影响抗生素微生物检定法(管碟法)测定准确性的常见原因分析

目的总结抗生素微生物检定法(管碟法)中影响测定结果准确性的常见系统误差并加以控制。方法梳理10余年来中检院仲裁复验的案例,对共性问题进行整理,找出可能原因,并采用单一变量实验设计的方式加以确证。结果估计效价和浓度比的错误计算、点样顺序和点样时间规范性和熟练程度、试验标准菌株的变异均会对管碟法测定结果产生影响。结论通过细化实验操作规范,可以避免或尽量消除此类系统误差的影响。

菌种与培养基在抗生素微生物检定法中的应用分析

目的考察菌种、菌种传代培养基及抗生素检定培养基对抗生素微生物检定法的影响,确定抗生素微生物检定法的系统适用性条件。方法选择美国菌种保藏中心标准菌株ATCC6633和中检院标准菌株CMCC(B)63501,分别用A、B企业的营养琼脂培养基传代培养制得四种菌悬液,选择卷曲霉素标准品配制测定溶液,分别采用上述菌悬液和五种不同品牌检定培养基进行抗生素微生物检定管碟法试验,考察不同来源菌种、不同品牌传代培养基及不同品牌检定培养基对实验的影响。结果采用相同品牌传代培养基和相同品牌检定培养基进行试验,I号标准菌株生长相对较好;采用相同来源标准菌株和相同品牌检定培养基进行试验,A企业的传代培养基制备的菌悬液菌层生长较好;采用相同来源标准菌株、相同品牌传代培养基和不同品牌检定培养基进行试验,并对检定培养基进行综合评分,结果B企业的检定培养基质量较差,C企业的检定培养基质量较好。结论标准菌株、菌种传代培养基及抗生素检定培养基的来源对效价测定均有影响,而菌种在法定标准中有明确规定,因此在抗生素微生物检定法中应选择最适传代培养基与检定培养基作为效价测定的系统适用性条件;目前国内培养基质量参差不齐,应对培养基质量进行严格控制。

抗生素微生物检定法测定酒石酸泰万菌素预混剂含量的不确定度分析

本文根据《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1-2012)^([1])的有关规定,对抗生素微生物检定法测定酒石酸泰万菌素预混剂含量的不确定度进行分析和评定。通过量化各分量的相对不确定度,计算出合成不确定度,取置信概率为95%时,得到本次含量测定的扩展不确定度为99.9%±5.2%(P=95%)。

抗生素微生物检定法测定酒石酸泰万菌素预混剂的有效含量

对抗生素微生物检定法测定酒石酸泰万菌素预混剂进行了方法学验证,确定了最适菌悬液加入量和超声时间。结果表明,泰万菌素浓度在2~10 IU/mL范围内线性关系良好;平均回收率为100.24%,RSD为1.21%,准确度良好;精密度RSD为1.15%,精密度良好;辅料对含量测定无影响,专属性良好;不同培养时间和不同厂家的培养基测定结果RSD分别为1.94%和0.20%,方法耐用性良好。该方法适用于酒石酸泰万菌素预混剂的含量检测。

抗生素微生物检定法测定注射用磷霉素钠含量的不确定度分析

目的探讨注射用磷霉素钠含量采用抗生素微生物检定法鉴定的不确定度评定方法。方法本次研究采用抗生素微生物检定法对注射用磷霉素钠含量测定过程中不确定度的来源及大小进行评定。结果总合成不确定度u总=100.5%×urel总=2.5%;按置信概率P=0.96,K=1.95,扩展不确定度为U=1.95×u总=4.9%;注射用磷霉素钠含量测定结果为(100.5±4.9)%。结论在对不确定度进行分析与评估时,应该尽可能地对不确定度所有来源进行密切考察,防止出现遗漏。

正交法探讨抗生素微生物检定法的影响因素

目的探讨抗生素微生物检定法的影响因素。方法采用正交试验法,通过对罗红霉素分散片含量采用的抗生素微生物检定法进行研究。结果平皿分成上下两排,上排先滴加低浓度标准液(1234)下排按逆时针方向滴样(4321),加完菌层下排平皿转180°,滴样量用移液器定量(258μl)滴样为最佳实验操作方法。结论正交试验法为研究其影响因素的一个有效方法。

抗生素微生物检定法测定土霉素片含量的不确定度评定

目的分析抗生素微生物检定法测定土霉素片含量的系统误差。方法采用容量分析法操作。结果土霉素片的含量为(101.6±3.4)%。结论该方法条理清晰、简便、准确,可有效评价土霉素含量测定所带来的不确定度,并能较好地分析其中每一个检验步骤带来的误差,以便综合性考虑该药品的质量。

高效液相色谱-荧光检测法与抗生素微生物检定法测定那西肽预混剂含量的比较研究

研究两种方法测定那西肽预混剂含量的异同。一种方法是新建立的高效液相色谱-荧光检测法,另外一种方法是抗生素微生物检定法,该法收载于《兽药质量标准》2017年版那西肽预混剂质量标准,为那西肽预混剂的法定检测方法。用这两种方法分别测定三个规格那西肽预混剂的含量。两种方法结果相对偏差在1.5%以内,差异不显著。高效液相色谱法影响因素少,线性范围大,操作更便捷,出结果更快,应用于那西肽预混剂实际检测中效率更高。

抗生素微生物检定法中滴加抗生素溶液方法的研究

目的:探索一种加样方法,用于抗生素微生物检定法中滴加抗生素溶液。方法:根据抗生素微生物检定法实验原理,通过对加样误差来源的分析,比较实验生物统计结果,筛选最佳滴加溶液方法。结果与结论:用微量移液器加样,定量270μL(以下称本方法),其速度快、间隔时间短、加样量准确、减少实验误差,生物检定统计可靠性测验获得较好的结果,是抗生素微生物检定法实验中较好的加样方法。

