抗IgE单克隆抗体联合变应原特异性免疫治疗的应用进展

抗IgE单克隆抗体目前已被批准用于治疗哮喘和慢性荨麻疹,同时抗IgE单克隆抗体联合变应原特异性免疫治疗(AIT)作为过敏性疾病的辅助治疗已引起普遍关注。研究表明,在AIT治疗中或治疗前添加抗IgE单克隆抗体可显著减少AIT不良反应的发生频率和严重程度,明显改善症状评分,缩短达到维持剂量所需的时间。目前仍需要更大规模的高质量对照试验更好地识别抗IgE单克隆抗体联合AIT的获益人群,以及治疗最佳剂量和持续时间,并评估长期效益、进行成本-效益分析。本文就抗IgE单克隆抗体在AIT中作为辅助治疗的应用进展进行综述。

猪γ干扰素单克隆抗体的制备与特性研究

为了制备高特异性的抗猪γ干扰素(IFN-γ)抗体,试验采用原核表达的携带His标签的重组猪IFN-γ(PoIFN-γ)蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备杂交瘤细胞;并以携带GST标签的重组蛋白PoIFN-γ(GST-PoIFN-γ)为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选稳定分泌抗体的单克隆细胞株;而后通过间接ELISA方法、单克隆抗体亚型鉴定试剂盒、SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定和间接免疫荧光方法对获得的单克隆抗体的腹水效价、亚型、反应特异性等生物学特性进行鉴定。结果表明:经筛选后共获得7株能稳定分泌PoIFN-γ的单克隆抗体细胞株;7株单克隆抗体的腹水效价在1∶2048000~1∶16384000之间,均为IgG1亚型,均能与原核表达及真核表达的PoIFN-γ蛋白发生特异性反应且反应性良好。说明试验成功制备了可特异性识别PoIFN-γ的单克隆抗体。

吸收放散试验在混合不规则抗体特异性验证中的应用分析

目的分析吸收放散试验在患者血清中存在混合不规则抗体特异性验证试验中的应用价值,为建立适合患者血清中存在混合不规则抗体的特异性鉴定方法和临床输血策略提供参考依据。方法采集患者抗凝或不抗凝血标本,离心分离血清和红细胞,取红细胞用生理盐水洗涤6次,在45~56℃进行热放散或酸试剂放散,用该红细胞在微柱凝胶法(MGT)或盐水试管法(NS)进行ABO、Rh血型鉴定和自身抗体吸收试验。采用MGT或间接抗人球蛋白试验(IAT)对吸收自身抗体后的患者血清进行不规则抗体筛查及特异性鉴定。吸取适量吸收后的患者红细胞进行酸试剂放散,放散液用于抗体特异性验证试验。结果在10例患者中,男性6例,女性4例,年龄39~83岁。A型5例、B型1例、O型2例、AB型2例,ccdEe表型2例;Ccdee表型2例;CCDee,Le^(a-)表型1例;CcDEe,P 2,Fy^(b-)表型1例;CcDEe,Jk^(b-),Fy^(b-)表型1例;ccDEE表型2例;CcDee表型1例。抗体特异性鉴定确认为抗D、抗C混合抗体2例,抗D、抗E混合抗体2例,抗Le^(a)、抗E及抗c混合抗体1例,抗P 1、抗Fy b混合抗体1例,抗Jk b、抗Fy b混合抗体1例,抗C、抗e混合抗体2例,抗E抗体伴高效价冷凝集素1例。IgG型抗体8例,IgM型+IgG型抗体2例。血清抗体凝集强度为弱于1+(1+w)~2+w,抗体效价为1∶2~1∶16,放散液抗体凝集强度强于1+(1+s)^(3+)。直接抗人球蛋白试验(DAT)阴性5例,DAT阳性5例。10例患者中6例有输血史,4例既有输血史又有妊娠史。结论在谱细胞进行抗体鉴定凝集强度<2+、凝集强度存在强弱差异或出现全凝集现象时,采用吸收放散试验在验证血清抗体特异性鉴定结果的同时,反应强度增强,也能够检测到常规方法中漏检的抗体,提高了混合不规则抗体特异性鉴定的准确性,为患者筛查交叉配血相合的血液进行输注,以保证临床输血治疗安全有效。

