抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方提取物对心肌保护作用的实验研究

目的观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方醇提物(K-CoxBJN-C)对阿霉素(ADR)诱导小鼠心肌损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法选取肢体Ⅱ导联心电图正常的120只昆明小鼠随机分为6组,即正常对照组(灌胃生理盐水)、模型组(灌胃生理盐水)、水提物组(灌胃K-CoxBJN-S,5 g.kg-1)、复方65%醇提物高、中、低剂量治疗组(分别灌胃K-CoxBJN-C 1.22,.4,4.8 g.kg-1),给药1次/d,连续14 d;同时除正常对照组(隔日腹腔注射NS 3mg.kg-1)外,各组小鼠隔日腹腔注射阿霉素3 mg.kg-1,共7次,建立ADR心肌损伤模型。动态观察小鼠症状及体征、体质量变化、死亡率;末次注射ADR 24 h后取血,比色法测定血清中CK、LDH的活性;取心脏、脾、胸腺计算重量指数;取心脏观察心肌病理改变。结果 K-CoxBJN-C能显著降低小鼠血清中CK、LDH的活性(P<0.05),增加心脏、脾、胸腺重量指数,改善小鼠心功能,减少死亡率,其中醇提物高、中剂量组效果好于水煎组。结论 K-CoxBJN-C可明显减轻ADR所致小鼠的心肌损伤,其作用机制可能与减轻免疫炎性反应有关。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂抗CVB_3作用

目的通过体内外实验观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊K-CoXB-JN复方新制剂对柯萨奇B3(CVB3)病毒感染的心肌细胞和病毒性心肌炎(VMC)小鼠的保护作用。方法体外实验用1000 TCID50的CVB3感染心肌细胞后,分别加入不同浓度的K-CoXB-JN复方新制剂和利巴韦林,并设定正常对照组和模型对照组,当细胞病变达到75%后,测定细胞上清液中肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;体内实验用CVB3感染Balb/c小鼠造成病毒性心肌炎模型,分别予K-CoXB-JN复方新制剂高、中、低剂量,利巴韦林和纯水连续灌胃14 d,记录小鼠死亡数,观察药物对小鼠的死亡保护情况。结果 K-CoXB-JN复方新制剂可降低CVB3感染的心肌细胞培养上清液中CK、AST、LDH含量,降低病毒性心肌炎小鼠的死亡率,给药组和模型对照组相比较P<0.05。结论 K-CoXB-JN复方新制剂对CVB3感染的心肌细胞和病毒性心肌炎小鼠具有保护作用。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方提取物对病毒性心肌炎小鼠血清AST、LDH的影响

目的:观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方(K-CoxB-JN)提取物对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞的保护作用,并探讨其作用机制。方法:采用肢体Ⅱ导联心电图正常的雄性Balb/c小鼠腹腔注射CVB3,建立实验性小鼠病毒性心肌炎模型。将120只造模成功的雄鼠随机分模型组、黄酮低剂量组、多糖中黄酮中剂量组、原方水煎组,每组30只,各组小鼠在腹腔接种CVB3稀释液半小时后即给予相应药物(模型组灌胃生理盐水);另选取10只健康雄鼠作为正常对照组,腹腔接种同体积的生理盐水后给予生理盐水。将接种病毒当天定为第实验的1天,每日给药1次,连续给药14天,于第15天处死。观察小鼠生存状态及体重的变化,统计小鼠死亡率,计算心重指数,用分离的血清检测心肌酶CK、LDH的活性。结果:K-CoxB-JN各提取物组均能显著降低小鼠血清中AST、LDH的活性(P<0.05),改善小鼠心功能及病变小鼠体重情况、减少死亡率,其中多糖中黄酮中剂量组、原方水煎组效果最佳。结论:K-CoxB-JN提取物对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞有很好的保护作用。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂对CVB_3感染小鼠的治疗作用

