用抗性筛选法选育γ-亚麻酸(GLA)高产菌株

以深黄被孢霉 (Mortierellaisabellina)为出发菌株 ,经紫外线诱变处理 ,采用抗性筛选法 ,直接在梯度平板上挑取抗脂肪酸脱氢酶抑制物抑芽丹 (maleichydrazide)的菌株进行初筛 ,然后经摇瓶发酵法测定相关性能指标进行复筛 ,获得一株生产性能比出发菌株显著提高的突变株M80 ,其菌体收率达 2 5 1 0 g/L、油脂产率达 1 2 35g/L、γ 亚麻酸 (GLA)产率达771 88mg/L。

组合抗性筛选法选育达托霉素高产菌株

目的利用组合抗性筛选法选育达托霉素高产菌株。方法以玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus ATCC 11379)为出发菌株,通过在不同浓度梯度的达托霉素和链霉素复合抗性平板上进行抗性筛选。结果筛选到一株高产达托霉素的突变株D1000-S3-2,经摇瓶发酵验证达托霉素发酵单位可达59mg/L,比出发菌株提高了63.8%。结论实验证明组合抗性筛选是一种简单高效筛选方法。

紫外诱变和氨基酸抗性筛选选育那西肽高产菌株

目的筛选出那西肽高产菌株。方法以活跃链霉菌CB040517作为出发菌株,通过紫外-氯化锂诱变处理,并结合前体复合氨基酸抗性筛选,选育那西肽高产菌。结果通过致死率和正突变率的考察,确定紫外最佳诱变剂量为100s。在分离培养基上层加入氯化锂和底层加入复合氨基酸进行正突变株的定向筛选,选育得到那西肽高产菌株UV-19-A12,其摇瓶效价达904.00μg/mL,比出发菌株提高72.5%,经过五代斜面传代试验考察,该菌株遗传性状稳定。结论紫外诱变和氨基酸抗性筛选可以获得那西肽高产菌株。

达托霉素生产菌(ATCC31568)的紫外诱变和抗生素抗性筛选

目的建立一种提高达托霉素生产水平的方法。方法以玫瑰孢链霉菌(ATCC31568)为出发菌株,利用紫外诱变结合抗生素抗性筛选以提升达托霉素生产水平。结果通过对致死率和正突变率的考察,确定紫外诱变时间为45s,利福平和庆大霉素的合适筛选浓度分别为1.4μg/mL、1.0μg/mL,得到的突变株经摇瓶发酵后,采用高效液相色谱仪(HPLC)对最终发酵液进行检测。筛选到的突变株Ge-27最高产量达到79.44 mg/L,比原始菌株提高了42.2%。结论采用紫外诱变结合抗生素抗性筛选得到了达托霉素合成水平提高的菌株。

苜蓿对褐斑病抗性筛选研究

在实验室条件下 ,就国内外收集的 2 50份苜蓿种质材料幼苗对褐斑病的抗性进行了筛选和评价。结果表明 ,苜蓿种质材料的抗病性存在很大差异 ,幼苗发病率为 11.1%～ 10 0 % ,病情指数为 4 .1～ 73%。有 4 5份 (占总数 18% )的病指数低于 2 0 % ,且全部为国外品种。大部分材料( 78% )的病指数为 :2 0 %～ 60 %。病指数大于 60 %的 10份最敏感的材料中有 6份来自国内 。

复合诱变和抗性筛选高产谷胱甘肽酵母菌株

对75株酵母菌经初筛、复筛和单倍体分离,得到胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量较高的单倍体酵母菌株S1(a),并进行遗传标记。经硫酸二乙酯诱变、紫外诱变及两者的复合诱变,ZnCl2、乙硫氨酸抗性交替筛选得GSH含量较高的单倍体F4(a,Arg-,ZnCl2r,Ethr),GSH含量与产量分别比出发单倍体提高了73.5%和118.1%。

用自身次生代谢产物抗性筛选宁南霉素高产菌株

宁南霉素是诺尔斯链霉菌西昌变种产生的一种胞嘧啶核苷肽型新抗生素,它对多种病毒、细菌和真菌引起的作物病害都有较好的防治效果,毒性低、残留量小,无蓄积作用,具有良好的应用前景.然而它的原始菌株 16A—6发酵单位仅 700U/ml^1000U/ml,严重阻碍了它的推广应用.

