内源性因素对抗体夹心免疫法检测血清心肌肌钙蛋白Ⅰ的干扰及解决方案研究进展

心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponinⅠ,cTnⅠ)是临床上诊断心肌损伤的首选血清学标志物。cTnⅠ检测基于抗体夹心免疫法,不同检测试剂中检测和捕获抗体所针对的cTnⅠ抗原表位不一致,易造成cTnⅠ检测结果的异质性。内源性干扰因素如cTnⅠ自身抗体、异嗜性抗体、类风湿因子等可严重的干扰cTnⅠ检测结果,影响临床上对心肌损伤类疾病的诊断、治疗及预后判断。该文就cTnⅠ的抗体夹心免疫检测和内源性因素对cTnⅠ检测的干扰及解决方案等方面研究进展作一综述,为临床上鉴别诊断cTnⅠ异常检测结果提供理论依据。

心肌肌钙蛋白Ⅰ自身抗体对心肌肌钙蛋白Ⅰ检测的影响及临床意义

目的 探讨心肌肌钙蛋白Ⅰ自身抗体(cTnIAAb)对心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)检测的干扰程度及其临床意义。方法 采用cTnI-TnC亲和层析柱纯化血清中的cTnIAAb,进行特异性鉴定;选取15例cTnI阳性样本(cTnI>0.026ng/mL),分别加入不同蛋白量的cTnIAAb,经cTnI检测系统测定cTnI原始浓度和回收浓度,计算cTnI下降率。结果 自身抗体阳性血清经亲和层析柱纯化得cTnIAAb 3.5mg,稀释后得cTnIAAb浓度为1ng/mL;cTnIAAb特异性实验中,随着加入cTnIAAb蛋白量增大,cTnI下降率逐渐升高,呈良好的多项式线性相关(R2=0.992);15例cTnI阳性样本,加入2μL cTnIAAb组出现cTnI低、中度降低血清分别为11份和4份;加入5μL cTnIAAb后出现cTnI低、中、高度降低的血清分别为2份、12份、1份;加入10μL cTnIAAb后出现cTnI中、高度降低的血清分别7份和8份;加入2μL、5μL、10μL cTnIAAb组lg(cTnI理论浓度)和cTnI下降率之间的相关系数r分别为-0.63(P<0.05)、-0.74(P<0.01)、-0.75(P<0.01),呈中等和强负相关关系。结论cTnIAAb可对cTnI检测产生明显的负性干扰,造成cTnI检测结果偏低,影响临床对心肌损伤类疾病的诊断。

量子点偶联抗体型夹心免疫传感法检测心肌肌钙蛋白I

将纳米量子点（QD）的放大作用与夹心免疫传感技术相结合，首次应用量子点标记抗体和表面等离子体共振生物传感器（SPR）对心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）进行特异性定量检测．利用N-羟基琥珀酰（NHS）和1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC）将量子点偶联到cTnⅠ的单克隆抗体2F11上，再利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）验证偶联是否成功，膜印迹法证明标记后的2F11具有良好的生物学和免疫学活性，最后以蛋白A为基底膜、特异性抗心肌肌钙蛋白Ⅰ多克隆抗体为第-抗体（捕捉抗体）、QD标记的抗心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体2F11为第二抗体（检测抗体），用表面等离子体共振生物传感器构建了对心肌肌钙蛋白Ⅰ具有特异性的夹心免疫传感法，并成功用于检测心肌肌钙蛋白Ⅰ．本法的检测范围为0．4～15μg/L，检出限为0．4μg/L，较未标记夹心法和直接法分别提高了约2倍和10倍．