抗生素微生物检定法数据处理的微机程序

《中国药典》1995年版规定大多数抗生素都用抗生素微生物检定法测定其效价。但数据处理较繁琐、费时。现在许多单位广泛使用PC-1500袖珍计算机处理数据。但因其功能较少,处理速度慢,存贮量小而趋于淘汰,且维修不便,耗材在市场上也很难购买。为此本人用FOXBASE+2.10。

抗生素微生物检定法测定红霉素肠溶片含量的不确定度分析

目的:对抗生素微生物检定法测定红霉素肠溶片的含量进行不确定度分析。方法:依据《测量不确定度评定与表示》(JJF1059.1—2012),建立数学模型,确定影响不确定性的因素。结果:测量不确定度的扩展不确定度为U=1.01%(k=2)。结论:测量结果显示测量不确定度主要来源为标准品称重和仪器引入的不确定度,其次为标准品和供试品的稀释体积,应从以上4个操作过程加强控制,以减少试验误差。

微生物检定法测定替考拉宁及注射用替考拉宁的含量

目的 建立替考拉宁及其注射用制剂的含量测定方法。方法 管碟法。中国药典Ⅱ号培养基 ,pH 6 .5～ 6 .6 ;pH 6 .0磷酸盐缓冲液 ;检定菌为枯草芽孢杆菌 [CMCC(B) 6 35 0 1];培养温度为 (36± 1)℃ ;培养时间 14～ 16h ;高、低剂量分别为 40和 2 0u·mL-1。结果 抑菌圈大小适中、边缘清晰 ;在 17.17～ 41.91u·mL-1范围内 ,线性关系良好 (r =0 .99996 ) ;重现性好 (RSD=0 .6 % ,n =6 ) ;回收率为 10 0 .2 % (RSD =1.9% ,n =6 )。

四烯类抗真菌抗生素效价测定方法的改进

目的对四烯类抗真菌抗生素的效价含量测定方法进行改进,提高方法的可靠性与可操作性。方法管碟法。改进培养基pH 6.0~6.2;pH 6.0磷酸盐缓冲液;检定菌为啤酒酵母菌(ATCC9763);培养温度为30℃±2℃;培养时间为(20±2)h;抗生素浓度范围为10~50 U/mL;可信限率(FL%)为不得大于5%。结果抑菌圈大小符合规定,边缘清晰可以使用仪器进行测量;制霉菌素、制霉素分别在9.45~56.34 U/mL和8.43~50.23 U/mL浓度范围内线性良好,回归方程分别为y=0.08854x+1.31343(R2=0.99978)和y=0.10454x+1.28875(R2=0.99843);重现性与重复性好[日内精密度分别为1.95%(n=6)和1.95%(n=6),日间精密度分别为1.83%(n=12)和1.84%(n=12)]。结论改进方法可以作为四烯类抗真菌抗生素及其制剂的常规质量控制方法。

微生物比浊法测定硫酸庆大霉素注射液的效价

目的:建立测定硫酸庆大霉素注射液效价的微生物比浊法。方法:分别采用微生物比浊法和管碟法对硫酸庆大霉素的含量进行测定和比较研究。结果:硫酸庆大霉素的线性范围为0.5～1.3U/m L,r=0.9948,平均回收率为100.94%,RSD=0.23%。结论:微生物比浊法具有简便、精确、快速的特点,可以应用于该产品的质量控制。

微生物比浊法测定麦白霉素颗粒效价

目的建立测定麦白霉素颗粒效价的微生物比浊法。方法分别采用微生物比浊法和管碟法对麦白霉素的含量进行测定和比较。结果麦白霉素的线性范围为1.0～3.3 U·mL^-1,r=0.997 9,平均回收率为100.18%,RSD=0.24%。结论微生物比浊法具有简便、精确、快速的特点,可以应用于该产品的质量控制。

微生物比浊法测定妥布霉素滴眼剂的效价

目的建立比浊法测定妥布霉素滴眼剂的效价。方法分别采用微生物比浊法,高效液相-蒸发光散射器检测法和管蝶法对妥布霉素的含量进行测定和比较研究。结果妥布霉素的线性范围为0.1～0.75U.mL-1,r=0.9992,平均回收率为100.32%,RSD=0.97%。结论微生物比浊法具有简便、精确、快速的特点,可以应用于该产品的质量控制。

管碟法测定硫酸新霉素效价的方法优化

目的优化硫酸新霉素含量管碟法测定方法,增大新霉素抑菌圈直径大小,提高检测结果的准确性。方法按照《中国兽药典》2020版一部附录1200抗生素微生物(检定法)的实验基本要求,设置菌液麦氏浊度(0.5、1、2、3和>4 mcf)、培养基pH(7.6、7.8、8.0、8.2和8.4)、磷酸盐缓冲液中NaCl添加比例(0、3%、4%、5%、7%和9%)等变量进行含量测定,比较抑菌圈直径大小和可信限率等指标。结果在添加0.5%的菌液麦氏浊度为3 mcf的金黄色葡萄球菌液、培养基p H为8.0、缓冲液添加5%的Na Cl条件下,高剂量抑菌圈直径扩大至20 mm左右,抑菌圈边缘清晰,且符合《中国兽药典》可信限率的要求(不大于5%)。通过多产品多厂家的实样验证此条件稳定可靠。结论优化后的方法可用于硫酸新霉素常规效价含量的测定。