抗沉默功能蛋白1B在幽门螺杆菌感染的人胃癌细胞中的表达及其对AGS细胞株增殖和转移能力的影响

目的检测组蛋白伴侣抗沉默功能蛋白1B(anti-silencing functional protein 1B,ASF1B)在胃癌组织中的表达情况及其与胃癌患者预后之间的关系,探讨ASF1B对人胃癌细胞株AGS增殖、转移能力的影响以及可能的分子机制,分析ASF1B与幽门螺杆菌感染之间的关系。方法分析癌症基因组图谱数据库中泛瘤种的肿瘤组织和癌旁正常组织中ASF1B的表达情况,并通过实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测ASF1B在所收集的59例配对的胃癌组织及癌旁正常组织中的mRNA表达水平。分析Kaplan-Meier plotter数据库中胃癌患者ASF1B的表达水平与其预后之间的关系,后通过免疫组织化学检测胃癌组织芯片中ASF1B的表达水平并分析其与胃癌患者临床预后及临床病理参数之间的关系。通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术敲低胃癌细胞系AGS中的ASF1B表达,分组为siNC组(阴性对照转染细胞)、siASF1B#1组、siASF1B#2组及siASF1B#3组,后采用CCK-8、平板单克隆实验、Transwell小室迁移实验检测各组细胞的增殖、转移能力。分析基因表达综合数据库的数据集GSE27411中幽门螺杆菌阳性和阴性的胃癌组织中ASF1B的表达水平,并通过RT-qPCR及蛋白质印迹法检测ASF1B在幽门螺杆菌感染前后的胃癌细胞系AGS中的表达水平。结果相关数据库及我们的胃癌队列中的胃癌组织ASF1B的mRNA和蛋白表达水平均高于癌旁正常组织,且胃癌组织中高表达的ASF1B与胃癌患者不良预后相关。此外,与siNC组相比,敲低ASF1B组(siASF1B#1组、siASF1B#2组及siASF1B#3组)的细胞增殖和转移能力均减弱。最后,幽门螺杆菌阳性的胃癌组织及幽门螺杆菌感染后的人胃癌细胞AGS中的ASF1B表达水平均上调。结论ASF1B在幽门螺杆菌感染诱发的胃癌发生发展过程中可能起到重要的促进作用,且高表达的ASF1B与胃癌患者更早发生转移及较差的预后相关,可作为预测胃癌患者复发及预后的分子标志物。此外,敲低ASF1B可显著抑制AGS细胞的增殖和转移能力。

PRMT5及ASF1B在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的探讨宫颈癌组织中蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)、组蛋白伴侣抗沉默功能蛋白1B(ASF1B)的表达及其与临床预后的关系。方法选择2018年1月至2019年1月该院收治的96例宫颈癌患者作为研究对象。采用免疫组织化学法检测癌组织和癌旁组织中PRMT5、ASF1B蛋白表达,Spearman秩相关分析癌组织中PRMT5与ASF1B蛋白表达的相关性。比较不同临床病理参数患者癌组织中PRMT5、ASF1B蛋白表达差异,Kaplan-Meier生存曲线分析PRMT5、ASF1B蛋白表达与预后的关系,单因素及多因素COX比例风险回归分析影响宫颈癌预后的因素。结果宫颈癌组织中PRMT5及ASF1B蛋白阳性率高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织中PRMT5与ASF1B蛋白表达呈显著正相关(r=0.712,P<0.001)。国际妇产科联盟(FIGO)分期ⅠB2~ⅡA期、伴淋巴结转移患者癌组织中PRMT5、ASF1B蛋白阳性率分别高于FIGO分期ⅠA~ⅠB1期、无淋巴结转移患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。PRMT5阳性及阴性表达组、ASF1B阳性及阴性表达组患者的3年总生存率比较,差异无统计学意义(P>0.05);PRMT5阳性表达组3年无进展生存率低于PRMT5阴性表达组,ASF1B阳性表达组3年无进展生存率低于ASF1B阴性表达组,差异均有统计学意义(P<0.001)。FIGO分期ⅠB2~ⅡA期、淋巴结转移及PRMT5、ASF1B阳性表达均是影响宫颈癌患者无进展生存率及预后的独立危险因素。结论宫颈癌组织中PRMT5、ASF1B表达升高,二者与FIGO分期、淋巴结转移有关,可作为宫颈癌预后相关肿瘤标志物。

