CHAP抗生酶数据库的构建及其信息分析

目的建立CHAP抗生酶数据库,对已知的CHAP抗生酶信息进行收集整理,为研究其功能机制,和设计研发新型CHAP抗生酶提供帮助。方法收集公共数据库和科学文献中的CHAP抗生酶信息,使用UniProtKB,InterPro,PDB,GO和BioPerl进行信息关联和信息注释;使用Apache,MySQL,PHP,Perl和jQuery构建数据库及WEB页面。结果构建了基于WAMP架构的CHAP抗生酶数据库(http://biotechlab.fudan.edu.cn/database/chap),包含来自于263种来源的1572种CHAP抗生酶,WEB界面提供浏览、搜索和统计信息等功能,允许用户以自定义的搜索标准快速获取数据,并对CHAP抗生酶的序列、结构、来源、功能、物化性质等信息进行分析。结论本研究建立的CHAP抗生酶数据库作为抗生酶研究的一个独特工具,具有多种潜在的应用,为进行CHAP抗生酶研究的研究者提供了一个极有用的研究平台。

超高压液相色谱-串联质谱法测定牛奶中的β-内酰胺类抗生素及其酶抑制剂

目的：建立同时测定乳制品中β-内酰胺抗生素(头孢哌酮、头孢噻肟)及其抑制剂(舒巴坦、他唑巴坦)的超高压液相色谱-串联质谱分析方法。方法样品经乙腈沉淀蛋白,正己烷去除脂肪后,采用Oasis HLB固相萃取柱进一步净化,得到样品溶液。以Waters UPLC BEH C18柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm )分离,采用电喷雾负离子模式电离(ESI-),多反应监测(MRM)模式检测,以保留时间和两对MRM离子对的比定性,基质匹配曲线定量。结果4种分析物在1～100μg/L范围内成线性,相关系数r>0.997,空白样品中4种分析物的添加回收率为85.5%~95.5%,检出限为0.1~0.2μg/L。结论本方法快速、灵敏,重现性好,可用于乳制品中β-内酰胺类抗生素及其酶抑制剂的快速准确检测。

1株携带多种抗生素灭活酶基因的铜绿假单胞菌临床分离株

目的了解铜绿假单胞菌携带多种抗生素灭活酶基因的情况和有关机制。方法应用聚合酶链式反应(PCR)法对多重耐药的铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因和op rD2基因检测与分析。结果PCR结果显示CARB和TEM型β-内酰胺酶基因,aac(6′)-I、aac(6)′-I I、ant(2″)-I、ant(3″)-I氨基糖苷类修饰酶基因扩增阳性。op rD2基因扩增检测呈缺失型。CARB和TEM型β-内酰胺酶基因扩增产物经测序、BLA ST n比对分析为blaCARB-3和blaTEM-1。结论铜绿假单胞菌可携带多种抗生素灭活酶基因,多重耐药铜绿假单胞菌(M DRP)的逐渐增多,严重威胁临床的抗感染治疗。

新型碳青酶烯类抗生素——艾他培南

艾他培南是同类结构中唯一非胃肠道给药的碳青酶烯类抗生素,有广泛的抗菌活性,包括革兰阳性与阴性需氧菌和厌氧菌。对临床分离菌,如铜绿假单胞菌、耐酶葡萄球菌和耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)和肠球菌有效。临床上用于治疗成人中度至重度敏感菌引起的感染,如:腹腔内感染、皮肤软组织感染、肺炎、复杂的尿路感染、肾盂肾炎和急性盆腔炎。对头孢菌素耐药的超广谱β内酰胺酶(ESBLs)和AmpC型β内酰胺酶及青霉素耐药的肺炎球菌有较强活性。艾他培南蛋白结合率高,血清半衰期为4h,每日1次给药,耐受性好。

碳青酶烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵机制的初步研究

目的研究外排泵在碳青酶烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌中的表达情况,为进一步研究其多重耐药机制奠定基础。方法采用M-H琼脂稀释法,测定添加和不添加抑制剂MC207110时铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的MIC值。结果 MC207110最佳使用浓度为20μg/ml。198株多重耐药铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的MIC值下降4倍以上的菌株分别有55.49%和67.15%。结论外排泵机制是导致美罗培南和亚胺培南对铜绿假单胞菌耐药的主要机制之一。MC207110可以作为研究细菌外排泵机制的一种较好抑制剂。

