豚鼠气单胞菌抗独特型单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的:制备豚鼠气单胞菌(Aeromonascaviae)抗独特型单克隆抗体(AIdmAb)并进行鉴定。方法:以具有中和作用的抗豚鼠气单胞菌mAb1F1免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备豚鼠气单胞菌AIdmAb。用ELISA法对mAb的效价及其模拟豚鼠气单胞菌的特性进行鉴定。结果:获得4株能稳定分泌豚鼠气单胞菌AIdmAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1E12、4F6、6G6、7C1。经测定杂交瘤细胞腹水mAb效价为10-3～10-4。竞争抑制实验结果表明4株AIdmAb均能不同程度地抑制豚鼠气单胞菌与兔抗豚鼠气单胞菌多克隆抗体的结合。制备杂交瘤细胞腹水的BALB/c小鼠血清均能与豚鼠气单胞菌反应,其效价为1∶50～1∶800。结论:成功地制备了豚鼠气单胞菌抗独特型mAb的杂交瘤细胞株,为该菌的抗独特型疫苗制备研究奠定了基础。

嗜水气单胞菌抗独特型单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的:制备嗜水气单胞菌(Aerom onas hydophila)抗独特型单克隆抗体(AIdmAb)并进行鉴定。方法:以具有中和作用的抗嗜水气单胞菌mAb1G10免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备嗜水气单胞菌AIdmAb。用ELISA法对mAb的效价及其模拟嗜水气单胞菌的特性进行鉴定。结果:获得4株能稳定分泌嗜水气单胞菌AIdmAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1F9、1H10、3F5、4G3。经测定杂交瘤细胞腹水mAb效价为10-4～10-5。竞争抑制实验结果表明4株AIdmAb均能不同程度地抑制嗜水气单胞菌与兔抗嗜水气单胞菌多克隆抗体结合,其中两株1F9、1H10具有较强的抑制作用。用作制备抗独特性抗体腹水的小鼠,其血清均能检测与嗜水气单胞菌进行免疫结合的抗体,经ELISA检测,其效价为1:100～1:1000。结论:成功地制备了产生嗜水气单胞菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株,为制备该菌的抗独特性抗体疫苗奠定了基础。

HER2抗独特型单克隆抗体的制备和初步研究

目的:研制HER2抗独特型单克隆抗体,为进一步深入研究乳腺癌抗独特型抗体疫苗奠定基础。方法:用人HER2蛋白免疫家兔,获得特异性兔抗HER2抗体。再用兔抗HER2抗体免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备HER2抗独特型单克隆抗体。并筛选出β型HER2抗独特型单克隆抗体。结果:ELISA检测结果表明,获得的兔抗HER2抗体能特异性地与HER2蛋白结合,其OD值随HER2的浓度呈正线性关系。用兔抗HER2抗体免疫小鼠获得一株稳定分泌HER2抗独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞1F5,其分泌的单克隆抗体能特异性的和兔抗HER2多克隆抗体结合,并与HER2产生竞争抑制作用。用1F5抗独特型单克隆抗体免疫家兔得到的抗血清能和HER2特异性的结合。该抗体亚型为IgG3,未浓缩腹水的效价为1∶1.02×104。结论:抗独特型单克隆抗体为β型HER2抗独特型抗体,有可能成为乳腺癌抗独特型单克隆抗体疫苗。

日本血吸虫抗独特型单克隆抗体的建株及特性测定

BALB/C小鼠感染10条日本血吸虫尾蚴,半年后用一株在小鼠体内、外具有杀伤血吸虫作用的IgM单抗ssj14进行加强免疫,3d后取其脾细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选到10株单克降抗独特型抗体(抗-Id).选择其中6株作进一步特征测定,ELISA抑制法表明它们能不同程度地抑制单抗ssj14识别可溶性虫卵抗原(SEA),抑制率与抗-Id的浓度呈正比,而这些抗-Id都不与SEA直接起反应.双向琼扩试验测定表明,6株抗-Id中2株为IgG:亚型(C_8和D_5),3株为IgG_3亚型(B_3、E_3和C_(10) ),1株为非IgM和IgG亚型(E_4).小鼠免疫试验结果显示,两株抗-Id(D_5和E_4)诱导了较高的减虫率(44.67%,(P<0.05)、47.28%(P<0.01))和减雌率(46.99%(P<0.01)、54.26%(P<0.01)),2株抗-Id(C_3和E_4)诱导了较高的减卵率(56.68%和61.13%);ELISA检测结果显示,小鼠用抗-Id免疫后均不同程度地产生了针对抗-Id和抗SEA及抗可溶性雄虫抗原(m-SWAP)的抗体,说明抗-Id模拟了单抗ssj14的靶抗原的部分结构,诱导了免疫鼠特异性的免疫应答.

