抗生长分化因子-9抗体对化疗所致大鼠卵巢损伤的保护作用

目的探讨抗生长分化因子-9抗体(Anti-GDF-9)对化疗所致体外培养大鼠卵巢损伤的保护作用。方法实验分3组,每组32个卵巢:(1)正常对照组不加磷酰胺氮芥(PM);(2)PM组加入10μg/mL的PM;(3)抗体组在加入PM前24 h加入Anti-GDF-9(5μg/mL)。加入PM前,加入后2、4、6 d每组分别取出8个卵巢,测雌二醇(E2)浓度,计数卵泡总数。结果加入PM2、4、6 d抗体组E2浓度、卵泡总数均高(多)于PM组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Anti-GDF-9能减轻PM所致大鼠卵巢的损伤,有保护作用。

抗生长分化因子-9抗体与化疗所致大鼠卵巢损伤的关系的研究

目的:探讨抗生长分化因子-9抗体(Anti-GDF-9)对化疗所致大鼠卵巢损伤是否具有防治作用。方法:将96个大鼠卵巢分为6组:①正常对照组12个;②磷酰胺氮芥(PM)组12个;③生理盐水组12个;④同时加抗体组20个;⑤先加抗体组20个;⑥后加抗体组20个。加入抗体的3组有12个卵巢培养8 d,8个卵巢培养14 d,其余3组均培养8 d,隔天换液;按上述要求取出标本,称湿重,HE染色,计数卵泡总数。结果:培养8 d,正常对照组和同时加抗体组的卵泡总数比较,差异无统计学意义(P>0.05),其余各组两两比较卵泡总数差异均有统计学意义(P<0.05),其中先加抗体组多于正常对照组;培养14 d,加入抗体的3组两两比较卵泡总数差异均有统计学意义,先加抗体组卵泡总数最多。结论:体外实验,在加入PM前或同时加入Anti-GDF-9可能会减轻PM对大鼠卵巢的损伤。

水牛生长分化因子9成熟肽基因克隆及重组蛋白质和多克隆抗体的制备

为了获得水牛生长分化因子9(Growth differentiation factor 9,GDF9)重组蛋白质和抗GDF9抗体,根据GDF9基因编码区序列(GenBank:FJ529501.1)设计1对引物,用水牛基因组DNA为模板扩增水牛GDF9成熟肽基因序列,并与其他反刍动物的GDF9成熟肽基因序列进行同源性比较。将该序列克隆到表达载体pRSET-A的BamHⅠ和HindⅢ酶切位点之间以构建重组表达载体,并将重组表达载体转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),转化菌经IPTG诱导表达重组蛋白质。经Ni-NTA凝胶纯化后的重组蛋白质与矿物油佐剂混合免疫新西兰兔制备抗GDF9抗血清,使用ELISA方法检测血清抗体效价,从抗血清中进一步纯化GDF9抗体。结果显示,成功获得了水牛GDF9成熟肽基因序列,该序列在牛和其他反刍动物之间高度同源。成功构建了重组表达载体并转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导后表达了分子量为1.96×104的GDF9重组蛋白质,其最高表达量达到菌体蛋白质总量的30%左右。成功制备了抗GDF9抗血清,血清效价达到1∶51 200,抗血清经纯化后得到了高纯度的GDF9抗体。GDF9重组蛋白质和抗GDF9抗体有望应用于提高羊繁殖性能和促进动物胚胎发育的研究和技术开发。

scAAV9-IGF-1对SOD1-G93A小鼠抗凋亡通路的作用

目的 探索以自我互补双链腺相关病毒9为载体介导的人胰岛素样生长因子-1 (scAAV9-IGF-1)对SOD1-G93A转基因小鼠抗凋亡通路的作用。方法 采用肌萎缩侧索硬化(ALS)的动物模型即转基因SOD1-G93A突变型及野生型(wild type-SOD1,WT-SOD1)小鼠,在其出生后60 d龄时,雌性同窝阳性SOD1-G93A转基因小鼠采用随机的方法分配到治疗组及溶剂对照组,治疗组全身多点肌肉注射scAAV9-IGF-1,溶剂对照组多点肌肉注射AAV9-GFP,同年龄WT-SOD1作为阴性对照组。在肌肉注射40~50 d后,利用PCR技术检测腰髓中IGF-1含量的变化,同时检测抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2的mRNA含量变化,通过免疫组化染色观察抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达。结果 PCR技术检测显示scAAV9-IGF-1处理后,腰髓中IGF-1的mRNA含量显著高于GFP对照组,抗凋亡通路因子Bclxl、Bcl-2的mRNA含量均高于溶剂对照组(均P<0.05),而与WT组差异无统计学意义。免疫组化染色结果显示,治疗组中抗凋亡通路蛋白Bcl-xl,Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达多于溶剂对照组,并且与WT阴性对照组相当。结论 scAAV9-IGF-1可以激活SOD1-G93A转基因小鼠模型中的抗凋亡通路,其通过上调Bcl-xl,Bcl-2的mRNA水平,进而增加Bcl-xl、Bcl-2的蛋白表达,从而产生抗凋亡的作用。