目的观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN复方新制剂)对CVB3感染小鼠的治疗作用。方法用CVB3感染Balb/c小鼠造成病毒性心肌炎模型,分别予K-CoxBJN复方新制剂高、中、低剂量,利巴韦林和纯水灌胃十四天。观察小鼠一般状态、记录死亡数,分别在第7、14天每组随机抽取小鼠标号,称体质量,取血测天冬氨酸转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)含量活性;之后取心,脾,胸腺称重,计算脏器指数;取心脏放入10%甲醛中固定,HE染色观察心肌病理变化,记录病理积分。结果 K-CoxB-JN复方新制剂能降低病毒性心肌炎小鼠的死亡率和血清中CK、AST含量,给药组和模型对照组相比较P<0.05,并能降低心脏指数和心脏病理积分,但对脾、胸腺指数影响不明显。结论 K-CoxB-JN复方新制剂对CVB3感染的小鼠有治疗作用。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂长期给药对大鼠体质量脏器指数及进食量的影响

目的观察给予抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(KCoxBJN)复方新制剂长期给药对大鼠体质量、进食量及脏器指数是否产生影响,以为临床安全用药提供实验依据。方法将Wistar大鼠随机分高、中、低三个剂量组和对照组,每组雌雄各20只,分别为KCoxBJN复方新制剂1.36,0.68和0.34 g·kg-1·d-1灌胃给药(相当于生药量13.6,6.8和3.4 g·kg-1·d-1),为人用有效剂量的40,20和10倍;对照组每天灌胃蒸馏水。实验期间记录大鼠体质量、进食量变化。连续灌胃给药90 d及停药两周后,各组分别随机处死雌雄各6只,记录大鼠主要的脏器指数。结果复方新制剂连续给药90d及停药两周后对大鼠体质量、进食量及脏器指数无明显影响,给药组与对照组比较,均无明显差异。结论 KCoxBJN复方新制剂长期给药期及停药恢复期对大鼠体重、进食量及脏器指数没有造成明显的影响。

抗柯萨奇病毒B病毒性心肌炎胶囊对病毒性心肌炎小鼠血清CK、LDH、cTnI的影响

目的:探讨抗柯萨奇病毒B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN)对于阿霉素(ADM)诱导小鼠心肌损伤模型的保护作用。方法:将小鼠随机分为5组,正常对照组、模型组、K-CoxB-JN低剂量组、K-CoxB-JN中剂量组、K-CoxB-JN高剂量组,观察K-CoxB-JN对心肌组织病理、小鼠心脾指数、小鼠血清血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTn)I的影响。结果:K-CoxB-JN低、中、高剂量组炎性和坏死病理改变明显轻于模型组;K-CoxB-JN中、高剂量组的心脏指数与模型组比较,差异均有非常显著性意义(P<0.01),K-CoxB-JN中剂量组的小鼠脾脏指数与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05);K-CoxB-JN低、中、高剂量组CK和cTnI的值均降低,与模型组比较,差异均有非常显著性意义(P<0.01),K-CoxB-JN中剂量组LDH的值降低,与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:K-CoxB-JN对心肌损伤小鼠血清CK、LDH、cTnI有抑制作用,K-CoxB-JN对心肌具有保护作用。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊有效部位正交设计

目的优化抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊提取分离有效部位的最佳配伍。方法提取分离抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊的有效部位(乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水提部位)为三因素,拟定1、2、3三个剂量水平,通过三因素三水平的正交试验表L9(34)安排试验,以感染抗柯萨奇B3亲心肌病毒(CVB3)小鼠死亡率为观察指标,考察三个组分的配伍关系,并优选配伍剂量。用优选的新复方治疗CVB3性心肌炎小鼠,进行多指标的药效学验证实验。结果正交试验结果表明正丁醇部位为影响药效的主要因素;优选的最佳配伍是正丁醇部位高剂量、水提部位中剂量和乙酸乙酯部位低剂量组合(即A1B3C2),三者的配伍比例是A∶B∶C=1∶15.17∶14.83,给药量是原方的1/7～1/6。进一步药效学多指标验证实验表明,新组方对CVB3心肌炎小鼠死亡率、心重指数和血清酶活性均有降低作用,并能减轻心肌组织病理损伤程度;新组方中、高剂量组效果更好,但二者之间无差异,二者均好于原方水煎组。结论正交试验优选的有效部位组方是正丁醇部位、乙酸乙酯部位和水提部位,三者的配伍质量比是1∶15.17∶14.83,新组方优于原方水煎。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方水提物的镇痛和抗应激作用

