RNA干扰技术与利巴韦林体外抗呼吸道合胞病毒的效应

目的比较RNA干扰(RNAi)技术与利巴韦林抗呼吸道合胞病毒(RSV)效应,探讨RNAi技术体外抑制RSV的有效性。方法用成功构建的表达载体pshRNA7816及利巴韦林处理HEp-2细胞,利用四甲基偶氮唑蓝比色实验检测pshRNA7816、利巴韦林的细胞毒性和对RSV感染后细胞的保护作用;通过显微镜观察pshRNA7816及利巴韦林对RSV感染细胞病变的抑制效率。结果pshRNA7816对HEp-2细胞的正常生长无明显细胞毒性作用,而利巴韦林在1.0mmol/L以上作用浓度即会对细胞产生细胞毒性作用;pshRNA7816和利巴韦林均能抑制RSV所致的细胞病变,但pshRNA7816对细胞病变抑制作用较利巴韦林强,经过pshRNA7816处理过的RSV感染细胞的细胞存活率明显高于利巴韦林对RSV的最大抑制率(P<0.05)。结论根据RNAi技术所设计的重组质粒pshRNA7816在体外细胞培养系统中较利巴韦林抗RSV活性强。

靶向猪瘟病毒NS3基因shRNA干扰载体的构建与鉴定

利用RNA干扰在线生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列(其结构特征为正链(19nt)-环(9nt)-负链(19nt))。化学合成这些序列,并退火连接为双链干扰片段,将双链干扰片段定向克隆到干扰载体中,构建重组载体pGene-NS3-1,pGene-NS3-2和pGene-NS3-3,转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,对转化产物进行kan+筛选,碱裂解法提取重组质粒,将酶切鉴定为阳性的质粒测序。结果显示,双链干扰片段克隆方向正确,序列中未出现核苷酸的插入,缺失等突变现象。表明靶向猪瘟病毒NS3基因shRNA干扰载体构建成功。

RNA干扰及其植物抗病毒应用

【研究目的】RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是分子生物学研究领域的一项新兴技术,在动植物的遗传改良、功能基因组、基因治疗等研究中广泛应用;【方法】它是指一些小的双链RNA分子介导的、序列特异的转录后基因沉默现象;【结果】本文就RNA干扰的作用机制、RNA干扰与植物病毒间的互作以及RNA干扰表达载体构建的一些研究进展进行了综述;【结论】随着RNAi研究的进一步深入,RNAi必将成为遗传育种工作者培育抗病毒植物的有力手段,促进植物抗病育种的发展。

RNA干扰与抗肝炎病毒治疗前景的研究

0引言 从基因的分子生物学角度,病毒性肝炎也是一种基因病,相对于正常肝细胞来说,从肝炎患者的肝细胞中获得了肝炎病毒的基因,因此,病毒性肝炎的治疗也可以采取象遗传病那样的基因治疗(genetherapy)策略[1-5].

转录靶向猪Jiv基因shRNA细胞株的建立及抗猪瘟病毒转基因猪的构建

【目的】构建转入靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段的阳性细胞株,通过比较各细胞株对猪瘟病毒增殖的干扰效果,筛选对猪瘟病毒增殖有明显抑制作用的细胞株,为抗猪瘟转基因猪的构建提供材料。【方法】研究设计了靶向猪Jiv基因的4个shRNA干扰片段,并构建插入干扰片段的慢病毒(P1、P2、P3、P4)。将慢病毒分别转染PK-15细胞,阳性细胞接种猪瘟病毒后72 h用实时荧光定量PCR检测猪瘟病毒RNA的量,以比较4种干扰细胞株对猪瘟病毒增殖的干扰效果。将对猪瘟病毒增殖有较好干扰效果的P2慢病毒干扰载体转染猪胎儿成纤维细胞,获得稳定表达靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段的猪胎儿成纤维细胞株,作为抗猪瘟病毒转基因猪构建的供体细胞,将细胞核移植到成熟的去核猪卵母细胞中,获得体细胞核移植胚胎,移植入受体母猪输卵管中进行转基因猪构建,对获得的转基因猪进行外源基因的鉴定。【结果】获得了4株转入靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段的PK-15细胞株,其中转入P2干扰载体的细胞株对猪瘟病毒的增殖有明显的抑制作用,将转入P2干扰载体的猪胎儿成纤维细胞株为核供体细胞通过体细胞核移植,获得经鉴定为外源基因插入阳性的转基因猪。【结论】细胞Jiv基因的表达对猪瘟病毒的增殖有一定的影响,筛选获得的一个干扰细胞株对猪瘟病毒的增殖有明显的干扰效果;通过体细胞核移植技术获得一头转入靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段(P2)的转基因猪。