心肌肌钙蛋白Ⅰ检测结果假阴性病例报道并文献复习

目的 探讨1例临床上心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)检测结果假阴性的形成原因,并提出解决策略。方法 分析1例cTnⅠ检测结果与其他心肌损伤标志物严重不符案例的临床资料,采用不同cTnⅠ检测系统进行复检,检测样本的抗核抗体谱和cTnⅠ自身抗体(cTnⅠAAb),通过向样本中加入cTnⅠ-肌钙蛋白C(TnC)抗原,明确cTnⅠAAb对cTnⅠ检测的负性干扰程度;以“cTnⅠ免疫学检测干扰”和“cTnⅠAAb”为关键词,对知网和SCI数据库从1995年至2023年发表的文献进行检索。结果 患者因右下肢动脉栓塞入院,心律失常,心房纤颤,全心增大,B型钠尿肽(BNP)水平大幅度升高,而cTnⅠ检测结果正常,其余心肌损伤标志物水平均大幅度升高;cTnⅠ复检结果正常,抗核抗体SSB、Scl-70、CENPB均显示为弱阳性,cTnⅠAAb强阳性;血清样本加入cTnⅠ-TnC抗原后,cTnⅠ回收率随着加入cTnⅠ-TnC抗原量的增多而上升,呈正相关(P<0.05),具有良好的线性关系(R^(2)=0.98);文献检索结果:共检索到文献35篇,排除15篇,最终保留文献20篇。结合病历分析和文献复习,该文主要从临床上干扰cTnⅠ免疫检测的角度出发,重点叙述cTnⅠAAb的研究进展,总结cTnⅠAAb干扰cTnⅠ免疫检测的成因和机制等研究现状。结论 cTnⅠAAb可与cTnⅠ特异性抗体竞争性结合cTnⅠ检测结果抗原表位负性干扰cTnⅠ的免疫检测,临床上遇到cTnⅠ检测结果和其他心肌损伤标志物严重不符时,应当积极寻找原因为临床提供精准的检验结果。

人心肌肌钙蛋白T的纯化和单克隆抗体的制备

从人左室心肌中成功纯化心肌肌钙蛋白Ｔ（ｃＴｎＴ）．经匀浆，７０℃加热处理，咪唑盐酸透析，ＤＥＡＥ－纤维素层析，１００ｇ心肌获取ｃＴｎＴ５ｍｇ，纯度为９７．６％．同时采用脾内免疫法，免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，经细胞融合，筛选，克隆化得５株稳定分泌抗人ｃＴｎＴ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞（Ｇ３，Ｇ８，Ｇ１０，Ａ５，Ａ７），４株为ＩｇＭ，１株为ＩｇＧ，染色体数目９２～１１０条．腹水效价为３．２×１０－６～１．６×１０－７．

冠心病患者血清心肌肌钙蛋白Ⅰ自身抗体检测的意义

目的观察冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)患者血清心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)自身抗体的阳性率和临床意义。方法病例对照研究。收集2015年9月至2016年5月南京大学医学院附属鼓楼医院心内科CHD患者200例和健康体检者200例,用间接ELISA法检测抗cTnI自身抗体(anti-cardiac troponin I antibodies,anti-cTnI),并分析其一般资料、相关临床生化指标和冠脉血管病变情况。结果 CHD患者anti-cTnI阳性率10.5%(21/200),健康体检者阳性率为2.0%(4/200),CHD患者高于健康体检者(P<0.01);根据抗体检测结果将研究对象分为冠心病患者抗体阳性组,冠心病患者抗体阴性组和健康对照者抗体阳性组。冠心病患者抗体阳性组中位年龄、Glu水平高于健康对照者抗体阳性组(P均<0.05),HDL-C、apo AⅠ水平低于健康对照者抗体阳性组(P均<0.01);CHD患者抗体阳性组中位年龄与Gensini评分高于抗体阴性组,而HDL-C水平低于抗体阴性者(P均<0.05)。结论 Anti-cTnI更可能出现在年龄较高且冠脉狭窄病变较严重的冠心病患者中,血清低HDL-C和apo AⅠ水平可能与anti-cTnI产生有关。

急性心肌梗死患者血清肌钙蛋白Ⅰ抗体检测的临床意义

目的通过分析急性心肌梗死患者血清中肌钙蛋白I抗体水平的变化,探讨其在急性心肌梗死中的临床意义。方法 2011年4月-2012年3月急性心肌梗死68例,分别于确诊及确诊后24 h内取静脉血检测肌钙蛋白I(cTnI)及肌钙蛋白I自身抗体,根据检测结果分为肌钙蛋白I自身抗体阳性组(13例)及阴性组(55例)。比较两组患者确诊时及24 h血清cTnI水平,同时采用Gensini积分和SYNTAX评分评价冠脉病变程度;分别记录、比较两组于确诊7 d及随访180 d的左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD),评价肌钙蛋白I自身抗体与急性心肌梗死患者近期、远期的心功能变化的关系。结果两组患者确诊时cTnI水平无显著性差异,但24 h cTnI阳性组水平[(13.57±7.38)μg/L]明显高于阴性组[(7.37±9.24)μg/L](P<0.01);两组中多支病变患者比例差异无统计学意义,但阳性组Gesini积分(85.54)、SYNTAX积分(15.73)明显高于阴性组(Gesini积分52.73,SYNTAX积分9.99)(P<0.01),PCI术后7 d与180 d两组患者的左室重构指数、LVEF也存在显著差异(P<0.05)。结论肌钙蛋白I自身抗体可能影响急性心肌梗死患者早期cT-nI的浓度,并导致cTnI峰值的延迟;而肌钙蛋白I自身抗体阳性往往提示患者血管病变较重,心肌梗死时累及范围较广,梗死面积较大。远期随访结果提示,肌钙蛋白I自身抗体的存在可能影响心肌梗死患者术后心功能的恢复。

