抗日本血吸虫病分子疫苗(SIEA28kDa)氨基酸组成的分析

目的采用反向高效液相色谱方法分析SIEA28kDa蛋白分子的氨基酸组成。方法用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生反相高效液相色谱法测定SIEA28kDa抗原组分样品中氨基酸成分,并在Expasy中数据分析与比较。结果SIEA28kDa分子抗原主要由13种氨基酸组成。其中,甘氨酸在其氨基酸组成中比值最大,在Expasy中根据其氨基酸组成的比值及其一级属性参数比较发现6种Score值较高的血吸虫蛋白质分子,但SIEA28kDa分子与它们均有不同方面的差别。结论SIEA28kDa分子可能不是6种Score值较高的血吸虫蛋白质分子中的任何1种,但与它们在氨基酸组成上具有较高的相似性,而与GST相似性较低。

抗日本血吸虫病天然分子疫苗免疫猪血清筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库结果分析

目的通过天然分子疫苗免疫猪血清作为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库,应用表达序列标签获得日本血吸虫新基因。方法制备天然分子免疫猪血清,将筛选的尾蚴cDNA文库中大肠杆菌XL1-Blue侵入大肠杆菌BM25.8后环化成质粒,筛选出已转入质粒的菌株。提取质粒DNA,进行测序,得到一个表达序列标签(EST)。通过NCBI网站的BLASTx及BLASTn公共数据库,编辑分析EST序列并进行同源性比较。结果从26个克隆样品中筛选出8个阳性克隆,其中有一个新基因(GenBank登录号DQ097517),该基因全长861bp,有完整的阅读框架,与蜜蜂(Apismellifera)SMC3蛋白编码的mRNA基因序列同源性最高。结论疫苗免疫猪血清可作为筛选日本血吸虫新基因的有效探针,新发现1个日本血吸虫相关基因。

日本血吸虫天然抗病分子疫苗的结构与功能分析 Ⅰ.未成熟卵28kDa分子的快速分离纯化与鉴定

为了进一步研究日本血吸虫天然抗病分子(SIEA 28 kDa)的结构与功能,采用SDS-PAGE制备电泳和电洗脱法从日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA)中快速分离纯化了SIEA 28 kDa抗原分子,纯化后抗原分子经梯度凝胶电泳分离,重复测定其分子量。同时,采用Western blot和ELISA检测SIEA 28 kDa分子的免疫活性及其生化纯度。证实获得的提取物SIEA 28 kDa抗原分子的纯度高、活性好;用该抗原分子免疫家兔获得的单特异性抗血清可同时识别日本血吸虫未成熟虫卵、雌虫和雄虫的28 kDa抗原组分。说明该分子与日本血吸虫成虫(AWA)28 kDa组分具有部分交叉抗原性。

日本血吸虫天然抗病分子疫苗的结构与功能分析II.SIEA 28kDa分子的高效液相色谱分离及薄层等电聚焦分析

采用高效液相离子交换法对电泳纯SIEA 28 kDa抗原组分进一步分离纯化。对获得的色谱纯SIEA 28 kDa抗原分子进行薄层等电聚焦分析,测定其等电点。结果证明电泳纯SIEA 28 kDa抗原分子经高效液相离子交换法纯化后,280nm、220nm波长色谱图均为一个两侧对称、光滑的高峰曲线,色谱洗脱液对其免疫活性光密度图也为一个两侧对称、光滑的高峰曲线。色谱纯化证明SIEA 28 kDa抗原组分可能为单一分子,其等电点范围在p15-p17之间。

口服抗原疫苗预防小鼠日本血吸虫病的初步试验

为了观察口服可溶性血吸虫成虫抗原疫苗预防小鼠日本血吸虫病的效果，本试验应用生物可降解的天然高分子材料──壳聚糖作为载体[1，2]，运用单凝聚法[4]制成粒径500～1500μm的可溶性血吸虫成虫抗原微囊，胃饲ICR小鼠，经3次免疫后人工感染日本血吸虫，4周后剖杀小鼠。结果，试验组获得43．23％（P＜0．05）减虫率和41．18％（P＞0．05）减雌率。血吸虫抗原微囊体外释放试验表明，在0．01MolpH7．2PBS中微囊4h后即开始释放抗原，至第7天时抗原释放结束，累积释放抗原95．87％。

