葡萄糖氧化酶基因转化棉花和抗性愈伤组织的获得

用葡萄糖氧化酶基因转化棉花 ,研究了影响转化和抗性愈伤组织获得的因素。结果表明 ,基因型和培养基构成是影响葡萄糖氧化酶基因转化棉花获得抗性愈伤组织的最关键因素 ,在本试验所采用的 8个基因型中 ,中棉所 1 3中 940 9(中棉所3 5)和中棉所 1 9较易诱导获得抗性愈伤组织 ,而珂字 2 0 1、中棉所 2 7等则较难 ;用于棉花遗传转化的感染时间以 7～ 1 0 min为宜 ,共培养时间以48h为宜 ;下胚轴比子叶易诱导获得抗性愈伤组织。在诱导愈伤组织的继代培养中 ,加入高浓度的卡那霉素是获得转化细胞的关键 ;

荔枝胚性愈伤组织体胚发生系统的优化及转化抗性愈伤组织培养再生植株

首先优化了荔枝(Litchi chinensis Sonn.)幼胚胚性愈伤组织(embryogenic calli,EC)体胚发生的条件,在附加5mg L-1 ZT的高糖(60 g L-1)高琼脂(10 g L-1)的MS培养基上获得了荔枝高频率(100％)体胚发生;同时,对荔枝体胚成熟和成苗的关键问题作了分析,建立了一套完整的荔枝体胚发生与再生系统,在附加10％椰子汁的高糖(6％)MS培养基上诱导体胚正常成熟,并在无激素MS培养基中诱导体胚萌发,为荔枝转基因研究提供了良好的受体系统.利用此再生系统对荔枝转基因抗性愈伤组织进行体胚发生与再生植株研究,获得了大量再生植株.

基因枪法导入Bar基因转化小麦幼胚的研究——抗性愈伤组织与再生植株的遗传转化

在前文研究基础上 ,轰击的 2 80 4个幼胚经 L - PPT筛选后共获得 2 5 9个抗性愈伤 ,对其中 2 0 0个抗性愈伤组织和再生的 32个植株 GU S gene的表达进行组织化学检测 ,以及再生植株的 PCR检测。研究结果表明 ,有 4 5个抗性愈伤组织呈 GUS阳性。32株再生植株中获得 4个抗性株系 ,经 X- Gluc染色 ,在花药中检测到 GU S基因表达 ,PCR检测也呈阳性 ,而在对照和其它再生植株中未发现 GU S和

水稻基因枪转化过程中抗性愈伤的生长规律

从籼稻基因枪转化过程中选择压的确定、愈伤组织的生长规律以及不同分化培养基对抗性愈伤出苗率的影响上 。

提高粳稻成熟胚抗性愈伤再生频率的研究

为提高粳稻抗性愈伤分化率和遗传转化率,以农杆菌介导遗传转化得到的水稻成熟胚抗性愈伤(Hyg)为材料,研究了影响粳稻成熟胚抗性愈伤组织再生频率的因素。结果表明分化培养基添加0.5～25 mg.L-1的CuSO4.5H2O,增加分化培养基中的琼脂浓度,分化前对抗性愈伤进行高渗处理,采用6-BA和KT两步分化法和干燥除菌法均能提高抗性愈伤组织的分化率。

棉花农杆菌介导转化体系中影响抗性愈伤组织诱导率的因素

以冀无2031为材料,采用正交设计方法,研究了农杆菌介导的棉花下胚轴遗传转化过程中菌液浓度、侵染时间、共培养时间和共培养温度对抗性愈伤转化效率的影响。结果表明,4个因素均对抗性愈伤的诱导率有极显著影响,其诱导效应依次是共培养温度>菌液OD值>侵染时间>共培养时间。按照正交设计的原则,最终得到农杆菌介导转化棉花下胚轴的最佳条件是:菌液OD值为0.3,侵染15 min,24℃共培养24 h,下胚轴抗性愈伤的转化效率最高。用珂312、中521和农大94-7对所选出的最佳组合进行了进一步验证,结果3个品种在优选组合下的抗性愈伤组织诱导率都很高,分别为93.85%、86.72%和85.83%。