生长分化因子-9在大鼠卵巢中的表达

目的:探讨生长分化因子- 9(GDF - 9)在大鼠卵巢中的表达部位。方法:选择不同发育时期的大鼠卵巢,采用免疫组化和Westernblot技术检测大鼠卵泡各发育阶段GDF - 9蛋白表达情况及分布规律。结果:免疫组化方法显示,出生0～2d卵巢中未见GDF - 9表达,出生3d卵巢中见部分原始卵泡卵母细胞GDF - 9表达阳性,以后从初级卵泡到发育成熟的卵泡卵母细胞均明显可见GDF - 9蛋白表达。Westernblot技术进一步提示,出生0～2d卵巢中无GDF - 9蛋白形成,第3d开始有GDF - 9蛋白产生,以后在卵巢发育的各时期均有GDF - 9蛋白分泌。结论:GDF - 9在卵巢发育的早期即开始产生,以后在各阶段卵巢中持续表达,提示卵母细胞通过产生GDF -

生长分化因子-9与卵泡发育和卵巢早衰

生长分化因子-9是重要的卵母细胞源性生长因子。其在促进卵母细胞生长与分化以及颗粒细胞增殖、卵丘膨胀、抑制颗粒细胞和卵泡膜细胞分化的过程中起重要作用。卵巢早衰是病因不清又无有效治疗手段的复杂疾病。研究认为,卵巢内始基卵泡形成数目的减少、已形成的卵泡闭锁速度加快和对促性腺激素刺激不敏感是造成卵巢早衰的主要病因。生长分化因子-9参与了这一过程。

外源性抗转化生长因子-β_1抗体对新生大鼠高浓度氧致肺纤维化的影响

目的观察不同剂量的外源性抗转化生长因子-β1(TGF-β1)抗体作用下,TGF-β1在新生SD大鼠高浓度氧(高氧,>95%O2)致肺纤维化中的表达,了解不同剂量的外源性抗TGF-β1抗体在高氧致肺纤维化中的作用。方法将120只足月新生SD大鼠随机分为6组:空气对照组(Ⅰ组),高氧组(Ⅱ组),高氧+抗TGF-β1抗体0.1mg.kg-1组(Ⅲ组),高氧+抗TGF-β1抗体0.2mg.kg-1组(Ⅳ组),高氧+抗TGF-β1抗体0.4mg.kg-1组(Ⅴ组),高氧+抗TGF-β1抗体0.8mg.kg-1组(Ⅵ组),每组20只。观察及检测高氧暴露3、7、14和28d各组大鼠肺组织病理改变以及TGF-β1免疫组化染色。结果Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组3和7d时表现为明显的急性炎症改变,肺组织水肿、渗出、出血和肺泡间隔轻度增厚,14d时急性炎症减轻而肺组织中TGF-β1表达呈强阳性;28d时出现明显的胶原沉积,形成纤维化。Ⅴ、Ⅵ组3、7、14和28d时相点TGF-β1的表达明显减弱,与Ⅰ组差异无统计学意义;病理改变示早期有轻度炎症反应,14和28d无明显成纤维细胞增生及胶原生成未形成肺纤维化。结论新生SD大鼠连续吸入高氧后可导致急、慢性肺损伤。高氧暴露可刺激肺部产生过量的TGF-β1TGF-β1是与纤维化关系最密切的TGF-β亚型,可促进成纤维细胞分化、生长和增殖。高氧暴露时给予适当剂量外源性抗TGF-β1抗体可减轻新生SD大鼠急性肺损伤,从而减轻肺纤维化。应用外源性抗TGF-β1抗体干预对高氧致肺纤维化损伤有保护作用。