猪瘟病毒T细胞表位E290多肽与猪细小病毒VP2蛋白在干酪乳杆菌中的共表达及免疫小鼠特异性抗体的测定

将分别编码猪瘟病毒T细胞表位E290多肽和猪细小病毒主要保护性抗原VP2蛋白的重组基因插入干酪乳杆菌分泌型表达载体pPG中,构建了重组表达载体pPG-VP2-E290,将其电转化干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393,获得了猪瘟病毒T细胞表位E290多肽与猪细小病毒VP2蛋白的乳酸菌共表达系统,经2%乳糖在MRS培养基中的诱导表达,对诱导表达的菌体及培养上清液进行SDS-PAGE检测表明,有约70kDa蛋白得到了表达,表达蛋白的大小与理论值相符。Western blot分析结果表明所表达的蛋白具有与天然病毒蛋白一样的抗原特异性。以诱导表达上清液作为抗原进行的间接ELISA实验也表明,重组的目的蛋白获得了分泌表达。将该重组干酪乳杆菌经口服接种途径免疫BALB/c小鼠,收集粪便样品检测小鼠产生抗PPV的特异性sIgA抗体,采集血液样本检测血清中抗PPV及抗E290的特异性IgG。结果表明分泌型的重组菌pPG-VP2-E290/L.casei 393免疫小鼠能够产生明显的抗体水平,为重组猪瘟与猪细小病毒乳酸菌口服活菌疫苗的研制奠定了重要的物质基础。

通过饲喂特异性卵黄抗体控制猪肠道疾病(完)

4新生仔猪中鸡卵黄免疫球蛋白对ETEC的被动保护作用Yokoyama等使用鸡卵黄抗体控制大肠杆菌引起的腹泻进行了一项卓越的研究。选择大肠杆菌产毒菌株(K88、K99和987P),在实验室发酵罐中扩繁、分离和纯化含有粘附素的棒状纤毛。将纤毛注射给蛋鸡,在抗体滴度较高时分离卵黄中的抗体(Ig Y)并喷雾干燥。将仔猪感染不同菌株的大肠杆菌,并使用适当的抗体。

春产猪群乙型脑炎感染动态和特异性IgM抗体的检测

乙型脑炎是一种急性人畜共患病,猪是乙脑流行环节中最重要的宿主。在流行季节,头胎母猪和后备公猪常可出现高热、流产死胎及睾丸炎,其余多为隐性感染。易感猪只出现病毒血症,可能表现一过性体温升高和减食,临床上不易诊断。为了解猪群乙脑的自然感染状况,1989年在杭州市郊某规模猪场采用血凝抑制(HI)试验,定期检测乙脑感染率和特异性IgM抗体,探索乙脑的感染动态并作出早期诊断。现将结果介绍如下。

血型不规则抗体的筛查和抗体特异性分析

目的确证微柱凝胶法血型不规则抗体筛检阳性患者的抗体特异性。方法应用微柱凝胶法对患者血浆(血清)进行血型不规则抗体筛查,对抗体筛查阳性患者的血标本再用凝聚胺法及间接抗人球蛋白试验进行抗体特异性鉴定和效价测定。结果在微柱凝胶法血型不规则抗体筛查阳性210例中,由非特异性抗体引起假阳性35例(16.7%),由血型不规则抗体引起阳性175例(83.3%)。在175例血型不规则抗体阳性患者中,Rh血型系统抗体156例(89.1%),MNSs血型系统抗体10例(5.7%),Lewis血型系统抗体5例(2.9%),Kidd血型系统抗体3例(1.7%),其中Rh血型系统合并Kidd血型系统抗体1例。结论对孕妇产前及受血者进行血型不规则抗体筛查、特异性鉴定及其效价测定,早期进行预防及选择不含相应抗原的血液输注,是防治新生儿溶血病和确保输血安全和有效的重要措施。

无偿献血人群中已育女性HLA抗体筛查及特异性分析

目的了解广州地区已育女性献血者中HLA-Ⅰ和Ⅱ类抗体的分布和特异性,评估这类献血者血液及其成分所含HLA抗体引起免疫性输血不良反应的风险。方法随机收集广州地区已育女性献血者标本343(人)份、未育女性献血者标本140(人)份,利用Lifecodes LifeScreen Deluxe(LMX)筛查标本的HLA抗体,阳性者再分别利用LIFECODES LSATMClassⅠ和LIFECODES LSATMClassⅡ鉴定抗体特异性。结果广州地区已育女性献血者中,抗-HLA阳性率25.07%(86/343),而未育女性献血者中抗-HLA阳性率3.57%(5/140)(P<0.05)。已育女性献血者中HLA-Ⅰ类抗体出现频率较高的分别是抗-A*11 28.8%(17/59)、抗-B*07 42.4%(25/59)和抗-Cw*07 20.3%(12/59),HLA-Ⅱ类抗体出现频率最高者是抗-DRB1*04 40.4%(19/47)。结论已育女性献血者HLA抗体出现的频率较高,这类献血者的血浆和单采血小板用于临床后势必增加HLA同种免疫反应的风险,应引起高度重视。