目的:观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN)复方水提物镇痛作用和抗应激反应能力。方法:健康昆明种小鼠随机分为5组,K-CoxB-JN复方水提物高剂量组、中剂量组、低剂量组,20 mL·kg-1(给药量为9.6,4.8,2.4 g·kg-1),分别连续ig给药,并设阳性对照组及正常对照组。采用醋酸和热刺激致疼痛模型,考察其镇痛活性;采用游泳实验和耐缺氧实验,考察其抗应激作用。结果:K-CoxB-JN复方水提物对小鼠抗疲劳、耐缺氧等抗应激能力有一定的增强作用。相对于对照组,高剂量给药组可使小鼠游泳时间延长57 s,耐缺氧存活时间延长12 min;可以明显抑制醋酸引起的扭体次数,延长热板上小鼠舔后足出现的时间。相对于对照组,高剂量给药组可使小鼠扭体次数减少20次;中剂量给药组可使小鼠舔后足时间延长16s。结论:K-CoxB-JN复方水提物具有明显的镇痛和抗应激作用。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方的优化及抗应激作用

目的:正交试验法优化抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN)复方。方法:用不含交互作用的"正交t值法"设计,以小鼠缺氧存活时间为指标,筛选出K-CoxB-JN的优化处方,对优选的新组方用抗应激反应(心肌缺血后耐缺氧、负重游泳)实验验证。结果:原方中7味药优选出西洋参、黄芪、麦冬、五味子四药作为优化方。异丙肾上腺素致小鼠心肌缺血后常压耐缺氧试验结果显示与正常对照组比较,在缺氧情况下生存时间以模型组最短,差异显著(P<0.01),与模型组比较,原方中、低剂量组及新方组小鼠存活时间均明显延长(P<0.01)。负重游泳试验结果显示对照组小鼠游泳时间最短,K-CoxB-JN原方与优化方低剂量组均能明显延长小鼠游泳时间,有明显的抗疲劳作用。两组试验结果均显示原方和优化方中、低剂量组作用无明显差异。结论:K-CoxB-JN优化方与原方具有相似的提高小鼠抗应激反应能力的作用,但用药剂量明显减少。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂体外抗柯萨奇B_3病毒作用

目的研究抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂对柯萨奇B3病毒(CVB3)感染的心肌细胞的保护作用及其作用机制。方法根据抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂和利巴韦林最大无毒浓度(TC0)筛选4个实验浓度。将生长良好的H9C2细胞种在96孔板中,分为复方新制剂组、利巴韦林组、正常对照组和病毒对照组。通过4种不同的加药和加病毒方式,用MTT法观察不同浓度药物对细胞增殖的影响和对细胞保护、直接抗病毒、抗病毒吸附作用,结果用OD值表示。结果不同浓度复方新制剂组和利巴韦林组OD值均高于病毒对照组(P<0.05或P<0.01)。复方新制剂组中浓度为0.390625mg/ml的细胞增殖OD值高于浓度为0.1953125、0.09765625mg/ml及利巴韦林组各浓度(P<0.05或P<0.01);复方新制剂组中浓度为0.78125mg/ml的细胞保护OD值高于其他浓度,并且明显高于利巴韦林组各浓度(P<0.05或P<0.01)。复方新制剂组和利巴韦林组各浓度直接抗病毒和抗病毒吸附作用OD值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂通过抑制病毒的增殖、保护细胞、直接抗病毒、抗病毒吸附等途径达到保护心肌细胞作用。其中浓度为0.390625mg/ml时抑制病毒增殖作用最明显,浓度为0.78125mg/ml时,对细胞保护作用最明显,并优于利巴韦林。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方提取物抗柯萨奇病毒B3的实验研究