豫麦18再生系统的建立及愈伤对抗生素G418抗性的研究

以小麦品种豫麦18为受体进行外源基因转移,以豫麦18的成熟胚为外植体进行愈伤诱导,通过分化培养基的分化获得小麦幼苗,建立了豫麦18再生系统。同时,通过实验认为,培养基中25mg/L的G418可以作为筛选转基因抗性愈伤的浓度。

蓖麻愈伤组织对铜的抗性研究(英文)

[目的]研究铜胁迫下蓖麻愈伤组织的增殖及其铜吸收作用。[方法]将配制成不同浓度的CuSO4·5H2O水溶液分别加入愈伤组织继代培养基,接种愈伤组织,计算出愈伤组织对铜的抗性指数。并通过火焰原子吸收光谱法测定愈伤组织铜含量。[结果]铜浓度60 mg/L条件下,愈伤组织的增长受到抑制,抗性指数仅为33.87%;铜浓度40 mg/L时,愈伤组织呈淡黄色,生长较快,抗性指数达到61.29%,并且这种抗性可以保持至连续继代培养6周之后。培养至第4周,铜浓度分别在10、20、30、40 mg/L各处理的抗性指数都高于第3周,各处理愈伤组织铜含量依次为0.33、0.54、1.16、1.40 mg/g。[结论]培养基铜含量40 mg/L可作为筛选铜抗性蓖麻愈伤组织的临界值。

蓖麻愈伤组织对铜的抗性研究

为了探讨蓖麻愈伤组织对铜的抗性,研究了铜胁迫下蓖麻愈伤组织的增长及其铜吸收作用。结果显示,铜浓度为60mg·L-1时,愈伤组织的增长受到抑制,抗性指数仅为33.87%;铜浓度为40mg·L-1时,愈伤组织呈淡黄色,生长较快,抗性指数达到61.29%,并且这种抗性可以保持至连续继代培养6周之后。培养至第4周,铜浓度(mg·L-1)为10、20、30、40各处理的抗性指数都高于第3周,各处理愈伤组织铜含量(mg·g-1)依次为0.33、0.54、1.16、1.40。培养基铜浓度为40mg·L-1可作为筛选铜抗性蓖麻愈伤组织的临界值。

辣椒子叶外植体高效离体再生及抗性愈伤组织诱导

为提高辣椒E29子叶外植体遗传转化效率,本研究建立了从E29子叶外植体愈伤组织中获得植株的高效离体再生体系,并优化了子叶外植体抗性愈伤组织获得的条件。结果表明,在添加2.0 mg·L^(-1)6-BA和0.5 mg·L^(-1)IAA的MS培养基中,大于98%的子叶外植体切口处可诱导愈伤组织。添加0.1 mg·L^(-1)2,4-D的MS培养基能高效促进愈伤组织增殖。添加9.0 mg·L^(-1)6-BA的MS培养基中,愈伤组织诱导芽点效果最好,20 d后芽点诱导率达11.27%。添加3.0 mg·L^(-1)6-BA、0.1 mg·L^(-1)IAA及0.3 mg·L^(-1)GA_(3)的MS培养基中,不定芽的伸长效果最佳,平均每块带芽点愈伤组织上可以产生2.01个伸长的不定芽。不添加任何激素的1/2MS培养基适宜生根,生根率可达100%。生根后的小植株炼苗后成活率可达98%。在此基础上优化E29子叶外植体抗性愈伤组织获得的条件,发现潮霉素B与特美汀(Timentin)最适筛选浓度分别为30mg·L^(-1)、300 mg·L^(-1),共培养最适时间为3 d,此条件下抗性愈伤组织诱导率可达到36.24%。该研究可为今后辣椒遗传转化体系的建立奠定基础。