抗核抗体荧光核型与特异性抗体相关性分析

目的探讨抗核抗体荧光核型与特异性抗体之间的相关性,以期为临床提供更优、更经济的抗核抗体检测组合方式。方法应用欧蒙间接免疫荧光法(IIFA)检测抗核抗体(ANA)判断荧光核型,欧蒙印迹法(LIA)抗核抗体谱(ANAs)15项检测特异性抗体。对3783例患者IIFA-ANA、LIA-ANAs结果进行统计分析,根据检测结果分为IIFA-ANA+/LIA-ANAs-组1548例、IIFA-ANA+/LIA-ANAs+组2220例、IIFA-ANA-/LIA-ANAs+组15例。结果 3768例IIFA-ANA+患者,LIA-ANAs的阳性率为58.92%;1704例IIFA-ANA+/LIA-ANAs+单一荧光核型患者,IIFA-ANA与LIA-ANAs的符合率分别为核颗粒型82.61%、核均质82.80%、核仁型82.86%、着丝点型100%、胞浆型69.29%。IIFA-ANA-/LIA-ANAs+组降低IIFA-ANA稀释倍数后,出现与特异性抗体相对应的荧光核型。结论不能简单依靠IIFA-ANA的荧光核型推断特异性抗体;临床医生可以根据患者病情、IIFA-ANA荧光核型决定患者是否需要检测LIA-ANAs。

E.tenella感染雏鸡特异性抗体的动态变化和母源免疫的研究

本实验用斑点酶联免疫试验 (Dot ELISA)检测了E .tenella感染雏鸡特异性抗体、免疫母鸡卵黄和后代血清中特异性母源抗体的动态变化及不同日龄雏鸡的抗球虫水平。结果表明 :(1)雏鸡感染E .tenella后第 6d即可在循环血液中检测到特异性IgG ,于第 18天达到峰值 ,第 30天降至感染后第 7天时的水平。 (2 )母鸡二次免疫后第 5天卵黄中即有高水平的母源抗体 ,免疫母鸡后代 1日龄时母源抗体滴度高达 9.83,与未免疫对照组差异极显著 (P <0 .0 1) ,二者都随着日龄增长降低 ,但免疫组下降幅度很小 ,2 9日龄时仍和对照组 18日龄水平相当。 (3)免疫母鸡后代对再感染的抵抗力显著增强 ,卵囊减少率高达 93%,抗球虫指数和相对增重率都与对照组差异极显著 (P <0 .0 1) ,雏鸡的抗球虫水平随着日龄增长逐渐降低 ;母源抗体、抗球虫指数和相对增重率三者之间两两呈现明显的正相关 ,而这三者又都与卵囊产量呈明显的负相关。

特异性抗心肌抗体对小儿心肌疾病的诊断价值

目的探讨抗心肌ＡＤＰ／ＡＴＰ载体（ＡＮＴ）和肌球蛋白抗体两种特异性抗心肌抗体（ＡＨＡ）对小儿心肌疾病的诊断价值。方法运用免疫印转法和酶联免疫吸附法检测了３０例病毒性心肌炎（ＶＭＣ），１４例扩张型心肌病（ＤＣＭ）患儿血浆抗ＡＮＴ和抗肌球蛋白两种特异性ＡＨＡ水平。结果抗ＡＮＴ抗体和抗肌球蛋白抗体两种ＡＨＡ在ＶＭＣ和ＤＣＭ患儿中的阳性率均显著高于正常对照组（Ｐ均＜０．０５）。抗ＡＮＴ抗体诊断ＶＭＣ和ＤＣＭ的敏感性为７２．７３％，特异性为１００％。抗肌球蛋白抗体诊断ＶＭＣ和ＤＣＭ的敏感性为５４．５５％，特异性为９６％。结论抗ＡＮＴ抗体和抗肌球蛋白抗体均可作为小儿ＶＭＣ和ＤＣＭ的特异性诊断指标，在小儿心脏病的鉴别诊断中有重要价值，且有推广到基层医院的实用价值。