云南传统水稻品种对白背飞虱的抗性筛选

[目的]初步筛选云南传统水稻品种对白背飞虱的抗、感性差异,为进一步研究白背飞虱的抗虫水稻种质资源奠定基础。[方法]在实验室条件下分析比较了13个来自云南元阳的地方水稻品种抗白背飞虱等级,不同品种对白背飞虱若虫生长发育的影响以及白背飞虱在各个品种上的取食量和产卵差异。[结果]在13个传统品种中,‘红皮糯谷’、‘绿脚谷’和‘车甲谷’无论在苗期还是分蘖期对白背飞虱的抗性等级均较一致。上述品种中,白背飞虱在‘红皮糯谷’、‘绿脚谷’和感虫对照‘TN1’上24h的蜜露斑面积测定结果均>45mm2,单雌产卵量超过90粒,孵化率高于80%;而在‘车甲谷’和抗虫对照‘RHT’上24h的蜜露斑面积测定结果均<20mm2,单雌产卵量均低于60粒,孵化率不足57%。白背飞虱若虫的发育历期在各供试品种之间的差异不明显。[结论]白背飞虱在‘红皮糯谷’和‘绿脚谷’上的取食量、单雌产卵量和孵化率均较高,可以初步确定为感虫品种;而在‘车甲谷’上的取食量、单雌产卵量和孵化率均较低,初步确定属于抗虫品种。

抗性筛选在抗生素高产菌选育中的应用

抗生素产生菌的产抗能力与其对抗生素的抗性之间具有一定的相关性,这为抗生素高产菌株的定向筛选提供了一种有效方法,即抗性筛选。综述了抗生素高产菌选育中抗性筛选的机理及其应用。

链霉素抗性筛选法在柔红霉素产生菌S.coeruleorubidus var.zhengding SIPI 1482菌种选育中的应用

采用链霉素抗性筛选法 ,用含链霉素的高氏一号合成培养基筛选天蓝淡红链霉菌 SIPI 1482菌株对链霉素的抗性自发突变株 ,检测突变株产抗生素水平。实验结果发现 ,在 SIPI 1482菌株的链霉素抗性自发突变株中 ,正向突变的频率比较高 (34% ) ,同时获得了产抗生素能力是原菌株的 1.

草坪草对除草剂的抗性筛选试验(初报)

选择了５种常用除草剂，对７种草坪草１０个品种进行播种后土壤封闭处理试验。结果表明，不同种的草坪草对除草剂的抗性不同，属同一种的不同品种间对除草剂的抗性也不同。因此，在使用除草剂防治草坪杂草时，应先进行抗性试验，再行推广。

甘蔗组织培养中不同阶段的抗生素及PPT抗性筛选试验

本试验在甘蔗高效再生体系的基础上,在心叶愈伤组织诱导、胚性愈伤组织芽分化、生长以及生根各阶段的培养基中,分别附加不同质量浓度的G418、潮霉素(Hyg)和除草剂PPT3种选择性试剂,以确定甘蔗遗传转化所用的最佳筛选浓度.试验表明:福农81-745(糖蔗)与Badila(果蔗)2个品种对G418、Hyg和PPT的抗性差异不大;G418、潮霉素和PPT在甘蔗组培各个阶段均对外植体有强烈的抑制作用.因此建议在甘蔗遗传转化中,G418和Hyg对甘蔗愈伤组织诱导生长,芽分化、生长及试管苗生根3个阶段的抗性筛选质量浓度均为30mg·L-1;PPT对愈伤诱导生长和芽分化、生长2个阶段的抗性筛选质量浓度为0.75mg·L-1,而生根阶段为1.00mg·L-1.

用庆大霉素抗性筛选法选育西罗莫司高产菌株

用紫外线对吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)NP03进行诱变,再采用庆大霉素抗性筛选法进行处理,剂量分别为0、0.01、0.03、0.05和0.08μg/ml,共获得113株抗性突变株,其中西罗莫司产量高于出发菌株的有51株,突变株NP03-74#的生产能力达到出发菌株的134%,且遗传特性稳定。