水稻胚性愈伤诱导及其遗传转化的几个技术参数研究

以日本晴成熟种子及幼嫩种子为材料诱导形成胚性愈伤组织,经农杆菌介导将水稻隐花色素基因的4个RNAi和2个反义RNA表达载体分别转化日本晴愈伤组织,再经抗性筛选和分化培养诱导形成植株,经分子检测筛选出阳性转基因苗。对胚性愈伤诱导率、抗性愈伤率、分化出苗率及转化率进行统计分析。结果表明,成熟种子、新鲜成熟种子及幼嫩种子愈伤诱导率均大于81%,平均为86.67%,其中以新鲜成熟种子愈伤诱导率最高,达96.89%;抗性愈伤率成熟胚为22.21%-40.71%,平均为28.49%,幼胚为36.79%-43.21%,平均为40%,幼胚的抗性愈伤率高于成熟胚;分化出苗率成熟胚为59.29%-80.43%,平均为71.59%,幼胚为63.16%-72.73%,平均67.95%,幼胚与成熟胚差异不明显;转化率（Gus检测阳性率）成熟胚为43.07%-81.08%,平均61.59%,幼胚为58.33%-76.67%,平均67.50%,幼胚转化率稍高于成熟胚。

影响农杆菌介导玉米愈伤组织遗传转化因素的研究

用农杆菌介导玉米愈伤组织的转化,其筛选的结果得到的抗性愈伤组织受玉米愈伤组织的继代时 间、浸染的农杆菌菌液浓度、共培养的温度以及其共培养时间等因素的影响。玉米愈伤继代后7～9d,农杆菌 浓度为OD600值0.3左右、共培养温度约22℃、培养时间3d时,抗性愈伤的获得率最高。

农杆菌介导的玉米愈伤组织遗传转化影响因子和植株再生条件

以HiⅡ、HiⅡB、HiⅡA、H99玉米材料的幼胚诱导的胚性愈伤为转化受体，利用农杆菌介导转化的方法，将抗粗缩病RNA干扰基因导入玉米愈伤组织，并对影响转化的因素进行研究，以优化遗传转化体系。结果表明：继代3次的4种玉米材料的抗性愈伤率最高，且不同品种间存在差异，HiⅡ的抗性愈伤率最高，为31．25％，其次为HiⅡB（26．56％）、HiⅡA（24．45％），H99的抗性愈伤率最低，仅为10．26％；预培养6d的愈伤组织适于转化，其中HiⅡ的抗性愈伤率最高，为27．70％；结果还表明，菌液浓度D600nm=0．5-0．6是最佳的转化条件。通过优化后的条件对得到的抗性愈伤用除草剂进行筛选，HiⅡ、陇ⅡB、HiⅡA、H99材料分别得到10、5、4、3块抗性愈伤组织；标记基因为bar基因，通过PCR检测分别得到5、2、2、1块阳性愈伤组织，再进一步用bar基因试纸条检测，分别得到4、1、2、1株阳性植株。

抗虫、抗除草剂转基因玉米的获得及遗传研究

利用PIG基因枪 ,将cryIA(b)基因和bar基因 ,采用共转化法导入玉米自交系的幼胚中 ,经PPT筛选 ,获得抗性愈伤组织并再生植株。除草剂抗性检测、点杂交和Southern杂交分析表明 ,在多数转基因植株中cryIA(b)基因和bar基因共整合 ,且呈孟德尔单位点显性基因连锁遗传。Northern杂交及ELISA检测表明 ,cryIA(b)基因在转录和翻译水平进行了有效的表达。

高效抗虫基因PinⅡ转化水稻的研究

利用农杆菌介导的转化方法对1个籼稻品种和3个粳稻品种进行了转化。所用质粒为pCAMBI1300,其上带有马铃薯蛋白酶抑制剂基因PinⅡ和高效启动子ACTⅠ以及调节子Intron。通过添加有利于转化的物质乙酰丁香酮及影响转化的各因素(农杆菌的培养方法、共培养天数、愈伤组织诱导方法及继代次数)进行综合优化后,建立了农杆菌介导的水稻高效转化体系。将成熟胚用pCAMBI1300/LBA4404浸染后,筛选出抗性愈伤组织并获得转化植株。其中抗性愈伤组织产生率最高达51 8%(粳稻)和31 5%(籼稻),转化植株再生率最高达67 6%(粳稻)和47 5%(籼稻)。初筛苗中PCR阳性苗得率最高达33 3%(粳稻)和27 4%(籼稻)。PCR结果初步表明PinⅡ基因已整合到水稻基因组中。田间抗虫试验初步表明,阳性苗虫害率低于其受体亲本虫害率。本研究还在转基因水稻中发现了性状明显变异的植株,是进行水稻遗传背景分析和优良性状利用的宝贵材料。