抗凝剂在改良MAIPA法中对ITP患者血小板特异性自身抗体(GPⅡbⅢa和GPⅠbα)检测的影响

探究二价阳离子络合剂的抗凝剂在改良单克隆抗体俘获血小板抗原(MAIPA)法检测免疫性血小板减少症(ITP)患者血小板特异性自身抗体中的影响。分别留取ED-TA-K2和肝素钠抗凝的162例ITP患者标本,采用改良MAI-PA法检测血小板特异性自身膜糖蛋白IIbIIIa(GPIIbIIIa)和膜糖蛋白Ibα(GPIbα)。抗GPIIbIIIa抗体:单用EDTA-K2抗凝剂检出阳性77例,单用肝素钠抗凝剂检出阳性78例,双重检测阳性102例;抗GPIbα抗体:单用EDTA-K2抗凝剂检出阳性53例,单用肝素钠抗凝剂检出阳性51例,双重检测阳性72例。单一抗凝剂与双重抗凝剂比较差异有统计学意义(P<0.05)。二价阳离子络合剂的抗凝剂在改良MAIPA法检测ITP患者血小板特异性自身抗体中有一定影响,采用两种抗凝剂双重检测可提高自身抗体的检出率。

特异性抗变形链球菌鸡蛋黄抗体IgY对定菌鼠龋齿发生的影响

目的 研究特异性抗变IgY形链球菌鸡蛋黄抗体对定菌鼠龋齿发生、发展的影响。方法 将 35只Wistar大鼠随机分为 5组 ,接种耐链霉素的S .mutansMT 814 8,并给予致龋饲料 ,使用特异性抗变链的鸡蛋黄抗体IgY通过不同方式对实验动物进行被动免疫。实验结束后 ,根据Keyes评分方法作龋齿计分 ,并采用t检验进行统计分析。结果 在食物中添加特异性IgY冻干粉或经口腔喷雾IgY漱口水均能显著降低大鼠牙釉质及牙本质外层龋齿计分。给予含特异性抗体的鸡蛋黄饮食能减低龋齿的发生 ,但与对照组比较无显著性差异。结论 特异性抗变链的鸡蛋黄抗体IgY能减少定菌鼠龋齿的发生 ,减缓龋齿的发展。

间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的相互关系

目的分析以间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence,IIF)筛查的大样本抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)结果与特异性抗体检测结果的相互关系,以确定其临床意义及临床实践中二者是否能够相互代替。方法采用IIF筛查2026份临床连续送检血清标本的ANA,采用线性免疫印迹法(line immunoassay,LIA)检测ANAs特异性抗体,将2026份标本分为自身免疫性疾病(autoimmune diseases,AID)组、疑似AID组、非AID组,分析检测结果的相互关系和临床意义。结果 2026份标本中,IIF阳性/LIA阳性882份,占43.53%;IIF阳性/LIA阴性266份,占13.13%;IIF阴性/LIA阴性507份,占25.02%,IIF阴性/LIA阳性206份,占10.17%。IIF与LIA检测ANA的结果总体符合率为68.56%(K=0.472,P<0.01),2种方法检测结果的差异有统计学意义(χ2=416.21,P<0.01)。IIF阴性/LIA非阴性组中,抗Ro-52、抗干燥综合征抗原A(SS-A)、抗双链DNA(dsDNA)、抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)、抗史密斯抗原(Sm)、抗干燥综合征抗原B(SS-B)、抗核糖核蛋白/史密斯抗原(nRNP/Sm)和抗组氨酰tRNA合成酶抗原(Jo-1)抗体的阳性率分别为6.00%～34.94%;IIF阴性/LIA非阴性的312例患者中,AID患者116例,占37.18%,高于非AID患者(22.11%),且差异有统计学意义(χ2=16.97,P<0.01)。IIF阳性/LIA非阳性的325例患者中,AID患者156例,占48.00%,高于非AID患者(22.15%),而且AID患者在IIF-ANA滴度1:80、1:160～1:320和≥1:640各组中的比例均高于非AID患者,其差异有统计学意义(χ2=26.96、χ2=7.89、χ2=19.42,P<0.01)。结论 IIF筛查ANA容易导致AID患者部分具有重要临床意义的ANA特异性抗体漏检,而ANA特异性抗体检测因其测定的抗体数量有限也容易导致AID患者的ANA漏检。IIF-ANA筛查和LIA-ANAs特异性抗体检测不能相互代替,对需要通过检测ANA来排除AID的患者标本应同时进行IIF-ANA筛查和ANAs特异性抗体的检测,以避免仅采用1种方法进行检测时导致的AID患者漏诊。