野生白芨再生体系的建立及抗性筛选

建立白芨的再生体系和优化抗性筛选的最佳条件,为野生白芨高效遗传转化体系的建立奠定基础。以野生白芨种子为外植体,研究野生白芨种子在萌发、愈伤组织诱导、丛生芽分化和增殖以及不定根诱导的最佳培养基,并利用梯度筛选出其对卡那霉素(Kan)和氨苄青霉素(Amp)的抗性。种子萌发最佳培养基为1/2MS+0.8 mg/L NAA+0.2 mg/L 6-BA+100 g/L马铃薯;不定芽分化最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+8 mg/L硝酸银+50 g/L马铃薯,诱导率高达95%;诱导生根最佳培养基为1/2MS+0.8 mg/L NAA+0.2 mg/L 6-BA+100g/L马铃薯。100 mg/L Kan和100 mg/L Amp为野生白芨遗传转化的最佳筛选压;培养过程中添加外源有机物可以有效地促进愈伤组织和不定芽的分化与增殖。建立了野生白芨种子的再生体系,发现了野生白芨种子的第3条发育途径——愈伤组织分化途径,并筛选出了适宜于野生白芨遗传转化体系的Kan和Amp筛选压。

露草卡那霉素(Kanamycin)抗性筛选研究

露草种子卡那霉素(Km)抑制发芽试验结果显示,在含有Km的MS固体培养基上露草种子萌发苗芽长、主根长、侧根数明显减小,子叶颜色由绿转黄;培养皿浸种发芽,当Km浓度达到100mg/L时,萌发苗子叶颜色为黄色。由此确立了卡那霉素筛选转基因露草种子的适宜方法。

链霉素抗性筛选法在选育博来霉素A2组分高产菌株中的应用

应用链霉素抗性筛选法提高博来霉素产生菌Streptomycin verticillus SIPI 7011产博来霉素A2组分的产量,将经紫外线诱变处理过的博来霉素产生菌孢子涂布在含有链霉素最小抑制浓度(180μg/ml)的培养基平板上,获得了151株链霉素抗性突变株。其中博来霉素A2产量高于出发菌株的有19株,产量阳性效率达到12.6%,并获得一株产抗生素能力为出发菌株约1.25倍的突变株。

番茄组培苗的不同阶段对抗生素和PPT的抗性筛选试验

以番茄高效再生体系为基础,在番茄子叶和下胚轴的出愈、芽分化生长以及生根的各阶段培养基中,分别添加不同质量浓度的卡那霉素、新霉素和除草剂PPT三种选择性试剂,以确定番茄遗传转化所需的最佳筛选质量浓度.试验表明:T79和T151两个自交系对卡那霉素、新霉素、除草剂的抗性差异不大;卡那霉素与PPT在组培的各个阶段均对外植体有强烈的抑制作用,而新霉素对它们的抑制作用则不明显;在番茄组培的不同阶段、不同外植体对卡那霉素和PPT的反应存在较大差异,以下胚轴出愈对卡那霉素反应最敏感,子叶出愈和生根阶段对其反应迟钝;下胚轴出愈和芽分化对PPT的反应较敏感,子叶出愈对其反应较迟钝.因此建议在番茄遗传转化中,卡那霉素对子叶出愈和生根阶段的筛选质量浓度为100mg·L-1,对下胚轴出愈为50mg·L-1,对芽分化及其生长为70mg·L-1;而除草剂PPT对子叶出愈阶段的筛选质量浓度为1.0mg·L-1,对下胚轴出愈为0.5mg·L-1,对芽分化和生根阶段为0.75mg·L-1.

近等基因导入系对生物和非生物胁迫的抗性筛选初报

以籼稻恢复系成恢448和保持系川香29B为受体品种,从全球水稻分子育种计划的核心种质中选择100￣110个材料做供体品种,构建了成恢448、川香29B近等基因导入系各2500份。将这些回交后代在生物和非生物胁迫环境中进行大规模筛选,获得了一批对低磷、干旱、稻瘟病和白叶枯病有较强抗、耐性的导入系,以及产量配合力好、高抗稻瘟病的新恢复系。

三种植物病原真菌对精纯多菌灵和嘧菌酯的抗性筛选

用含精纯多菌灵和嘧菌酯的培养基分别对水稻纹枯病菌、水稻稻瘟病菌、油菜菌核病菌进行室内抗药性筛选。发现水稻纹枯病菌随着筛选代数的增加,其EC50值上升明显,第12代对精纯多菌灵和嘧菌酯的抗性倍数分别达25.2倍和127.0倍。水稻稻瘟病菌随着筛选代数的增加,其EC50值变化不明显,第15代对两种药剂的抗性倍数分别为1.2倍和1.1倍。而油菜菌核病菌随着两种药剂的筛选,在含药培养基(药剂浓度为初发菌株的EC50)上的生命力迅速降低,抗性筛选无法进行。