RNA干扰及其抗口蹄疫病毒复制的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由双链RNA(double strand RNA,dsRNA)介导的序列特异性RNA降解作用。已经证明,在植物和昆虫细胞中RNAi是其主要的抗病毒机制,但迄今为止,几乎没有发现哺乳动物细胞感染病毒后能自发诱导有效的抗病毒RNAi反应。为此,通过人工方法在哺乳动物细胞中建立有效的抗病毒RNAi便成了国内外学者孜孜探索的重要抗病毒策略之一。目前,RNAi的分子机制及其功能仍然有待更加深入地研究与阐明,但它作为一种反向遗传学手段已经在基因组结构与功能研究中得到广泛运用,不仅在抗多种哺乳动物病毒的研究方面取得了令人振奋的结果,而且已作为一种治疗策略运用于人类抵抗重大遗传性和病毒性疾病的研究当中。笔者对RNAi的分子机制,及其抗口蹄疫病毒复制的相关研究进展作了有关介绍。

RNA干扰的抗病毒效应

双链 PNA 介导的 RNA 干扰(RNA interference,RNAi)能序列特异性的诱发转录后基因沉默,被认为是机体阻止外来病毒感染、保护细胞免受病毒入侵的一种细胞自我保护机制.近年来研究表明,以病毒基因和宿主细胞受体分子为靶点.引入外源的小分子干扰 RNA(siRNA)能显著性抑制病毒的复制与感染.RNAi 作为一种抗病毒的有力武器,将给病毒性疾病的基因治疗带来新的希望.

新城疫病毒P基因的RNA编辑及其抗干扰素作用

新城疫病毒的P基因转录过程中在第484特定位置插入非模板G碱基发生RNA编辑现象 ,产生两种非结构蛋白 ,即V和W蛋白。文章综述了副黏病毒 (主要是新城疫病毒 )P基因RNA编辑的机理。

RNA干扰与植物抗病毒

RNA干扰是多种生物体内由双链RNA介导的同源mRNA降解现象,是植物体内天然的抗病毒机制。然而病毒在长期进化过程中也获得了通过编码沉默抑制蛋白来对抗植物体RNAi系统的能力。本文对RNA干扰过程、病毒编码的沉默抑制蛋白及利用干扰技术进行抗病毒基因工程研究进行简要综述。

腺病毒载体RNA干扰抑制结缔组织生长因子表达及其抗纤维化作用

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)基因沉默的抗纤维化作用。方法以介导CTGF基因沉默的腺病毒载体Ad.H1-CTGF感染HSC-T6细胞系,利用Real-time PCR及Western印迹在mRNA及蛋白质水平上观察CTGF基因沉默前后,CTGF自身及肝纤维化相关指标金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、TIMP-2及I型胶原(Col-Ⅰ)表达水平的变化。结果腺病毒载体Ad.H1-CTGF感染HSC-T6后,CTGFmRNA转录及蛋白表达分别下调85.32%和76.07%;肝纤维化相关指标TIMP-1、TIMP-2及COL-Ⅰ在mRNA转录(下调82.34%、56.93%和74.21%)及蛋白质表达(下调76.53%、64.02%和70.79%)水平亦显著下调。结论腺病毒载体Ad.H1-CTGF可有效抑制HSC-T6中CTGF的表达,导致肝纤维化相关指标TIMP-1、TIMP-2及COL-Ⅰ的表达明显下调,可能具有潜在的抗纤维化作用。

RNA干扰的机制及其抗肝炎病毒的应用

RNA干扰现象自被发现后,已被广泛应用于基因功能、抗病毒治疗和信号转导系统方面的研究.本文对这一现象从研究历史、作用机制、抗病毒应用以及存在的问题等方面进行初步的探讨.