一株产多种β-内酰胺类抗生素酰化酶菌株的筛选

为了从大量的候选菌株中快速筛选头孢菌素酰化酶产生菌 ,设计并合成了一系列头孢菌素酰化酶的底物类似物。这些酰胺类的底物类似物由二部分组成 ,一部分为与头孢菌素相同或相似的侧链 ,另外一部分为发色基团或便于检测的基团。它们被酰化酶水解酰胺键以后可以方便快速的检测 ,因此用于对大量菌株进行快速筛选。采用这些化合物筛选到 6株酰化酶阳性菌株。其中菌株ZH0 65 0能够同时水解GL 7ACA和多个底物类似物。进一步研究表明 ,该菌至少产生 3种酰化酶 ,AD NABA酰化酶 ,青霉素G酰化酶和头孢菌素C酰化酶。我们初步纯化了AD NABA酰化酶和青霉素G酰化酶 ,并对头孢菌素C酰化酶的活力进行了鉴定。这是首次报道的可以产生青霉素G酰化酶和头孢菌素酰化酶等多种酰化酶的菌株 ,具有良好的应用前景。

四种碳青酶烯类抗生素对铜绿假单孢菌和鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性分析

铜绿假单孢菌和鲍曼不动杆菌是引起院内感染最常见的非发酵菌。这类菌能通过产生B-内酰胺酶和钝化酶、形成药物渗透屏障和药物泵出等多种机制对抗生素产生耐药，耐药性极强，给治疗带来了一定的困难。本次研究检测重度感染常用抗生素对以上细菌菌株的最低抑菌浓度。现报道如下。

青霉烯类β-内酰胺抗生素的研究进展

青霉烯类衍生物是一类重要的非典型的 β 内酰胺类抗生素。其特点是具有广谱抗菌活性 ,包括对β 内酰胺酶产生菌 ,对脱氢肽水解酶 Ⅰ 稳定 ,是一类具有发展前景的新型抗生素。本文综述了三类临床研究较多的重要的青霉烯类抗生素法罗培南、利替培南酯和硫培南的抗菌活性。同时对青霉烯类衍生物C 2位取代基分别为硫取代、碳取代和氧取代化合物结构与活性的构效关系进行了研究。

革兰阴性杆菌产碳青霉烯酶表型检测及耐药性分析

随着碳青酶烯类抗生素（CAB）的应用增多,细菌对CAB的耐药性也在不断增加,而且CAB细菌（RCAB）大多数呈多重耐药,这就给临床治疗造成极大困难。革兰阴性菌对CAB耐药的主要机制之一是产生各种碳青酶烯酶（CHBLs）,CHBLs可分为丝氨酸类（SCHBLs）和金属类（MCHBLs）两大类,不同类型的CHBLs的特性不同,

WT-L1与Co(Ⅱ)-L1的光谱表征及催化水解β-内酰胺类抗生素的动力学研究

目的表征金属β-内酰胺酶(MBL)L1的结构和动力学特性,以其发展MBL的通用型抑制剂。方法在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达并纯化野生型L1(Wild type L1,WT-L1),以SDS-PAGE电泳确认;用EDTA除去WT-L1中的Zn(Ⅱ)离子得Apo-L1,再用Co(II)滴定制得Co(Ⅱ)-L1;通过UV-Vis,CD及荧光光谱表征WT-L1及Co(Ⅱ)-L1活性中心的结构;采用稳态动力学方法测定WT-L1及Co(Ⅱ)-L1催化3类9种β-内酰胺类抗生素水解反应的酶动力学参数,确定抗生素对L1的稳定性。结果获得纯化的WT-L1和重组的Co(Ⅱ)-L1;光谱表征表明L1具有两个金属活性中心,Co(II)-L1的二级结构发生显著变化;WT-L1对碳青霉烯类抗生素的酶促活性最强,青霉素类次之,头孢类抗生素较弱,Co(Ⅱ)-L1比WT-L1的酶催活性弱。结论 Co(Ⅱ)-L1的重组实现了对MBL-L1的结构表征,L1对青霉素类抗生素呈现强的催化活性,对头孢类抗生素稳定。