抗供者特异性抗体对致敏肾移植受者的临床意义

背景:应用灵敏的技术可以检测到致敏肾移植患者体内低水平抗体,但是即便如此临床上依然无法完全检测出全部抗体。目的:探讨抗供者特异性抗体对致敏肾移植受者的临床意义及其在预测排斥反应中的作用。方法:肾移植术前常规检测补体依赖淋巴细胞毒试验和群体反应性抗体,群体反应性抗体阳性者(PRA≥10%)检测抗供者特异性抗体,其术后临床结果与抗供者特异性抗体阴性患者做比较。结果与结论:在379例接受肾移植的患者中,55例患者的群体反应性抗体≥10%,这些患者中75%曾有过致敏史。其中20例检测出抗供者特异性抗体,这些阳性患者肾移植术后更易发生急性排斥反应,移植肾功能恢复延迟和移植肾存活率低下等。结果提示抗供者特异性抗体的存在与移植物失功、排斥反应有显著相关性。而体内仅存非抗供者特异性抗体的患者移植效果相对好。对于淋巴细胞毒试验阴性但体内抗供者特异性抗体阳性的肾移植患者,术后需要更积极地监测免疫功能和调整免疫抑制方案。

抗日本血吸虫膜蛋白特异性单链抗体的构建及表达

目的 用基因工程抗体技术构建抗日本血吸虫膜蛋白特异的单链抗体。 方法 用抗体框架区的通用引物 PCR扩增抗日本血吸虫膜蛋白特异性单克隆抗体 NP11- 4的 VH 及 VL 基因 ,测序分析其核苷酸序列。用VH 和 VL 基因在 p THA90质粒载体中构建成单链抗体基因并诱导表达。 结果 扩增获得 NP11- 4的 VH 和 VL基因 ,经测序分析确定为新发现的抗体可变区序列 ,构建成排列顺序为 VH- linker- VL 的单链抗体基因 ,经诱导表达出与硫氧环蛋白融合的单链抗体 ,大小约为 36 .2 k Da,以包涵体形式存在。 结论 成功地构建和表达了抗日本血吸虫膜蛋白特异性单链抗体。

不同人群抗SARS冠状病毒特异性抗体血清学检测与分析

目的 :探索不同人群中抗SARS冠状病毒特异性抗体的发生、发展及分布规律 ;评价间接ELISA方法检测SARS冠状病毒IgG、IgM特异性抗体试剂盒及改进方法。 方法 :分别获取SARS流行前无偿献血者标本 3990份 ,一线抗SARS医务人员标本 397份和临床确诊的SARS患者标本 15 7份 ,采用ELISA方法进行SARS冠状病毒特异性抗体检测。结果 :SARS流行前无偿献血者标本 3990份共检出IgG抗体阳性标本 16份 ,阳性率为 0 .4 0 % ;IgM抗体阳性标本 0份 ,阳性率为 0 %。一线抗SARS医务人员标本 397份 ,共检出IgG抗体阳性标本 2份 ,阳性率为 0 .5 0 % ;IgM抗体均为阴性。临床确诊的SARS患者标本 15 7份 ,共检出IgG抗体阳性标本 119份 ,阳性率为 75 .79% ;IgM阳性标本 6 8份 ,阳性率为 4 3.31%。结论 :一线抗SARS医务人员与SARS流行前无偿献血者IgG、IgM抗体阳性率无显著差异 (P =0 .76 >0 .0 5 ) ;采用该SARS冠状病毒 (变异株 )IgG抗体试剂盒检测SARS流行前无偿献血者人群存在一定的阳性率 ,说明该试剂盒包被的抗原与其它免疫球蛋白 (IgG)有交叉反应 。

肾移植受者血清抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化

目的探讨肾移植术后出现排斥反应的受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化方法。方法首先分离培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)。收集肾移植术后肾功能不良受者的血清样本,应用流式细胞术进行抗血管内皮细胞特异性抗体的筛选;用Luminex抗体检测平台检测血清中抗人类白细胞抗原(HLA)和主要组织相容性复合体Ⅰ类相关链A(MICA)的抗体。在确定血清标本中存在有抗血管内皮细胞特异性抗体后,用HUVEC将其吸附。洗涤细胞后再将吸附的抗体从细胞膜上洗脱下来,再用Protein-A/G磁珠再次纯化和浓缩洗脱液中的抗体Ig G。采用流式细胞术检测洗脱液中抗体活性,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)凝胶和免疫印迹法鉴定纯化的抗血管内皮细胞特异性抗体(Ig G)。结果在386例肾移植受者的血清中,选取血清肌酐(Scr)>400μmo I/L、抗HLA抗体阴性、抗MICA抗体阴性和荧光反应强度(MFI)>16的5例受者的血清样本,纯化后的抗血管内皮细胞特异性抗体Ig G在SDS-PAGE凝胶显示免疫球蛋白重链(纯度>95%)。流式细胞术结果显示纯化的抗体具有重新结合血管内皮细胞表面抗原的特性。结论采用人脐静脉血管内皮细胞吸附肾移植受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提纯方法可取得较好效果。