抗日本血吸虫病双价疫苗pVAX1/SjCB·hIL-18的构建及其动物保护性研究

目的探讨抗日本血吸虫病双价疫苗pVAX1/SjCB·hIL-18的构建以及对小鼠的保护作用。方法构建pVAX1/SjCB、pVAX1/hIL-18单价疫苗以及pVAX1/SjCB·hIL-18双价疫苗,选择100只无特定病原体的雌性小鼠,随机分为pVAX1/SjCB·hIL-18组、pVAX1/SjCB组、pVAX1/hIL-18组、pVAX1组和对照组各20只。分别于第0、2、4周在小鼠的背部皮下注射疫苗100μg,pVAX1组和对照组分别注射pVAX1和生理盐水。比较各种小鼠间的减虫率和减卵率。结果 pVAX1/SjCB·hIL-18组、pVAX1/SjCB组、pVAX1/hIL-18组小鼠的减虫率以及减卵率均明显高于pVAX1组和对照组小鼠(P<0.05)。pVAX1/SjCB·hIL-18组小鼠的减虫率以及减卵率明显高于pVAX1/SjCB组和pVAX1/hIL-18组小鼠(P<0.05)。结论 pVAX1/SjCB、pVAX1/hIL-18单价疫苗以及pVAX1/SjCB·hIL-18双价疫苗均对日本血吸血虫病具有良好的保护效果,其中pVAX1/SjCB·hIL-18双价疫苗的保护作用最佳,值得临床推广。

日本血吸虫多价分子疫苗的制备及其抗原性的研究

为了制备足量、高纯度的供血吸虫保护性免疫力研究的多价分子疫苗。通过制备型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和电渗方法从日本血吸虫成虫分离纯化出２８ＫＤ，３１／３２ＫＤ及９７ＫＤ蛋白。经ＢＣＡ法检测蛋白含量，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测蛋白纯度和分子量，Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ及ＥＬＩＳＡ检测其抗原活性。结果日本血吸虫成虫２８ＫＤ，３１／３２ＫＤ及９７ＫＤ三种纯化蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测均为单一条带并与所分离的蛋白分子量相符；其蛋白含量分别为０．３５ｍｇ／ｍｌ，０．４ｍｇ／ｍｌ和０．３ｍｇ／ｍｌ；Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ均为单一反应区带；ＥＬＩＳＡ反应滴度分别为１∶６４０、１∶１２８０和１∶３２０。结果说明，由制备型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和电渗析方法制备的日本血吸虫成虫２８ＫＤ，３１／３２ＫＤ及９７ＫＤ蛋白多价分子疫苗，具有纯度高、制备快、回收率高等优点。

日本血吸虫成虫67kDa分子抗原的纯化及其对血吸虫病的诊断和疗效考核

目的 为检测日本血吸虫成虫６７ｋＤａ分子抗原（ＳｊＡＷＡ６７）对血吸虫病的诊断及疗效考核价值。方法 通过 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和电渗方法，从日本血吸虫成虫抗原中分离纯化出 ６７ｋＤａ分子抗原，并用该抗原包被酶标反应板微孔，进行ＥＬＩＳＡ检测。结果ＳｊＡＷＡ６７的纯度已达到电泳纯和免疫纯，对急、慢性血吸虫病患者血清的检出率分别为１００％和９５％，与正常人血清、肝吸虫病和肺吸虫病患者血清均未出现明显的交叉反应，４４例血吸虫病患者治疗后３、６和１２个月后的阴转本分别达４５．５％、７５．０％和９０．９％。结论 ＳｊＡＷ６７分子抗原具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。

日本血吸虫病抗病疫苗研究展望

本文探讨了抗病疫苗研究的意义、疫苗研制的对策和依据．认为抗病疫苗研究主要集中于抗虫卵疫苗（抗生殖疫苗、抗胚胎发育疫苗和抗毛蚴疫苗等）和抗免疫病理疫苗．设想在血吸虫感染前通过抗病疫苗接种，诱导宿主的“调节状态”（ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｓｔａｔｅ）抑制虫卵肉芽肿（Ｇｒ）的形成，减轻慢性感染造成的病理损害．文中列举了抑制Ｇｒ形成的一些探索．日本血吸虫２６和２８ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ）。

