日本血吸虫天然抗病分子疫苗的结构与功能分析II.SIEA 28kDa分子的高效液相色谱分离及薄层等电聚焦分析

采用高效液相离子交换法对电泳纯SIEA 28 kDa抗原组分进一步分离纯化。对获得的色谱纯SIEA 28 kDa抗原分子进行薄层等电聚焦分析,测定其等电点。结果证明电泳纯SIEA 28 kDa抗原分子经高效液相离子交换法纯化后,280nm、220nm波长色谱图均为一个两侧对称、光滑的高峰曲线,色谱洗脱液对其免疫活性光密度图也为一个两侧对称、光滑的高峰曲线。色谱纯化证明SIEA 28 kDa抗原组分可能为单一分子,其等电点范围在p15-p17之间。

日本血吸虫天然抗病分子疫苗的结构与功能分析 Ⅰ.未成熟卵28kDa分子的快速分离纯化与鉴定

为了进一步研究日本血吸虫天然抗病分子(SIEA 28 kDa)的结构与功能,采用SDS-PAGE制备电泳和电洗脱法从日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA)中快速分离纯化了SIEA 28 kDa抗原分子,纯化后抗原分子经梯度凝胶电泳分离,重复测定其分子量。同时,采用Western blot和ELISA检测SIEA 28 kDa分子的免疫活性及其生化纯度。证实获得的提取物SIEA 28 kDa抗原分子的纯度高、活性好;用该抗原分子免疫家兔获得的单特异性抗血清可同时识别日本血吸虫未成熟虫卵、雌虫和雄虫的28 kDa抗原组分。说明该分子与日本血吸虫成虫(AWA)28 kDa组分具有部分交叉抗原性。