目的探讨抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN)复方提取物多糖和总皂苷对于CVB3病毒感染小鼠心肌损伤模型的保护作用。方法将复方提取物分为不同组别,观察其对小鼠死亡率、心脾指数、血清肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)的影响。结果 K-CoxB-JN复方多糖低、中、高三组及多糖+皂苷组对于心肌酶CK、CK-MB及cTnI的活性具有明显抑制作用。结论 K-CoxB-JN复方提取物对心肌损伤小鼠血清CK、CK-MB、cTnI有抑制作用,K-CoxB-JN复方提取物多糖和皂苷对心肌具有保护作用。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊总皂苷体外抗CVB_3及对细胞活性的观察

目的:观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(KCoxBJN)总皂苷(TS)体外抗柯萨奇B3病毒(CVB3)及对细胞活性的影响。方法:分离培养大鼠原代心肌细胞,以KCoxBJ总皂苷(KCoxBJN-TS)为干预因素,用MTT法测定其对正常心肌细胞的TC50和TC0;观察其对心肌细胞感染CVB372h的搏动频率、细胞病变程度和存活率;测定各组间TCID50及心肌细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的变化,判定其细胞活性。结果:KCoxBJN-TS对正常心肌细胞的TC0为6.25mg/mL,TC50为8.89mg/mL,浓度在12.5、25mg/mL时利巴韦林组(R组)心肌细胞存活率高于各中药组,浓度在100mg/mL时两组细胞存活率大致相同,且此两种药物对抑制心肌细胞的活性作用呈剂量依赖性;感染CVB3后心肌细胞的搏动频率明显减慢,细胞病变(CPE)明显,中药组与R组比较均有显著性差异(P<0.01),CPE程度较轻,其中中药高剂量组(KCoxBJN-TS-H组)效果最佳;心肌细胞病毒滴度测定显示,KCoxBJN-TS-H、中药中剂量组(KCoxBJN-TS-M组)与R组有效,而中药低剂量组(KCoxBJN-TS-L组)无明显效果;KCoxBJN-TS-H组能使LDH、CK的释放较CVB3组显著降低(P<0.01);KCoxBJN-TS还可抑制被病毒感染的心肌细胞TNF-α的分泌,KCoxBJN-TS-H组和R组效果较好。结论:KCoxBJN-TS在一定的浓度范围内可抑制CVB3在细胞内的复制,对心肌细胞起到一定的保护作用。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊总黄酮对小鼠急性阿霉素心肌损伤的保护作用

目的:观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN)总黄酮对阿霉素所致小鼠急性心肌损伤的作用,并探讨其可能作用机制。方法:选取正常昆明种小鼠175只,随机分为7组,即K-CoxB-JN黄酮高、中、低剂量组(0.8,0.4,0.2 g.kg-1),模型组,心血康组,正常组,原方水煎组,每组25只,每天ig 1次,1周后ip阿霉素20 mg.kg-1建立小鼠急性心肌损伤模型,24 h后眼球取血测定血清心肌酶水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,测定心脾指数。结果:K-CoxB-JN总黄酮能显著降低小鼠心肌酶活性,黄酮中剂量组乳酸脱氢酶(LDH)水平有所下降,α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)水平降低明显(P<0.01);黄酮高、中剂量组心脏指数明显降低(P<0.01),黄酮中剂量组脾指数有显著性差异(P<0.05)。黄酮高、中剂量组SOD活力明显升高(P<0.01),黄酮中剂量组MDA含量有显著性降低(p<0.01),以黄酮中剂量效果最为明显。结论:K-CoxB-JN总黄酮对小鼠急性心肌损伤有保护作用,其作用机制可能与抗氧化、清除氧自由基有关。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊质量标准