生长分化因子-9与超排卵周期卵巢低反应的相关性研究

目的:研究超排卵周期卵巢低反应与颗粒细胞中生长分化因子(GDF)-9表达的相关性。方法:选取行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的患者70例,采用本中心常规方案进行超排卵,依据取卵时获得平均直径>14mm的卵泡数分为卵巢低反应组21例,中反应组25例,高反应组24例。应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-timePCR)技术检测卵巢不同反应组患者卵泡壁颗粒细胞和卵丘颗粒细胞GDF-9mRNA的表达,分析其与卵巢低反应的关系。结果:卵巢不同反应组患者年龄、不孕年限、基础卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)水平及促性腺激素(Gn)用量差异均无统计学意义(P>0.05)。卵巢低反应组卵泡壁颗粒细胞和卵丘颗粒细胞的GDF-9mRNA表达均低于中反应组和高反应组(P<0.05),GDF-9在卵泡壁颗粒细胞和卵丘颗粒细胞中的表达与获卵数呈正相关(r分别为0.508、0.632,均P<0.01)。结论:超排卵周期卵巢低反应与颗粒细胞GDF-9表达有关。

多囊卵巢综合征患者未成熟卵母细胞体外成熟培养后生长分化因子-9的表达

目的:探讨生长分化因子-9(GDF-9)与多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵母细胞体外成熟及胚胎发育的关系。方法:采集PCOS患者自然周期月经未成熟卵母细胞,经体外成熟培养(IVM)后,免疫组化比较不同成熟度的卵母细胞及其周围颗粒细胞中GDF-9的表达差异;同时收集行IVM后受精的胚胎以及同期因输卵管因素行常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的胚胎及未受精的卵子,免疫组化比较这些胚胎中GDF-9表达的差异。结果:①IVM后共获弃卵70个,其中MII期21个、MI期26个、GV期23个,染色结果显示GDF-9的表达在培养后成熟的卵母细胞MII期中表达较MI期、GV期增强,差异有显著性;而MI期、GV期两组间表达无差异;②共对343个卵子的颗粒细胞进行了免疫组化染色,MII期、MI期、GV期、退变卵周围颗粒细胞中GDF-9表达的阳性率随着卵母细胞成熟度的降低,逐渐降低,退变卵中最低。③共获IVF弃胚胎75个,GDF-9在各期胚胎中的表达均为阳性,且各期胚胎间的表达水平无差异。④对62个IVF中未受精的弃卵进行了染色,结果显示GDF-9的表达水平较IVF胚胎降低,差异有显著性。⑤共获IVM弃胚胎57个,各期胚胎间GDF-9的表达也无显著性差异,但IVF组胚胎中GDF-9的表达水平较IVM组高,差异有显著性。结论:GDF-9可能与人类卵母细胞的体外成熟及胚胎发育有关。

蛋白激酶B在生长分化因子-9抑制卵泡颗粒细胞凋亡中的机制研究

目的探讨蛋白激酶B(PBK,又称Akt)信号转导通路在生长分化因子-9(GDF-9)抑制卵泡颗粒细胞凋亡的分子机制。方法应用Western blot法检测体外培养大鼠颗粒细胞磷酸化Akt的表达,Hoechst法检测体外培养颗粒细胞的凋亡情况。结果 GDF-9能降低促凋亡制剂Ceramide引起的颗粒细胞凋亡,并促进磷酸化Akt在颗粒细胞的表达。结论 GDF-9具有抑制体外培养颗粒细胞凋亡的作用,抑制作用可能通过提高细胞p-Akt的表达完成,Akt信号转导通路在GDF-9抑制颗粒细胞凋亡及卵泡闭锁起一定的作用。