用多克隆抗体构建的夹心免疫传感器检测心肌肌钙蛋白I

用表面等离子体子共振生物传感器构建对心肌肌钙蛋白 I特异性的免疫传感器检测心肌肌钙蛋白 I,并建立两种检测方法 :直接法的最低检测限为 2 .5 μg/L,基于传感膜上的夹心免疫法的灵敏度为 0 .5 μg/L,检测范围为 0 .5～ 2 0 μg/L,批内及批间精密度分别为 3 .5 %～ 4.9% ,6.1 %～ 7.4% ;用夹心法及国外试剂盒对 40名健康献血者和 2 0例急性心肌梗死患者血清心肌肌钙蛋白 I水平进行检测 ,两者符合率为 95 % .

^(99m)Tc标记抗心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体在实验性急性心肌损伤大鼠体内分布的研究

目的:研究99mTc标记的抗心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体(AcTnIMA)在实验性急性心肌损伤大鼠体内的分布,探讨99mTc-AcTnIMA是否可以作为心脏放射免疫显像剂。方法:实验组:20只急性心肌损伤大鼠注射99mTc-AcTnIMA0.2mci,分别于注射后2、4、6、8h处死(每次5只),取血液、肝、脾、肾、正常肌肉、肺和心脏,以计算每克组织放射性计数占总注入计数的百分比(ID%/g)及心-肺ID%/g比(HLR)。药物对照组:20只急性心肌损伤大鼠注射99mTc标记的非特异性免疫球蛋白(N-IgG)0.2mci,处死方法同实验组。取肺及心脏,计算ID%/g及HLR;空白对照组:20只正常大鼠注射99mTc-AcTnIMA0.2mci,处理方法同药物对照组。结果:急性损伤心肌对99mTc-AcTnIMA为特异性摄取,摄取的高峰时间为4h。结论:99mTc-AcTnIMA有望作为心脏放射免疫显像剂诊断急性心肌损伤。

人心肌肌钙蛋白T单克隆抗体的研制及鉴定

以人心肌肌钙蛋白Ｔ（ｃＴｎＴ）为抗原，采用脾内免疫法，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾淋巴细胞与小鼠Ｓｐ２／０细胞融合，经间接ＥＬＩＳＡ法筛选，三次克隆化后获得５株能稳定分泌抗ｃＴｎＴ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞Ｇ３、Ｇ８、Ｇ１０、Ａ５和Ａ７。免疫球蛋白亚类鉴定其中１株为ＩｇＧ２ａ，４株为ＩｇＭ。染色体数目９２～１１０条。将Ｇ３、Ｇ８、Ｇ１０、Ａ５的单克隆抗体腹水做１：１００稀释与ＬＤＨ、ＣＫ、ＣＫＭＢ和ＧＯＴ等心肌酶均无交叉反应。５株ＭｃＡｂ的腹水效价为３．２×１０－６～１．６×１０－７。ＭｃＡｂ相加试验表明，Ａ５和Ｇ３可识别不同的抗原表位。

人心肌肌钙蛋白T单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

目的 :建立抗人心肌肌钙蛋白T(cTnT)单克隆抗体 (McAb)的杂交瘤细胞株。方法 :从人心肌组织中提取纯化人cTnT ,免疫BALB/C小鼠 ,采用杂交瘤技术 ,间接ELISA法选择能稳定分泌抗cTnTMcAb的杂交瘤细胞株。结果 :建立了 2株稳定分泌抗cTnTMcAb的杂交瘤细胞株N15C和N16D ,其染色体数目为 90～ 10 6 ,McAbIg亚类均为IgG1,间接ELISA法测定McAb腹水效价分别为 1 80 0 0和 1 32 0 0 0。免疫印迹结果显示 2株McAb均可识别cTnT中Mr 为 370 0 0的单一区带 ,不识别人骨骼肌提取物。间接ELISA法测定N15C和N16DMcAb与cTnT反应的最低浓度分别为 4 7μg/L和 2 3μg/L。相加试验表明 2株McAb能识别不同的抗原表位。 结论 :获得

