红芪多糖-1-1的分离纯化及其调节抗生素诱导小鼠肠道菌群失调的最佳剂量分析

旨在筛选红芪多糖-1-1(Radix Hedysari polysaccharide-1-1,RHPS-1-1)调节小鼠肠道菌群失调的最佳剂量。将红芪粗多糖分别用DEAE-52和Sephadex G-100进行分离纯化得单一多糖RHPS-1-1,采用高效阴离子交换色谱法及甲基化和红外光谱法鉴定其单糖组成与结构。将C57BL/6小鼠90只随机分为正常对照组、模型组、自愈组和不同剂量RHPS-1-1(12.5、25、50、100、200和400mg·kg^(-1))给药组,每组10只。通过连续14d灌服抗生素鸡尾酒(氨苄西林、新霉素、甲硝唑、万古霉素)的方法建立小鼠肠道菌群失调模型,造模结束后,模型组小鼠处死采样,各给药组灌服不同剂量RHPS-1-1进行治疗,正常对照组与自愈组给予等量生理盐水,连续14d。应用16SrDNA高通量测序法分析各组小鼠盲肠内容物的肠道菌群变化特征,并观测正常对照组、自愈组和25mg·kg^(-1)RHPS-1-1组主要脏器的器官指数和组织病理变化。结果表明,经纯化得到单一多糖RHPS-1-1,重均分子量为19.420ku,主要由葡萄糖组成,主链连接方式为1,4-D-Glcp,并具有植物多糖的特征吸收峰。灌服抗生素鸡尾酒使小鼠出现了严重的肠道菌群失调,拟杆菌门、厚壁菌门和放线菌门等优势菌丰度极度减少,变形菌门相对增多,且不能自然恢复;经RHPS-1-1给药后肠道菌群的多样性和丰富度发生改变,25mg·kg^(-1)RHPS-1-1治疗组Chaol指数显著升高(P<0.05),PCA和UPGMA聚类分析结果均显示,25mg·kg^(-1)的RHPS-1-1给药组与正常对照组肠道菌群结构最接近,有害菌Muribaculaceae_unclassified相对丰度降低,有益菌Ruminococcaceae_UCG-014和Clostridiales_unclassified相对丰度增加。自愈组相比正常对照组仅肝脏指数显著减小(P<0.05),经25mg·kg^(-1)的RHPS-1-1治疗后显著升高(P<0.05)。但正常对照组、自愈组及25mg·kg^(-1)的RHPS-1-1治疗组的心、肝、脾、肺、肾和脑均无明显病理变化。结果证明,所获RHPS-1-1是一种分子量约为19.420ku的植物葡聚糖,治疗剂量为25mg·kg^(-1)时,促进抗生素所致小鼠肠道菌群失调恢复的效果最佳,且可改善肝脏指数下降,本研究为红芪多糖调节肠道菌群的临床应用提供依据。

人源化更年期抑郁小鼠模型构建及评价

目的通过粪菌移植技术构建人源化抑郁小鼠模型,并对模型进行评价。方法将更年期抑郁人群和健康人群的粪便移植给“模拟无菌”小鼠,先将60只C57BL/6小鼠分为空白组、抑郁粪菌移植FMT-P组和健康粪菌移植FMT-H组。空白组(n=20)仅予普通饲料喂养;FMT-P组(n=20)采用抗生素鸡尾酒疗法预处理,再进行抑郁人群粪菌移植制作模型;FMT-H组(n=20)则给予抗生素鸡尾酒疗法,再进行健康人群粪菌移植制作模型,均持续28 d。观察大鼠的一般情况和行为学检测(悬尾实验、新环境进食实验、糖水偏爱实验),ELISA测定血清多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)、γ氨基丁酸(GABA)的水平,HE染色观察结肠组织病理。结果与空白组及FMT-H组相比,FMT-P组小鼠体重增长较慢,绝望时间明显延长,摄食时间及糖水偏好率明显下降,并伴有活动减少、毛发蓬乱发黄无泽、易掉落、精神萎靡倦怠等抑郁症状;其血清GABA含量、5-HT含量、DA含量显著降低,镜下可见结肠组织排列紊乱,腺体增多,局部炎性细胞浸润。结论抗生素鸡尾酒疗法结合粪菌移植技术可建立人源化抑郁小鼠模型。

无菌鼠模型制作方法与评价

无菌动物特别是无菌大鼠、小鼠的成功培育技术成为研究微生物与人类生命现象关系的关键技术。严格的无菌动物是指在动物体宿主内外任何部位及生活环境中均检测不出一切生命体。广义的无菌动物还包括清除肠道中大部分菌群的动物,又称为伪无菌动物。目前制作无菌鼠的方法主要有剖腹取胎无菌饲养法制作无菌鼠模型,抗生素鸡尾酒法制作伪无菌鼠模型。本文对无菌鼠模型的制作方法进行总结并对其优缺点进行评价。