脱氧糖组合生物合成的研究进展

天然活性物质的糖基对其发挥生物活性十分重要。目前已从许多抗生素产生菌中分离出各种糖生物合成基因簇以及糖苷转移酶基因,对其生物合成途径的认识也不断深入。近年的研究结果表明抗生素的糖合成酶和糖苷转移酶具有一定的底物宽泛性。本文在总结脱氧糖生物合成基因及糖苷转移酶基因的发展概况基础上,重点综述了运用组合生物合成技术改造脱氧糖分子结构的研究进展。

美罗培南、亚胺培南治疗成人急性粒细胞缺乏症的疗效观察

目的评价两种碳青酶烯类抗生素美罗培南、亚胺培南治疗成人急性粒细胞缺乏症的疗效及安全性。方法回顾分析31例使用美罗培南、30例使用亚胺培南治疗的成人急性粒细胞缺乏症患者的临床表现、细菌学培养结果以及不良反应,临床分离菌分别进行美罗培南、亚胺培南的体外药敏试验。结果美罗培南、亚胺培南疗效均较好,临床治疗总有效率分别是93.5%和86.7%,P>0.05;本组患者咽拭子、血、尿培养共获90株病原菌,经治疗后,美罗培南组病原菌清除率为77.6%,亚胺培南组为63.4%,P<0.01;另外,这两种药物使用中不良反应发生较少而轻。结论碳青酶烯类抗生素用于治疗成人急性粒细胞缺乏症疗效确切安全,是理想的选择。

2014—2019年贵州某医院耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌的耐药及分布特点

目的分析贵州某三甲医院2014—2019年近5年耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae bacteria,CRE)的分布及耐药性。方法采用自动化仪器MIC法、纸片扩散法(K-B法)和E-Test法结合对临床分离CRE进行药敏试验,并按2019年CLSI标准判断药敏试验结果,采用WHONET 5.6软件做回顾性统计分析。结果2014—2019年共分离1163株CRE,其中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)667株占57.35%,耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CRECO)134株,占11.52%。CRE主要分离自重症监护室(ICU,148株,12.73%)、神经内科重症监护室(NICU,96株,8.25%)和急诊科重症监护室(EICU,87株,7.48%),以呼吸道标本(587株,50.15%)及尿液标本(187株,16.11%)来源为主。药敏结果显示CRE普遍耐药,其中CRKP对大多数抗菌药物耐药率在90.0%以上;CRECO对阿米卡星敏感,耐药率仅为20.1%;耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌对喹诺酮类抗菌药物左氧氟沙星、环丙沙星的耐药率为30.6%、41.8%。结论CRE耐药情况严峻,临床应根据药敏结果制定合理的抗感染治疗方案,并加强医院感染控制措施的落实,减少耐药菌的产生。

患者及相关环境分离CRKP的耐药谱与同源性

目的了解某医疗机构耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)感染患者临床分离株与环境分离株的同源性。方法收集该院1例患者分离的CRKP与该患者周围环境中检出的4例肺炎克雷伯菌,测定5株菌对临床上常用抗菌药物的敏感性,利用改良Hodge试验和CIM(Carbapenem Inactivation Method)试验检测5株菌产碳青霉烯酶情况,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对其进行同源性分析。结果药敏试验结果显示,5株肺炎克雷伯菌(1株来自患者,4株来自于患者所在的病房环境,分离自护工手、溶液瓶口、升降扶手、床栏杆)除对头霉素类、氨基糖苷类抗生素的药敏结果不一致外,对其他各类抗菌药物均表现为耐药。改良Hodge试验和CIM试验证实5株菌均产碳青霉烯酶;PFGE结果显示,病房溶液瓶口、床栏杆、病床升降扶手同患者标本分离的CRKP电泳图谱一致,为同一菌株,而护工手同患者标本分离的CRKP电泳图谱有2条条带的差异,其菌株间有相近的关系。结论患者及其周围环境检出同一种CRKP,应严格执行医院感染控制制度,隔离感染患者,加强环境的清洁与消毒,避免医院感染暴发。