组蛋白伴侣ASF1B在前列腺癌细胞的表达及其对体外细胞活力的影响

目的:探讨组蛋白伴侣抗沉默功能蛋白1B(ASF1B)在前列腺癌细胞中的表达情况及其对体外细胞活力的影响。方法:以人前列腺癌PC-3细胞为研究对象,通过小干扰RNA(siRNA)来敲减ASF1B表达。细胞分为对照组、siRNA阴性对照载体(mock)组和siRNA-ASF1B组。采用MTT法测定ASF1B-siRNA处理PC-3细胞12、24和48 h的细胞活力。采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布情况。采用RT-qPCR检测细胞中凋亡相关因子的mRNA表达水平,Western blot检测细胞中MAPK/JNK/ERK信号通路相关蛋白的表达。结果:正常细胞(良性前列腺增生)中ASF1B的蛋白水平显著低于PC-3细胞(P<0.01)。与对照组和mock组相比,用siRNA-ASF1B质粒转染PC-3细胞后的ASF1B蛋白表达水平显著降低(P<0.01),并且PC-3细胞的活力显著降低(P<0.01)。流式细胞术结果显示,转染siRNA-ASF1B质粒的PC-3细胞凋亡率较对照组显著升高(P<0.01),且细胞周期被阻滞于G1期。RT-qPCR结果表明,与对照组和mock组相比,转染siRNA-ASF1B质粒的PC-3细胞中p53、caspase-3、Bax和PARP-1的mRNA水平上调(P<0.01)。此外,与mock组相比,siRNA-ASF1B组PC-3细胞中MAP2K4和p-JNK蛋白水平显著升高(P<0.01),而p-ERK蛋白水平显著降低(P<0.01)。结论:ASF1B沉默诱导PC-3细胞G1期阻滞,促进细胞凋亡。激活MAPK/JNK/ERK信号通路可能是siRNA-ASF1B抗前列腺癌作用的机制之一。

基于数据挖掘分析ASF1B在肺腺癌中的表达及临床意义

目的通过生物信息学方法分析抗沉默功能蛋白1B(ASF1B)在肺腺癌组织中的转录水平表达及其临床意义。方法利用Oncomine、基因表达谱动态分析(GEPIA2)、UALCAN、Kaplan-Meier Plotter、Linked Omics数据库检索数据,比较ASF1B在常见肿瘤中的表达情况,并分析ASF1B在肺腺癌组织与正常肺组织中的表达水平,及其与临床分期和TP53突变的关系;分析ASF1B mRNA表达水平与细胞周期调控因子表达量的相关性;探索ASF1B mRNA表达与患者预后的相关性;最后检索ASF1B的共表达基因,将相关性最高的前50个基因生成在线热图。结果Oncomine数据库中共收集401项ASF1B mRNA在不同类型肿瘤组织与正常组织中表达比较的研究,其中47项ASF1B mRNA表达差异有统计学意义,有4项研究提示肺腺癌组织中ASF1B mRNA表达水平均高于正常肺组织(均P<0.05)。进一步分析GEPIA2和UALCAN数据库再次证实ASF1B的高表达,并且与患者的TNM临床分期和TP53突变均有关(均P<0.05)。ASF1B mRNA表达水平与大部分细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶之间存在正相关表达关系。ASF1B高表达与患者的不良预后有关。ASF1B共表达基因分析结果分别显示了正、负相关性最高的前50个基因,初步探讨ASF1B参与肺腺癌进程的潜在分子机制。结论ASF1B在肺腺癌组织中高表达,且初步显示与肺腺癌的发生、发展及预后存在一定相关性,有望成为肺腺癌患者治疗的潜在靶点。

ASF1B通过PI3K/Akt通路调节人胶质瘤细胞的增殖和侵袭

目的:探讨抗沉默功能1B组蛋白伴侣(ASF1B)对人胶质瘤细胞的增殖与侵袭的影响及机制。方法:首先比较GENT2数据库中正常人脑组织与人脑肿瘤组织中ASF1B的表达,分析ASF1B表达与预后的关系;WesternBlot法检测A172、U87、U251和HS683细胞系中ASF1B的表达;采用siRNA技术抑制人脑胶质瘤细胞系U251和U87细胞ASF1B基因表达;分别通过CCK-8法和Transwell小室法检测U251和U87细胞增殖和侵袭情况,Western Blot法检测PI3K/Akt通路中p-Akt和p-mTOR蛋白的表达水平。结果:与正常脑组织相比,ASF1B在人脑肿瘤组织中的表达明显增加,ASF1B高表达的人脑肿瘤患者总生存期更短(P=0.036);ASF1B下调不仅明显抑制U251和U87细胞的增殖和侵袭;也明显抑制p-Akt和p-mTOR蛋白表达。结论:ASF1B通过PI3K/Akt通路促进U251和U87细胞增殖和侵袭。

