一种基于抗氧化反应元件的抗氧化药物筛选模型的制备

目的利用抗氧化反应元件(ARE)调控荧光素酶(Luc)报告基因的表达水平,建立抗氧化药物筛选细胞模型。方法构建由ARE调控Luc表达的重组质粒载体pARE-Luc-Neo,使用FuGENE HD转染剂将重组质粒转染人胚肾上皮Hek293细胞,通过G418进行筛选,使用稀释法挑选阳性单克隆细胞,经抗氧化蛋白诱导剂TBHQ诱导,检测细胞中Luc的活性,筛选Luc高活性的单克隆细胞株。利用白藜芦醇和姜黄素评价阳性克隆的筛选效果,观察5个中药单体穿心莲内酯、隐丹参酮、水飞蓟素、苦参碱和虎杖苷在不同浓度(0、3.125、6.25、12.5、25、50、100μmol/L)时对Luc表达水平的影响。结果通过检测Luc活性,筛选获得Hek293-ARE,该细胞中的Luc的表达水平受ARE调控,且在一定范围内与诱导剂的浓度呈相关性。穿心莲内酯、隐丹参酮与水飞蓟素有较好的诱导效果。结论建立的抗氧化药物细胞筛选模型可有效地、高通量地用于抗氧化药物的初步筛选。

磷酸肌酸钠对新生儿缺氧缺血性脑病患儿脑脊液Nrf2、ARE、NSE水平的影响

目的探讨磷酸肌酸钠对新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿脑脊液转核因子E_2相关因子2(Nrf2)、抗氧化作用元件(ARE)、神经元烯醇化酶(NSE)水平的影响。方法选取2016年5月-2017年5月该院收治的HIE患儿60例,随机分为研究组与对照组,每组30例。对照组应用常规治疗方法进行治疗,研究组联合应用磷酸肌酸钠治疗,对比两组患儿的治疗效果及对脑脊液Nrf2、ARE、NSE水平的影响。结果临床疗效对比方面,研究组患儿的治疗有效率显著高于对照组(P<0.05);治疗前两组患儿的NBNA评分比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后各个时间点研究组患儿均显著高于对照组(均P<0.05);治疗前两组患儿脑脊液中NSE水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后各个时间点研究组患儿均显著低于对照组(均P<0.05);治疗前两组患儿脑脊液中Nrf2水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后各个时间点研究组患儿均显著高于对照组(P<0.05);治疗后研究组患儿的ARE表达水平显著高于对照组患儿(P<0.05)。结论 HIE患儿联合应用磷酸肌酸钠治疗有利于提高治疗效果,改善脑脊液Nrf2、ARE、NSE水平。