日本血吸虫抗独特型单克隆抗体NP30免疫后小鼠血清IFN-γ、IL-4水平的变化

目的观察日本血吸虫抗独特型单克隆抗体NP30免疫后机体血清有关细胞因子水平的变化,初步探讨NP30保护性免疫的机制。方法雌性BALB/c小鼠经腹腔注射免疫NP30 10μg/次,共免疫3次,每次间隔2w。同时设PBS对照组。末次免疫1w后开始尾静脉采血,连续采血6次,每次间隔1w。夹心ELISA法测血清中细胞因子IFN-γ、IL-4的水平。结果与PBS对照组相比,10μgNP30免疫组血清IFN-γ水平增高,且以第2w(P=0. 035)、第3w(P=0. 019)最明显; NP30免疫组血清IL-4水平也增高,且以第3w(P=0. 028)最明显。结论从结果可以看出INF-γ水平升高出现较早,但维持时间较短,而IL-4水平升高出现较晚,但维持时间较长。说明NP30的保护性免疫早期以细胞免疫为主要类型,而在后期则转为体液免疫为主要类型。

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对虫卵肉芽肿免疫调节作用的研究

目的研究日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０对虫卵肉芽肿的影响。方法 ＮＰ３０腹腔注射主动免疫ＩＣＲ小鼠，对照组腹腔注射ＳＰ２／０腹水，分别在尾蚴攻击感染后第４、８、１２、１６、２０、２４周处死，观察和比较肝内虫卵肉芽肿的形成和演变。应用计算机图像分析技术，测量虫卵肉芽肿大小。结果尾蚴攻击感染第 １２周以后， ＮＰ３０免疫组虫卵肉芽肿的直径明显低于 ＳＰ２／０对照组，虫卵肉芽肿的演变时相提前，并出现２种特殊类型的肉芽肿。结论ＮＰ３０能减轻日本血吸虫对宿主造成的免疫病理损害。

HER-2抗独特型单克隆抗体疫苗-肿瘤疫苗的新探索

乳腺癌作为女性最常见的恶性肿瘤之一,发病率正呈逐年上升趋势。全球每13分钟就有一人死于乳腺癌,并随着发病的不断增加,死亡率也在明显上升。乳腺癌已经在女性恶性肿瘤发病率中占第一位,成为威胁女性健康的"头号杀手"。这其中,大部分的乳腺癌类型均为HER-2+。许多的研究证明如果前期对HER-2过度表达的肿瘤应用针对HER-2的免疫疗法可以有效的控制肿瘤的发展。因此,建立体内的免疫应答可以控制过度表达HER-2的乳腺肿瘤病人的病情发展。随着曲妥珠单抗的产生和投入使用,启发人们发现更广阔的空间去构建针对HER-2的免疫应答的疫苗,从而使抗肿瘤的免疫作用更稳定更强大并且不会产生免疫耐受,进而防止肿瘤复发。因为现在针对HER-2产生的免疫耐受已经制约了肿瘤疫苗的发展,因此现在的研究热点是如何打破免疫耐受更好地发挥抗肿瘤的免疫作用。在这篇文章里,我们将着重介绍模拟HER-2的抗独特型单克隆抗体的应用。

分泌肾综合征出血热病毒单克隆抗独特型抗体杂交瘤细胞系的初步建立

本文在己制备了HFRSV多克隆抗独特型抗体的基础上，又制备了HFRSV的单克隆抗独特型抗体，为HFR马的研究开辟了新的途径。

用单克隆抗独特型抗体检测肾综合征出血热(HFRS)病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体的临床意义

用抗独特型抗体(Ab2)检测细胞表面抗原受体是将Ab2作为探针用于免疫学检测而出现的新的研究方法。本文在制备了HFRS病毒抗独特型抗体的基础上应用单克隆抗独特型抗体(1B1)作间接免疫荧光试验，检测了HFRS病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体。首先，采取病人外周肝素抗凝血用淋巴细胞分离液按常规方法分离淋巴细胞，将淋巴细胞用RPMI 1640不完全培养液离心洗一次后弃上清，将沉降细胞重新悬浮后调至0．1ml并加入5％小牛血清．混匀，取约10—30μl加在预置于离心细胞沉淀器的玻片上，800rpm离心5分钟，取下玻片待干燥后加丙酮-福尔马林固定液固定30秒，水洗，吹干。

分泌肾综合征出血病热毒单克隆抗独特型抗体的杂交瘤细胞系的建立

将HFRS病人Ab_1免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞融合,制备了HFRSV的McAb_2。初期融合试验中用ELISA间接法检测阳性克隆,阳性率为3.2～7.4％。其中5株杂交瘤经克隆化后阳性率达到100％。特异性鉴定表明,5种McAb_2只与HFRS病人Ab_1结合,不与正常人Ig结合。McAb_2所识别的独特型是人Ab_1与部分小鼠抗HFRSV的McAb上的交叉反应独特型。本文还应用McAb_2作为探针,对抗HFRSV的单克隆抗体的独特型进行了分析。

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30引起小鼠足垫反应的实验研究

目的 探讨日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30引起小鼠足垫反应的实验条件。方法 对 3个因素 2个水平 (尾蚴感染数 10条 /鼠和 5 0条 /鼠 ,NP30注射剂量 1μg/鼠和 10 μg/鼠 ,感染后 4周和 7周 )应用正交设计进行小鼠足垫试验 ,于NP30注射后不同时间观察足垫肿胀情况。结果 正交设计结果的方差分析表明 ,NP30在注射后 12h的结果有显著性差异。结论 NP30引起的足垫肿胀为迟发型变态反应。

消化系统生物活性物质的基础及应用研究

本项目属生物医学领域,含特异性抗体制备、新方法的建立及消化系统含生物活性物质细胞的基础研究。主要成果如下: 1.成功制备了9种特异性抗体及抗独特型抗体其中除生长抑素(SS)抗体国内已有报道外,5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、神经肽Y(NPY)抗体和5-HT抗独特型多克隆抗体为国内首次报道。5-HT抗独特型单克隆抗体、肌源性运动神经诱向因子(MNTF)单克隆抗体及抗独特型单克隆抗体、视网膜节细胞神经诱向因子抗独特型单克隆抗体为国际首次报道。