生长分化因子-9和骨形态发生蛋白-15与卵巢反应性的相关性研究

目的探讨生长分化因子-9(growth differentiation factor-9,GDF-9)和骨形态发生蛋白-15(bone morphogenetic protein15,BMP-15)在卵母细胞和卵冠丘颗粒细胞(cumulus granulosa cell,CGC)的表达与人卵巢反应性的关系。方法应用免疫荧光结合激光共聚焦显微术检测31例卵巢中反应患者的34枚、23例高反应患者的29枚未成熟生发泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞GDF-9蛋白的表达,33例中反应患者的37枚、29例高反应患者的34枚第一次减数分裂中期(metaphase I,MI)的卵母细胞BMP-15蛋白的表达;应用免疫细胞化学方法检测两种蛋白在34例低反应、41例中反应和36例高反应患者第2次减数分裂中期(MII)CGC的表达。结果卵巢中、高反应组间卵母细胞GDF-9的表达差异无显著性,卵巢高反应组"卵母细胞"BMP-15表达强度为(39.19±8.84)显著高于中反应组(29.23±7.83,P<0.01),并与获卵数中度正相关,(r=0.492,P=0.002);卵巢不同反应组间CGC中GDF-9和BMP-15蛋白表达强度无统计学意义,但两种因子的表达呈中度正相关关系,(r=0.415,P=0.000)。结论卵巢高反应与卵母细胞BMP-15的表达升高有关;GDF-9和BMP-15共表达于CGC中,且具有同步性,并可能存在协同作用。

生长分化因子-9及生长分化因子-9B与卵巢功能调节

生长分化因子-9及生长分化因子9B是转化生长因子的新成员,为由卵母细胞分泌的糖蛋白,两者结构基本相近。本文从其结构特点、在组织中的表达、对卵巢的生物调节作用,其在体细胞中的受体和信号通路进行了综述。

生长分化因子-9与PCOS的卵泡发育异常

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种多起因、临床特征为多态性的综合征,卵泡发育异常为其重要特征。由卵母细胞所分泌的生长分化因子-9(GDF-9)是卵泡正常生长发育所必需的细胞因子,对早期卵泡正常生长、卵母细胞的有丝分裂、颗粒细胞的增殖、卵泡膜的形成均有促进作用,但GDF-9却在PCOS患者的卵巢中表达延迟、降低,因此,GDF-9在PCOS发生机制中所起的作用令人侧目。本文将在PCOS卵泡发育异常的基础上,综述PCOS与GDF-9的相关性研究。

抗胰岛素样生长因子-Ⅱ单克隆抗体对胃癌细胞株BGC-823的抑制作用

目的探讨抗胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)单克隆抗体(单抗)对胃癌细胞株BGC-823的抑制作用。方法在体外培养人胃癌细胞株BGC-823,实验组分别加入抗IGF-Ⅱ单抗5、10、20μg/ml作用24、48 h,对照组加入二甲基亚砜,用噻唑蓝法检测两组细胞生长抑制情况;在显微镜、透射电镜下观察细胞形态和超微结构,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果不同浓度及作用时间抗IGF-Ⅱ单抗对BGC-823细胞的抑制作用各异,显微镜及电镜下可见细胞凋亡现象。与对照组比较,实验组细胞培养24、48 h时的吸光度值及细胞凋亡率均有统计学差异(P<0.05或<0.01)。结论抗IGF-Ⅱ单抗对胃癌BGC-823细胞有明显抑制作用,且呈一定的剂量、时间依赖性。

生长分化因子-9和卵母细胞体外成熟培养

人卵母细胞体外成熟培养(IVM)在辅助生殖技术中逐渐显示出重要的临床价值。但胚胎发育潜能差,妊娠率低,阻碍了其在临床上的广泛应用。某些细胞因子可能是卵母细胞体外培养的新研究途径,为研究生长分化因子-9(QDF-9)的现状及其在IVM中的作用,参考国内外近年来的研究,发现GDF-9能促进卵母细胞的正常生长及减数分裂,促进初级卵泡颗粒细胞继续生长、增殖,对卵泡的生长和分化起着重要作用,可能是卵母细胞体外培养研究的新途径。