口蹄疫抗原决定簇融合基因转化胡萝卜的研究

利用转基因植物生产疫苗是目前植物基因工程的一个研究热点,具有生产简单、成本较低、使用安全方便、易贮存等优点.本实验通过农杆菌介导的遗传转化,以O型和A型口蹄疫抗原决定簇基因O21O14A21转化胡萝卜.通过筛选,获得潮霉素抗性愈伤组织,经胚状体再生得到156棵抗性苗.通过GUS染色检测,GUS报告基因在部分转化的愈伤组织中瞬时表达,并在部分抗性苗中稳定表达.对部分抗性植株进行PCR和PCRSouthern杂交检测,证实目的基因已经成功整合到胡萝卜基因组中.

柳枝稷基因枪转化法中国产裂解膜代替进口膜的可行性研究

利用国产和进口裂解膜转化柳枝稷(Panicum virgatum L.)愈伤组织,对裂解膜裂解时的压强、抗性愈伤率、分化再生苗及阳性转化率进行统计分析。结果表明:国产裂解膜在裂解时压强的稳定性略低于进口膜,但其平均值差异不显著;除抗性愈伤率国产裂解膜显著低于进口膜外(P<0.05),其余各指标差异均不显著。因此,在柳枝稷基因枪转化法中国产裂解膜完全可以代替进口膜,节约试验经费。

抗赖氨酸加苏氨酸芦笋细胞变异体的筛选与鉴定

1974年,Green 等提出用赖氨酸加苏氨酸可能筛选得到积累赖氨酸、苏氨酸或甲硫氨酸的突变体。迄今已在玉米,大麦,胡萝卜等材料中得到成功。本实验的目的在于建立有效的芦笋筛选体系并得到对赖氨酸加苏氨酸具抗性的愈伤组织,为进一步得到天冬氨酸族某些氨基酸含量提高的芦笋突变体奠定基础。

农杆菌介导玉米遗传转化影响因子的研究

以东北春玉米自交系7922、340、78599、921及美国杂交种H99等幼胚愈伤组织为受体,利用农杆菌介导法转化Bt(CryIA.)基因,研究菌液预处理、愈伤组织状态、侵染培养基、侵染时间及共培养条件等因素对转化频率的影响。根据转化愈伤组织的除草剂(Basta)抗性筛选结果评估转化率,表明继代培养3￣5d的愈伤组织适于转化,其中以继代5d的7922愈伤组织转化率最高,为46.6%;不同基因型对农杆菌转化率存在差异,H99的抗性愈伤组织率为34.57%,7922为26.27%、340为21.36%、78599和921抗性愈伤组织率仅为8.02%和6.78%。基因型间差异显著;浸染培养基中加入(AS100￣200mg/L)抗性愈伤转化率明显提高;菌液浓度OD6000.5￣0.6、侵染时间5￣10min、共培养时间3d最佳。

农杆菌介导籼稻转化体系的优化

以8个籼稻品种作材料，研究了携带抗稻瘟病基因Pi9片段的pCAMBIA1301质粒的根癌农杆菌EHA105转化籼稻幼胚愈伤组织的影响因素。结果表明，NB培养基适用于籼稻愈伤组织的诱导，共培养时间以3d为宜。40mg/L的潮霉素可用于籼稻愈伤组织的筛选，抗性愈伤率在69．4％-85．3％之间；抗性愈伤组织经分化培养，幼苗分化率在15．4％-47．4％；鉴于多数籼稻愈伤组织分化时对潮霉素特别敏感，因此分化培养基中不加潮霉素；但为了减少假阳性，生根培养基中分别用20mg／L和30mg／L的潮霉素对幼苗进行筛选。