小干扰RNA抗病毒研究进展

小干扰RNA(siRNA)介导的对同源基因转录后水平的抑制或由此引发的细胞质内同源mRNA降解的转录后基因沉默现象,在抗病毒研究中具有重要意义。由病毒感染引起的各种疾病严重危害着人类的健康,而siRNA在抗病毒感染的研究领域中显示出高度特异性,故受到人们的普遍关注。近年来,siRNA抗病毒方面的研究成为国内外的热点,为临床病毒感染性疾病的防治提供了新的途径。我们就siRNA的机制和特点、siRNA的制备及其抗病毒研究进展做简要综述。

RNA干扰及其抗病毒作用

RNA干扰 (RNAi)是一种新发现的通过 ds RNA介导的特异同源靶基因沉默途径。 RNAi主要包括两个步骤 :RNase 样核酸酶切割 ds RNA而生成 2 1- 2 3nt的 si RNA和 si RNA引导 RNA诱导的沉默复合体 (RISC)降解同源性靶基因 m RNA。在某些生物体中 RNAi具有放大效应。通过将 - 2 1nt si RNA导入哺乳动物细胞的 RNAi技术不仅可避免非特异干扰素反应 ,更重要的是还可介导序列特异的基因沉默。最近将 RNAi应用于许多病毒性疾病的治疗研究均取得了显著的基因沉默效果 ,预示 RNAi有望成为一种预防、治疗病毒性疾病的新手段。

RNA干扰技术抗乙型、丙型肝炎病毒的新进展

乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的慢性肝病严重影响人类健康,而防治此类严重肝病的关键在于抗病毒治疗,RNAi作为一种有效抵抗外来病毒入侵的机制,其在抗肝炎病毒上的应用有着巨大的前景,本文就近年来在RNAi抗HBV、HCV方面的研究进展进行综述。

RNA干扰抗艾滋病病毒感染研究进展

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是一种古老而保守的生物现象,它由21～23个核苷酸的双链RNA通过碱基互补靶向识别并降解mRNA,导致序列特异的基因沉默。体外证明小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)能对抗HIV-1感染。它主要作用于宿主细胞受体,如CD4或CCR5等相应的mRNA及HIV-1的mRNA,抑制病毒表达,阻抑病毒感染。RNAi有可能成为一种新的防治HIV-1感染的基因治疗方法。

发展以抗乙肝病毒为目的RNA干扰的思路

RNA干扰的重要作用之一就是治疗应用,如进行抗病毒治疗等．体内RNA干扰存在干扰片段稳定性差、转运效率低等不足之处．随着研究的深入,学者们对上述问题提出了各种解决方案．本文对这些解决方案进行了初步的总结．

RNA干扰及其抗病毒研究

RNA干扰是真核生物界普遍存在的、由dsRNA引发的转录后水平的基因沉默,它具有高效、特异、持久和多样性等特点,以短干扰RNA(siRNA)为模板介导的特异性降解可阻断相应基因的表达。RNA干扰作为一种普遍存在的抵抗病毒入侵、维持转座子稳定性和调控基因表达的RNA水平上的作用机制,其在病毒性疾病防治的研究中得到了广泛应用。

RNA干扰技术在对虾抗病毒感染中的应用研究进展

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是与靶基因同源的双链RNA诱导的特异转录后基因沉默现象，作为近年兴起的一项新兴技术，被认为有抑制病毒复制的功能。分析目前运用RNA干扰技术在对虾抗病毒感染的研究进展，发现序列特异性的dsRNA在对虾体内能诱导产生强烈的抗病毒反应，表明与RNAi相似的机制存在于对虾的抗病毒反应中。这为免疫进化和控制对虾病毒病提供了科学依据。

RNA干扰的抗病毒作用：阻止乙型肝炎病毒复制的新策略

近年来，科学家们发现了一种普遍存在的重要的基因调节机制，被称为RNA沉默或者是RNA干扰(RNAi)。虽然RNAi基因调节的机制并没有完全搞清楚，但科学家已将研究的重点放在治疗作用上，特别是抗病毒作用。本文介绍了近年利用小干扰RNA(siRNA)阻止乙肝病毒复制的多个成功的体内和体外研究。这些研究使我们离使用RNAi作为一种抗病毒治疗的手段越来越近。