烧伤患者耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌感染的环境追踪研究

目的研究烧伤患者耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)感染与环境菌株的同源关系,为烧伤患者CRKP感染的防治提供科学依据。方法前瞻性监测某院烧伤科重症监护病房(ICU)2020年6—12月的CRKP感染患者,进行临床标本与环境标本采样,通过Compact VITEK 2全自动微生物分析仪进行菌株鉴定和药物敏感试验。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)进行菌株同源性分析,并检测毒力基因、荚膜血清型基因携带情况。结果共有4例烧伤患者发生CRKP感染,2株分离自创面分泌物,2株分离自血。采集环境标本152份,经细菌鉴定和药物敏感试验,获得CRKP菌株共15株。通过PFGE分析,经聚类分析获得结果为A~G 7个聚类组,1号患者的血标本、2号患者的血标本及外环境标本及3号患者的创面分泌物及外环境标本具有同源性,为同一型别A型。将A~G型别的菌株进行MLST分析,结果分别得到A~G型为ST11、ST35、ST1、ST37、ST2929、ST23、ST17。对15株CRKP菌株进行毒力基因检测,5株K57型,ST型别为ST35、ST37和ST17。结论烧伤患者环境CRKP检出率高,通过对环境标本追踪发现与临床标本分离菌株具有同源性,说明有效控制环境污染有助于防控感染传播扩散。CRKP出现局部克隆株流行,可能合并高毒力,下一步应开展更大范围的监测。

海南分离出一株产新德里金属β-内酰胺酶-1基因的产气肠杆菌

目的分离与鉴定海南地区临床发现的耐碳青酶烯类药物的产气肠杆菌是否携带新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-beta-lactamas-1,NDM-1)基因。方法用法国梅里埃API 20E生化鉴定条和VITEK2全自动细菌鉴定仪及其配套CNS试剂,鉴定出临床耐亚胺培南和美洛培南的产气肠杆菌,并用亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验测定产金属酶类碳青霉烯酶;然后,对目的菌株进行NDM-1耐药基因聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)特异性扩增后,将扩增产物行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定及BLAST比对,以确定其NDM-1基因。结果采用亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验,从10株耐亚胺培南或美洛培南的产气肠杆菌中,检出4株金属类碳青霉烯酶表型阳性菌株。对其中4株金属酶表型阳性的产气肠杆菌进行NDM-1基因PCR扩增后,对其产物进行琼脂糖凝胶电泳和测序分析,确认1株为携带NDM-1的耐药基因菌株。结论海南发现1株携带bla NDM-1基因的产气肠杆菌。

北京医院老年住院患者嗜麦芽窄食单胞菌流行趋势

目的回顾性分析北京地区6年来老年患者临床分离嗜麦芽窄食单胞菌流行概况。方法对北京地区2004-2009年从临床老年患者中分离出的嗜麦芽窄食单胞菌,进行了病例回顾性的调查与分析。结果 1195份嗜麦芽窄食单胞菌中,分离率:呼吸道标本占96.3%,血培养占1.4%,尿培养占1.2%。2004年,左氧氟沙星、复方新诺明耐药率分别是35.7%和14.7%;但2005至2006年趋于平缓,目前无下降的趋势。住院病人的年龄、住院时间、抗生素使用种类等是造成分离率增高的危险因素。临床使用碳青霉烯类药物的治疗与嗜麦芽窄食单胞菌的分离呈明显相关趋势。同时只有4%临床医生对实验室反馈报告进行了采纳。结论嗜麦芽窄食单胞菌是正常人群呼吸道的定值菌,该菌已经成为重要的机会致病菌。环境消毒、合理使用抗生素是控制该菌院内感染的有效措施。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯杆菌的感染现状及治疗进展

肺炎克雷伯杆菌（Klebsiella pneumoniae，KP）是一种机会致病菌，是导致社区获得性感染和院内感染的常见病原菌之一，呈全球性流行趋势。碳青酶烯类抗生素往往是控制KP感染时最后选择的药物。然而，近年来随着碳青酶烯类抗生素的广泛使用，耐碳青酶烯类肺炎克雷伯杆菌（carbapenem—resistant Klebsiella pneumoniae，CRKP）逐渐出现并广泛流行，重症监护病房（PICU）中呼吸机相关肺炎的患儿及其他感染类型的患儿中多次检出CRKP。

厄他培南治疗老年人社区获得性肺炎

由于年龄和基础疾病的原因，老年人肺炎的临床表现常不典型，多数起病隐匿常缺乏咳嗽、咳痰、发热、胸痛及肺部湿啰音等肺炎的特征性表现。厄他培南是种新型1β-甲基碳青酶烯类抗生素，具有抗菌谱广、药物代谢动力学参数优良、不良反应少等特点，