心肌肌钙蛋白I、抗心肌抗体与小儿心肌损伤的相关研究

目的 探讨心肌肌钙蛋白I(cTn -I)及抗心肌抗体 (AHA)与小儿心肌损伤的关系。方法 对 30例心肌炎 (MC)患儿及 1 8例正常儿童进行血清cTn -I、AHA、磷酸肌酸激酶同工酶 (CK -MB)测定。结果 ①MC组血清cTn -I、AHA、CK -MB的阳性率分别为70 .0 %、36 .7%、2 6 .7% ,均较对照组高 (P <0 .0 1 ) ,cTn -I与CK -MB阳性率比较差异有统计学意义 (P <0 .0 1 ) ;②MC发病病程≤ 1个月cTn -I阳性率较其他时期明显增高 (P <0 .0 5) ,而AHA阳性率较其他时期明显下降 (P <0 .0 1 ) ;③治疗 1 0dcTn -I下降≥ 50 %者及 2 0dcTn -I转阴者 ,临床症状和心律失常等改善明显优于cTn -I下降及转阴缓慢者 (P <0 .0 5)。结论 ①血清cTn -I的检测是判断心肌损伤的敏感指标 ,尤其适用于早期及微小心肌损伤的诊断 ;②血清AHA的检测是心肌损伤的后期诊断及预后判断指标。

人心肌特异性肌钙蛋白T单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗人心肌肌钙蛋白T的单克隆抗体。方法 利用纯化的人心肌肌钙蛋白T免疫BALB/C小鼠 ,常规方法制备抗人心肌肌钙蛋白的单克隆抗体 2株N15C和N16D。结果 利用普通ELISA方法检测 2株单抗 ,小鼠腹水N16D滴度可达 1/ 32 0 0 0 ,N15C滴度达 1/ 80 0 0 ;斑点酶联免疫吸附试验证明N16D对急性心肌梗塞患者血清中出现的肌钙蛋白T有较好的亲和性。

^(99m)Tc标记的抗心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体在心肌损伤大鼠体内的分布

目的研究99mTc标记的抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体(AcTnIMA)在实验性心肌损伤大鼠体内的分布,探讨99mTc-AcTnIMA是否可以作为心脏放射免疫显像剂。方法第一批大鼠实验组:20只急性心肌损伤大鼠注射99mTc-AcTnIMA0.2mci,分别于注射后2、4、6、8h处死(每次5只),取血液、肝、脾、肾、正常肌肉、肺、心脏,计算每克组织计数占总注入计数的百分比(ID%/g)及心-肺ID%/g比(HLR);药物对照组:20只急性心肌损伤大鼠注射99mTc标记的非特异性免疫球蛋白(N-IgG)0.2mci,处死方法同实验组。取肺及心脏,计算ID%/g及HLR;空白对照组:20只正常大鼠注射99mTc-AcTnIMA0.2mci,处理方法同药物对照组。第二批50只心肌损伤大鼠分别于发生心肌损伤后2、4、6、8、12、24h,3、5、10、15d分10次静脉注射99mTc-AcTnIMA0.2mci(每次5只),注射后4h处死,计算出ID%/g及HLR。结果损伤心肌摄取99mTc-AcTnIMA为特异性摄取,摄取的高峰时间为4h;损伤心肌摄取99mTc-AcTnIMA与损伤发生时间无关。结论99mTc-AcTnIMA有望作为心脏放射免疫显像剂诊断心肌损伤。

嗜异性抗体所致化学发光法检测心肌肌钙蛋白I假阳性1例

1临床资料患者女,68岁。主因“左足麻木2年,加重伴间歇性跛行半年”于2017年10月入北京大学第一医院。临床表现为间断左足麻木2年,近半年加重伴跛行,腰椎核磁示L1~S1椎间盘突出,为行手术收入骨科。既往乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阳性30年,糖尿病病史12年。否认高血脂、卒中、外周血管疾病史;否认吸烟史及心脏病家族史。入院查体:血压130/75 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),心率105次/分,双肺呼吸音清,未闻及啰音;心界不大,心律齐,各瓣膜听诊区未闻及杂音及心包摩擦音;未见异常血管征,双下肢无水肿。实验室检查示:心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)2.790 ng/ml(参考范围0~0.03 ng/ml),肌酸激酶(creatine kinase,CK)及肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)均正常。