目的:建立抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN)定性和定量检测方法,为其提供质量控制手段。方法:采用薄层色谱法对方中西洋参、麦冬、莱菔子、王不留行4味药物进行定性鉴别;采用HPLC-ELSD法测定西洋参中人参皂苷Rg1,Re,Rb1含量。以Agilent ZORBAX XDB C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,流动相乙腈-0.2%甲酸(梯度洗脱),柱温为室温;ELSD参数:漂移管温度50℃,载气流速2.0 L.min-1,增益1。结果:薄层色谱专属性强,分离度好,图谱斑点清晰,阴性对照无干扰;人参皂苷Rg1,Re,Rb1质量分别在0.75～3.75,4.5～30,6～40μg对数值与相应峰面积对数值呈良好的线性关系(r>0.999),平均回收率分别为97.10%(RSD 3.96%),95.15%(RSD 2.21%),95.60%(RSD 3.00%)。结论:该方法简便、准确、重复性好且无干扰,可用于K-CoxB-JN中主要药材的鉴别以及人参皂苷Rg1,Re,Rb1的含量控制。

正交试验法优选抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊提取工艺

目的:优选抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN)的提取工艺。方法:采用紫外-可见分光光度法测定乙醇提取物中皂苷、黄酮、木质素类成分含量;正交试验设计优选抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊的提取工艺。结果:乙醇提取最佳工艺为10倍量70%乙醇加热回流2次,每次1.5 h。结论:优选的提取工艺稳定,安全,简便易行。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊中总黄酮、总皂苷、总木脂素和总多糖的含量测定

目的测定抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN)中总皂苷、总黄酮、总木脂素及总多糖的含量。方法采用紫外可见分光光度法对四种成分进行含量测定。结果 K-CoxB-JN中总皂苷含量为64.98mg·g-1,总黄酮含量为11.48 mg·g-1,总木脂素含量为21.99 mg·g-1,总多糖含量为21.60 mg·g-1。结论所使用的检测方法简单可行、准确可靠,可用于抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊中总皂苷、总黄酮、总木脂素及总多糖的含量测定。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊醇提物大孔树脂纯化工艺优选

目的:优选抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊醇提物大孔树脂纯化工艺。方法:以总皂苷、总黄酮和总木脂素含量为指标,考察树脂的吸附和解吸能力,筛选大孔树脂型号,采用单因素试验对最大上样量、上样流速、洗脱溶剂等进行考察。结果:非极性D101型大孔树脂效果最佳,优选的纯化工艺条件为醇提液生药质量浓度0.5 g.mL-1,药材-湿树脂量1∶4,吸附流速2 BV.h-1,3 BV水洗除杂,4 BV 70%乙醇洗脱。在此工艺条件下,总皂苷、总黄酮和总木脂素纯度分别由5.36%,0.3%,2.26%提高到53.82%,3.01%,22.87%。结论:D101型大孔树脂纯化抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊醇提物,方法简便可行,纯化效果好,可推广使用。

专利中药不同制备方式对慢性心肌损伤药理作用的比较

目的比较专利中药抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方药材不同提取方式对慢性心肌损伤治疗作用的不同。方法醇提物、水提物制备复方药材;分别分为高(H)、中(M)、低(I)三个不同剂量组。分别测定其对阿霉素诱导慢性心肌炎的不同心脏重量指数、CK活力、LDH浓度的影响。结果①实验结果表明:与模型组比较,各组心脏重量指数差异有统计学意义(P<0.05):无水组最好;其次是水煎、65%浓度组,差异均有统计学意义。65%浓度组内比较M>L>H(P<0.05)。②CK活力测定:各治疗组与模型组相比CK活力均有所增高。无水组最高(P<0.05)。组内比较:H<M<L,差异有统计学意义(P<0.05);③LDH(10μl血清)测定:与模型组相比,无水组LDH水平下降明显(P<0.05);组内比较:M<L<H,差异有统计学意义(P<0.01)。④LDH(20μl血清)水平测定:无水组水平下降明显(P<0.05);其次水煎(H);65%(M)治疗后均降低LDH的水平(P<0.05)。结论抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方药材提取方式中,以无水提取对对阿霉素诱导慢性心肌炎的治疗效果最好。