗夹心ELISA”)。方法 用亲和层析法直接从人心肌组织中提纯cTnI ,经免疫、融合、筛选、克隆等杂交瘤技术 ,制备出 3株特异性抗cTnI单克隆抗体 ,选用其中互补的 2株 2F11和9F5,分别制成生物素化抗体和酶标抗体 ,建立双抗夹心ELISA检测法。结果 用双抗夹心ELISA和美国PBM公司LifesignTroponinI检测试剂对 40名健康献血员和 3 4例急性心肌梗塞患者血中cTnI水平进行检测 ,本法最低检测限为 0 8μg/L ,两者符合率分别为 97 5%和 93 9% ,符合临床诊断要求。结论 双抗夹心ELISA特异性强 ,灵敏度、准确度和精密度较高 。

^(99m)Tc直接法标记抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体

目的探索99mTc直接法标记抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体(AcTnIMA)的方法 ,并研究标记产物的体外稳定性。方法用氯化亚锡(SnCl2)还原法进行AcTnIMA标记,并用正交实验设计筛选抗体量、SnCl2量、反应体系pH值及放射性活度四个因素的最佳组合;用纸层析法测定标记产物的标记率;用柱层析法测定标记物中99mTc-AcTnIMA的纯度;将标记物在室温(22℃)下放置0、2、4、6h,观察其体外稳定性。结果 99mTc直接法标记AcTnIMA的最佳标记条件为抗体量30μg,SnCl2量80μg,反应体系pH值7.0,放射性活度50mCi,标记率可达99%以上;标记物中99mTc-AcTnIMA的纯度较高;标记产物放置6h后,标记率仍大于95%。结论用99mTc直接法标记AcTnIMA简单高效,标记产物在体外有很好的稳定性。

心脑肌钙蛋白Ⅰ及抗心肌抗体在川崎病急性期的临床意义

目的：观察川崎病急性期检测心肌同钙蛋白Ⅰ及抗心肌抗体的临床意义。方法：应用酶联免疫吸附试验法对27例川崎病（KD）患儿急性期血清进行肌钙蛋白Ⅰ（CinⅠ)及抗心肌抗体（AHA-IgM)的测定，同时检测CK-MB，与正常对照组对比。结果：27例KD患儿中14例CinⅠ、17例AHA，2例CK-MB阳性，对照组CinⅠ、AHA、CK-MB全部阴性，且川崎病患儿AHA阳性组CK-MB值明显高于AHA阴性组。结论：川崎病急性期CinⅠ、AHA敏感性高于CK-MB，且AHA阳性患者心血管系统受累的可能性要大，从而早期诊断KD患儿的心脏受累，及早给予保护措施。

量子点标记的斑点免疫渗滤分析定量检测cTnI

利用量子点良好的光谱特征和光化学稳定性,结合免疫分析技术,对心肌肌钙蛋白I(cTnI)特异性进行定量检测.用量子点标记cTnI的单克隆抗体(2F11),通过SDS-PAGE电泳证明标记成功.斑点免疫膜渗滤法证明标记后的2F11仍具有良好的生物学活性,再将标记并纯化后的2F11与NC膜上不同浓度的cTnI进行免疫反应,使用Im ageM aster图像分析软件对膜上荧光斑点图像进行定量分析.应用此方法测得cTnI的浓度和斑点处相对荧光值有良好的线性关系(R2=0.9966),最低检出值为120 ng.

免疫学指标在小儿心血管疾病诊断中的临床意义

心血管系统许多疾病都与免疫系统功能失调有关，如心肌炎、心肌病、血管炎、川崎病等。这些疾病有多种病因和发病机制，但免疫系统功能失调在疾病的发展中起到了重要作用。心肌损伤可能是疾病最初的影响因素，但是遗传易感性、环境、后天的调节以及其他未知的机制都对外周血中的抗体滴度和心肌炎症的强度有重要影响。