人心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体及多克隆抗体的制备

目的:以重组人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)为抗原制备鼠源单克隆抗体(McAb)及兔源多克隆抗体,并鉴定抗体的特性。方法:以纯化的重组人cTnⅠ为抗原免疫BALB/c小鼠,取鼠脾细胞同Sp2/0骨髓瘤细胞融合,利用选择培养基筛选融合的杂交瘤细胞,用有限稀释法分离获得能够稳定分泌抗cTnⅠ的McAb阳性克隆,并利用体内诱生法大规模制备McAb,用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗体;兔多抗制备以cTnⅠ为抗原常规免疫后取其血清;用间接ELISA和Western印迹鉴定抗体的性质。结果:经ELISA鉴定,筛选出5株能分泌cTnⅠMcAb的杂交瘤细胞株,即C5B2、C5B3、C5B4、C5B1、B1A6,效价最高的B1A6株分泌的McAb为IgG3型,纯化后效价为1∶10000,亲和常数为1.08×10-9mol/L,Western印迹鉴定表明cTnⅠMcAb有良好的特异性;兔多抗纯化后的效价为1∶8000。结论:制备了具有良好特性的cTnⅠMcAb和多克隆抗体。

肌钙蛋白I与柯萨奇病毒特异抗体对病毒性心肌炎的临床价值

分别用固相免疫层析法和 EL ISA方法动态测定病毒性心肌炎组 ( VM,n=10 2 )、病毒感染组 ( VI,n=4 1)和对照组 ( n=4 6)的血清肌钙蛋白 I( c Tn I)和柯萨奇病毒特异性抗体 ( CBV- Ig M、Ig G)。结果 1VM组 c Tn I阳性率 70 .5 8% ,其中急性期阳性率达到 87.93 % ,明显高于普通心肌酶 CK、CK- MB和 L DH的 15 .69%( P<0 .0 1) ,而 VI组与对照组无 1例出现 c Tn I或心肌酶阳性。2 VM组 CBV- Ig M阳性率 ( 67.65 % )明显高于 VI组 ( 17.0 7% ) ,P<0 .0 5。 3在 VM组中 ,Ig M阳性者的 c Tn I阳性率 ( 73 .91% )明显高于 Ig G阳性者的 c Tn I阳性率 ( 4 3 .75 % ) ,P<0 .0 1;c Tn I阳性者中 Ig M阳性率 ( 83 .3 3 % )也明显高于 Ig G阳性率 ( 4 1.67% ) ,P<0 .0 1;而VM组中 c Tn I阴性者 Ig M阳性率 ( 3 0 .0 0 % )明显低于 Ig G阳性率 ( 60 .0 0 % ) ,P<0 .0 5。说明 c Tn I对 VM的心肌损伤具有良好的敏感性、特异性和准确性 ,明显优于普通心肌酶 ,对 VM急性期心肌损伤的敏感性更高。测定CBV- Ig M、Ig G有助于 VM常见病因和病期的诊断。c Tn I和 CBV- Ig联合测定可使 VM的诊断变得简单和成熟。

心脏肌钙蛋白Ⅰ与抗心肌抗体对类风湿关节炎的临床意义

目的:探讨心脏肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)与抗心肌抗体(AHA)对类风湿关节炎的诊断价值。方法:选择27例类风湿性关节炎(RA)患儿应用酶联免疫吸附试验法对其血清进行cTnI与AHA的测定,并同时检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)。结果:27例幼年性RA患儿中12例cTnI阳性,16例AHA阳性,正常对照组cTnI,AHA,CK-MB全部阴性,且AHA阳性组cTnI,CK-MB值明显高于AHA阴性组。结论:RA患儿cTnI,AHA敏感性高于CK-MB,且AHA阳性组心血管受累的可能性大,从而提示cTnI,AHA对RA患儿心脏受累及早期给予保护措施,具有重要的指导意义。

人心肌肌钙蛋白Ⅰ基因的原核表达及抗体制备

目的进行人心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)基因原核表达载体的构建,获得高纯度的心肌肌钙蛋白I并制备相应的多克隆抗体。方法利用RT-PCR方法从人心肌细胞的总RNA中克隆出编码人心肌肌钙蛋白的cDNA片段,将其插入原核表达载体形成重组体并导入宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达出带6个组氨酸标签的融合蛋白,Ni-NTA树脂纯化,纯化后的融合蛋白免疫小鼠,制备抗血清。通过ELISA,Western blot鉴定血清效价和特异性。结果成功构建了cTnⅠ的原核表达载体,并在大肠埃希菌中获得了高效表达。Western blot检测证实获得了抗cTnI抗体。结论成功表达了cTnⅠ蛋白并制备了其特异性抗体。