组蛋白去乙酰化酶3通过调节miR-625/ASF1B轴抑制乳腺癌细胞焦亡

目的探讨组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylase 3,HDAC3)调节miR-625/组蛋白伴侣抗沉默功能蛋白1B(anti-silencing function 1B,ASF1B)轴对乳腺癌(breast cancer,BC)细胞焦亡的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR法检测HDAC3、miR-625和ASF1B在乳腺癌(breast cancer,BC)组织和癌旁正常组织、BC细胞系(T47D、MCF7和MDA-MB-231)和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达水平。采用Western blot实验检测细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1和GSDMD的表达水平。ELISA法检测焦亡相关炎性因子IL-18和IL-1β的表达水平。ChIP实验用于测定HDAC3与miR-625的互作用关系。双荧光素酶报告实验验证miR-625和ASF1B的靶向关系。结果与癌旁正常组织和MCF-10A细胞比较,BC组织和细胞中的HDAC3和ASF1B表达升高,miR-625表达降低(均P<0.05)。与si-NC组比较,si-HDAC3组细胞NLRP3、Caspase-1和GSDMD的蛋白表达水平升高,细胞培养上清液中IL-18和IL-1β的浓度升高(均P<0.05)。HDAC3通过结合miR-625的启动子区域抑制其表达(P<0.05)。与si-HDAC3+miR-NC组比较,si-HDAC3+miR-625 inhibitor组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-18和IL-1β的表达减少(均P<0.05)。ASF1B被证实为miR-625的靶基因,si-HDAC3+pcDNA3.1-ASF1B组细胞中的焦亡相关因子水平显著低于si-HDAC3+pcDNA3.1-NC组。结论HDAC3通过抑制miR-625上调ASF1B的表达,进而抑制BC细胞焦亡。

基于生物信息学分析宫颈癌关键基因及预后相关生物标志物

目的从公共数据库筛选并探讨宫颈鳞状细胞癌的关键致病基因。方法从GEO数据库GSE122697、GSE89657里下载宫颈组织表达谱芯片数据。利用R软件和韦恩图查找数据集的差异表达基因(DEGs)交集,进行GO和KEGG通路富集分析。利用STRING数据库构建了DEGs的蛋白质-蛋白质相互作用网络(PPIs)并导入Cytoscape软件进一步分析,通过CytoHubba插件和MCC算法筛选出DEGs。利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库对已初步筛选的DEGs进行验证及生存曲线分析,并进一步筛选与宫颈癌总生存率相关的DEGs进行ROC分析,获得关键基因。结果宫颈鳞状细胞癌差异基因56个,其中15个上调和41个下调。GO及KEGG分析结果显示,这些mRNA主要参与细胞核分裂、细胞外基质代谢调控等生物学进程;主要富集于细胞周期、减数分裂、PI3K-Akt信号通路、ECM受体相互作用通路等。通过PPI网络中筛选出18个核心基因,并在TCGA数据集中得以验证,生存曲线分析的结果表明18个差异基因中的ASF1B基因对宫颈癌患者生存预后具有显著影响[HR=0.437(0.272~0.704),P<0.01],ROC分析的结果表明其对宫颈癌患者具有很好的诊断价值(AUC=0.998)。结论本研究通过综合生物信息学分析,有望为宫颈癌诊断和预后提供可靠的分子生物标志物和治疗靶点。

ASF1B通过调控P53相关信号通路促进前列腺癌迁移和增殖的研究

目的研究组蛋白伴侣抗沉默功能1B(ASF1B)对前列腺癌(PCa)迁移和增殖能力的影响,探索ASF1B调控P53相关信号通路的具体分子机制。方法根据TCGA数据库中的数据分析ASF1B在前列腺癌患者中的生存预后情况,使用细胞小干扰RNA(SiRNA)敲低ASF1B表达后,通过Transwell细胞迁移实验比较细胞的运动能力,通过CCK8实验和平板克隆实验比较细胞的增殖能力,使用细胞凋亡实验比较细胞的凋亡率,通过转录组二代测序比较敲低ASF1B后各个信号通路的改变情况,通过Western-Blot实验及Q-PCR实验比较P53相关信号通路分子的蛋白质和mRNA水平变化,以阐明ASF1B对前列腺癌细胞的迁移及增殖能力的影响。结果SiRNA敲低ASF1B表达后,DU145和PC3细胞的运动能力降低,相同时间内穿过小室的细胞数减少。敲低ASF1B表达后,DU145和PC3细胞的细胞活力和集落形成个数及大小降低,细胞增殖能力下降。敲低ASF1B表达后,DU145和PC3细胞的凋亡率增加。敲低ASF1B表达后,PC3细胞的转录组二代测序结果提示P53信号通路受到调控(P<0.01)。敲低ASF1B表达后,PC3细胞内P53相关通路的P21、IGFBP3、BBC3表达量上升,Cyclin D、Snail、Slug表达量下降。结论ASF1B以非P53依赖的形式通过P53相关信号通路调控前列腺癌细胞的迁移及增殖,ASF1B有望成为前列腺癌的诊断及治疗的新型靶点。