钙纳米颗粒作为血吸虫病抗独特型抗体疫苗佐剂的研究

目的 探索钙 (Ca)纳米颗粒作为日本血吸虫病抗独特型抗体 NP30疫苗佐剂的可行性。方法 将钙纳米颗粒与 NP30制备成 Ca- NP30结合物 (Ca- NP30 ) ,主动免疫 BAL B/ c小鼠 ,观察其对小鼠的保护性作用并探讨其免疫保护机制。结果 Ca纳米颗粒可增强 NP30对宿主的保护性作用 ,减虫率明显提高 ,从单用 NP30的 30 .4%提高到 5 7.8% ;血清特异性抗体 Ig G水平较对照组显著升高 ;足垫试验可引发迟发型变态反应。结论 Ca纳米颗粒可作为血吸虫病抗独特型抗体 NP30疫苗的佐剂 ,其作用机制与同时引起宿主体液免疫和细胞免疫应答增强有关。

日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗抗生殖免疫的研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶ＢＤＮＡ疫苗的保护。方法 分别用Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫昆明鼠和ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠，攻击感染后６ｗ 计数成虫负荷及粪便和组织内虫卵数。结果 用构建的Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫小鼠可影响成虫发育，肝组织减卵率为５９－３％～６５－０％ ，肠组织减卵率为５７－６％ ～６２－１％ ，粪便减卵率为８６－５％ 。结论 Ｓｊ３１ＢＩＮ 可诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。

日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS-PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AWA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。

LPZQL和PZQL的研制及其抗小鼠的日本血吸虫病活性的比较

以提取的大豆卵磷脂为膜材，采用逆相蒸发法制备了左旋吡喹酮脂质体（ＬＰＺＱＬ）和吡喹酮脂质体（ＰＺＱＬ）。用ＡＣ ９２０ 红细胞分析仪和扫描电镜检测显示：ＬＰＺＱＬ 和ＰＺＱＬ 粒径大部分为２～４μｍ ，主要为大单层脂质体，对ＬＰＺＱ 和ＰＺＱ 包裹率达９８％ 以上。用ＬＰＺＱＬ，ＰＺＱＬ和ＰＺＱ 对感染日本血吸虫病的小鼠进行灌胃治疗，探讨了两种脂质体对小鼠抗日本血吸虫病的活性。动物实验表明：ＬＰＺＱＬ疗效较ＰＺＱ 高４ 倍；ＰＺＱＬ疗效较ＰＺＱ 高２ 倍。脂质体作为靶向制剂，降低了ＬＰＺＱ 和ＰＺＱ 的治疗剂量，提高生物利用度，可望成为抗日本血吸虫病的新剂型。

东方田鼠抗日本血吸虫病的研究进展

东方田鼠(Microtus fortis)亦称米氏田鼠(MicrotusMichnoi)、长江田鼠、沼泽田鼠、苇田鼠,俗称湖鼠,属啮齿目(Rodentia)、仓鼠科(Cricitidae)、田鼠亚科(Microcinae)、田鼠属(Microcus).

日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗血清抗体与抗生殖免疫关系的初步研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗 (Sj31B1N)抗生殖免疫的可能机理。 方法 用Sj31B1N免疫小鼠 ,每 2周 1次 ,每次免疫前均尾静脉采血 1次 ,作血清抗体动态变化分析 ,免疫 4次后尾蚴攻击感染。感染后 4 5天 ,计数成虫负荷和肝、肠组织内虫卵数。结果 用Sj31B1N免疫小鼠后第 2周部分小鼠血清中出现了抗体 ,随时间延长 ,出现抗体阳性组小鼠数量增多 ,抗体滴度增加。抗体阳性组小鼠与阴性组小鼠对比 ,成虫减少率为 4 0 .6% ,肝组织减卵率为 4 8.0 % ,肠组织减卵率为 4 5.4 %。结论 核酸疫苗Sj31B1N可有效地诱导小鼠产生抗体 ,并且具有免疫保护作用。核酸疫苗Sj31B1N所诱导的体液免疫可能是抗日本血吸虫生殖免疫的机理之一。