复发性流产影响生命全程保健的免疫病因学研究——可能与抗层粘蛋白-1抗体、血管内皮生长因子及其可溶性受体相关

目的本研究探讨抗层粘连蛋白(anti-Laminin-1,抗LN-1)、血管内皮生长因子(VEGF)及其可溶性受体(s Flt-1)与复发性流产和女性保健的关系。方法 URSA组选择2015年1月至2016年12月在北京市友谊医院妇产科复发性流产专科门诊就诊的URSA患者30例,所有患者就诊前均连续自然流产2次以上,流产都发生于妊娠20周以前。对照组选择同期156例无不良妊娠史的健康妇女,对照组妇女均无肝、肾疾病,无自然流产史、早产史、血栓或出血史、妊娠期高血压疾病史,并且至少有1次成功的妊娠分娩史。本研究采用ELISE方法测定抗LN-1抗体、VEGF、s Flt-1。结果病例组与对照组血清中抗LN-1抗体、VEGF的滴度没有统计学差异(P=0. 407,P=0. 435),但是复发性流产组与对照组s Flt-1的血清滴度有统计学差异(P <0. 01)。结论复发性流产的发生可能与s Flt-1的表达增高密切相关,s Fl T-1与VEGF亲合,可降低妊娠妇女血清内VEGF的含量,阻碍VEGF促进孕妇胎盘血管的生成,干扰孕妇早期胎盘的生长发育,导致孕期内复发性流产。复发性流产病患血清中的血管内皮生长因子及其可溶性受体的表达增高可能是导致早期胚胎停育引发RSA的关键因素之一。RSA是严重危害女性健康及其生命全程包括老年期健康的常见病,病因学复杂,阐明其病因是女性涉及生命全程的保健医学的关键。

雄激素对卵母细胞生长分化因子-9表达的影响

目的:通过观察雄激素对小鼠卵母细胞生长分化因-子9(growth differentiation factor-9,GDF-9)表达的影响,研究GDF-9参与卵泡生长发育及其表达调控机制,探讨GDF-9与多囊卵巢综合征(polycysticovarian syndrome,PCOS)的关系。方法:以性成熟昆明小鼠为研究模型,体内实验分为实验组(注射丙酸睾丸酮)和对照组(注射等体积的生理盐水),每组各20只小鼠,采用原位杂交法检测卵巢组织GDF-9 mRNA的表达水平。体外实验:胶原酶消化加机械法分离性成熟昆明小鼠卵泡进行体外培养,实验组培养液中加睾丸酮,对照组不加睾丸酮,72 h后收集卵泡,免疫组化检测卵母细胞GDF-9的表达水平。结果:体内实验:实验组较对照组卵巢组织GDF-9 mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);体外实验:实验组卵母细胞GDF-9蛋白表达较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:雄激素减弱卵母细胞GDF-9 mRNA和蛋白的表达强度;表达强度降低的GDF-9可能与PCOS卵泡发育停滞有关。

生长分化因子-9和骨形成蛋白-15基因的研究进展

生长分化因子-9(GDF-9)和骨形成蛋白-15(BMP-15)属于转化生长因子β超家族成员,由卵母细胞分泌,是卵泡发育过程中重要的旁分泌因子,能调控卵泡细胞间的相互作用,促进卵泡发育。近年研究发现,GDF-9和BMP-15基因的异常与雌性生育力、临床疾病如多囊卵巢综合征(PCOS)、卵巢早衰(POF)、卵巢高反应等有关。就GDF-9和BMP-15的基因结构、生物学作用及其基因多态性和基因突变方面的研究进展作一综述。

基于生长分化因子-9调控的补肾法治疗卵巢早衰研究进展

卵母细胞分泌的细胞因子在卵泡发育过程中起重要作用,如生长分化因子-9(GDF-9)可调控卵泡的早期发育和颗粒细胞凋亡。补肾法能有效调节卵巢早衰患者GDF-9蛋白表达、促进卵泡正常发育、抑制卵泡异常闭锁,从而改善卵巢功能。本文对补肾法通过调节GDF-9治疗卵巢早衰的研究进展做一综述,为该病防治提供参考。

生长分化因子-9在高雄激素多囊卵巢综合征大鼠模型中的表达

目的:探讨生长分化因子-9(GDF-9)及其mRNA在高雄激素多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型中的表达。方法:43只雌性SD大鼠随机分组,实验组大鼠皮下注射脱氢表雄酮建立PCOS动物模型;采用放射免疫法测定血清性激素水平,结合大鼠模型卵巢组织HE染色的病理结构改变进行模型验证;采用免疫组织化学法检测大鼠卵巢组织GDF-9表达及定位,蛋白印迹法进一步观察GDF-9表达变化;逆转录PCR法检测GDF-9mRNA表达。结果:血清性激素水平及HE染色病理结果均提示模型建立成功。免疫组织化学结果显示实验组卵泡中GDF-9表达增强,卵巢间质GDF-9表达下降,实验组和对照组间卵泡和间质灰度值差异均有统计学意义(P<0.05)。蛋白印迹检测及PCR结果提示实验组GDF-9蛋白表达下降,而GDF-9mRNA表达与对照组比较无差异。结论:GDF-9表达及分布改变可能是PCOS发生发展的重要原因。