日本血吸虫Mr23000抗原与白细胞介素-12多价DNA疫苗诱导小鼠保护性免疫的研究

目的研究能共同表达日本血吸虫Mr23000膜抗原(Sj23)与白细胞介素-12(IL-12)的多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23诱导BALB/c小鼠免疫保护作用。方法在多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23和PV-IL12的基础上,构建空白质粒PV和仅表达Sj23的质粒PV-Sj23。50只BALB/c小鼠分为5组,每组10只,分别注射多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23、表达Sj23的质粒PV-Sj23、表达IL-12质粒PV-IL12、空白质粒PV和生理盐水,100μg/只,免疫1次。4周后每只鼠攻击感染40±2条尾蚴,42d后剖杀,计数成虫及肝内虫卵数。结果成功地构建了空白质粒PV和只表达Sj23的质粒PV-Sj23及多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23。PV-IL12-Sj23组和PV-Sj23组分别获得了45.5%和27.2%的减虫率,两组比较差异有显著性(P<0.05),减卵率分别为58.4%和33.9%。结论多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23可诱导BALB/c小鼠产生较显著的抗血吸虫免疫保护作用,且保护性效果比单价DNA疫苗PV-Sj23好。

日本血吸虫多价分子疫苗的保护性免疫力研究

本实验将从日本血吸虫成虫分离纯化出的２８ｋＤａ、３１／３２ｋＤａ及９７ｋＤａ蛋白混合组成多价分子疫苗免疫小鼠，再行攻击感染，观察其保护性免疫力。结果：疫苗加佐剂组成虫减虫率、肝组织减卵率及肠壁组织减卵率分别为５０．３％、７２．０％和８１．５％，均显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）；实验组肝虫卵肉芽肿较对照组炎症反应程度轻，虫卵肉芽肿周长及面积均低于对照组（Ｐ＜０．０１）。结果提示，由日本血吸虫成虫２８ｋＤａ、３１／３２ｋＤａ及９７ｋＤａ蛋白联合组成的多价分子疫苗，具有较高的减虫率、减卵率及抑制虫卵肉芽肿形成的作用。

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体N P30对血吸虫病肝纤维化的调节作用

为研究日本血吸虫单克隆抗独特型抗体 Ｎ Ｐ３０ 对血吸虫病肝纤维化的影响，将４５ 只 Ｉ Ｃ Ｒ 小鼠随机分为两组，实验组腹腔注射 Ｎ Ｐ３０，对照组腹腔注射 Ｓ Ｐ２／０ 腹水。尾蚴攻击感染后第４、８、１２、１６、２０、２４ 周分别处死小鼠取肝， Ｖ Ｇ 组化染色和Ⅰ、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白（ Ｆ Ｎ）免疫组化染色，应用 Ｎ Ｙ Ｄ１０００ 型计算机图像分析系统对肝纤维化程度进行定量测定。实验结果表明， Ｖ Ｇ 染色显示实验组肝组织胶原的平均光密度值、卵均面积和总面积明显小于对照组。免疫组化显示实验组Ⅰ、Ⅲ型胶原及 Ｆ Ｎ 含量比对照组低。本文提示 Ｎ Ｐ３０ 对血吸虫病肝纤维化有明显的抑制作用，是一很有希望的血吸虫病抗病疫苗候选分子。

日本血吸虫病人群获得性免疫与再感染Ⅴ.日本血吸虫人群易感和拮抗的前瞻性研究

目的 用流行病学方法确定易感者和拮抗者 ,为日本血吸虫再感染的年龄依赖性抗性提供依据。方法 1996年 ,选择南洞庭湖日本血吸虫病洲岛型流行区经常接触疫水的居民 2 5 0人作为研究对象 ,行吡喹酮顿服治疗。随后 ,观察了研究对象日常接触疫水情况 141d,暴露指数以平均每天接触疫水皮肤面积 (m2 )与时间 (min)的乘积 (m2 · min/ d)计 ,并对其行四次方根标准化换算。1998年 ,其中 2 13人接受了粪检 ,并根据粪检结果和疫水接触程度对 2 13名对象进行流行病学易感和拮抗的分类。结果 1998年 ,感染率为 2 3.0 % ,感染度 (EPG)几何均值为 6 4.5 ;感染率在低年龄组 (<10岁 )人群中最高 ,并随年龄的增加而递减 ;在感染人群中 ,男性感染率和感染度均高于女性 (P <0 .0 1)。 2 13名对象可分为 3组 :易感组 (2 3.0 % )、抗性组 (13.6 % )和不确定组 (6 3.4% ) ;平均暴露指数换算值为 6 .2 m2· min/ d,男性高于女性。年龄组的暴露指数和治后再感染度之间存在剪刀差关系。结论 本研究表明 ,流行区人群治后存在对日本血吸虫再感染年龄依赖性抗性。