蓝藻抗病毒蛋白N

蓝藻抗病毒蛋白N(cyanovirin N)是Boyd等 1997年在蓝藻中发现的一种抗病毒蛋白 ,其抗病毒机制是与病毒表面衣壳蛋白上的甘露寡糖结合 ,阻止病毒与宿主细胞表面的受体结合。由于近年不断发现它对各种严重的RNA逆转录病毒的抗病毒活性而倍受关注。

榆黄蘑中一种抗病毒蛋白的纯化及其抗TMV和HBV的活性

采用阴离子交换层析和凝胶层析方法从新鲜食用菌榆黄蘑 (Plearotuscitrinopileatus)中进行了抗病毒蛋白的纯化 ,结果获得了一个纯化蛋白YP4 6 4 6 ,经SDS PAGE可确定其分子量为 2 7.4kD。以半叶法在枯斑寄主心叶烟上检测该蛋白对烟草花叶病毒 (TMV)的抑制率 ,发现有较好的抗TMV活性 ,其抑制TMV的中浓度为 0 .2 4 μg/mL。同时以HepG2 .2 .2 .15细胞株为模型 ,对所获得的蛋白进行体外抗乙型肝炎病毒效果的评价。结果表明该蛋白对HBsAg的 5 0 %抑制时的浓度为 0 .0 8μg/mL 。

金针菇中一种抗病毒蛋白的纯化及其抗烟草花叶病毒特性

通过DEAE-SepharoseFF离子交换层析、Superdex75凝胶层析和高效液相色谱,从金针菇中获得抗烟草花叶病毒蛋白Zb,经SDS-PAGE确定该蛋白相对分子质量为30ku.采用半叶法在心叶烟上检测抗烟草花叶病毒活性,发现该蛋白抑制中质量浓度为4.4μg·mL-1.

抗病毒蛋白抑制植物病毒的应用前景

探索应用外源性抗植物病毒蛋白进行植物病毒病的防治,已经取得了一定的成效;但不同来源的抗植物病毒蛋白,它们的作用机理是不完全一样的.根据近年的研究结果,对这类蛋白的抗病毒作用的机理进行了综述,并对抗病毒蛋白的应用前景进行了展望.

蓝藻抗病毒蛋白N基因的原核表达及重组蛋白的纯化和复性

目的:构建蓝藻抗病毒蛋白(CV-N)基因原核表达载体,表达、纯化并复性其重组蛋白。方法:根据GenBank中CV-N的全基因序列,人工合成CV-N序列,进行PCR扩增。将扩增的PCR产物克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组表达载体pET30a-CV-N,测序鉴定后,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE和Westenblot鉴定表达产物,Ni Sepharose柱纯化目的蛋白,稀释法复性蛋白。结果:重组质粒pET30a-CV-N测序结果显示,插入片段为303 bp,与GenBank中的CV-N基因序列完全相同。经IPTG诱导的CV-N基因可在E.coli中高效表达;SDS-PAGE分析表明,相对分子质量11000处出现一条新条带,主要以包涵体形式存在,37℃诱导2、4、6、8 h后,表达蛋白分别占菌体蛋白的3.87%、19.10%、33.98%和31.58%。Western blot结果显示,重组蛋白能与抗His单抗特异性反应。将诱导6 h的菌体超声破碎后,Ni Sepharose柱纯化,相对分子质量11 000处显示出清晰的单一条带,且蛋白复性效果良好。结论:成功地构建了CV-N原核表达载体,表达并纯化出重组蛋白,为深入研究其抗病毒的活性奠定了基础。

重组抗肿瘤抗病毒蛋白乐复能质控方法与质量标准的建立

目的:建立重组抗肿瘤抗病毒蛋白乐复能(novaferon)的质控方法和质量标准。方法:以WST-1染色法检测Daudi细胞增殖,测定乐复能的抗肿瘤细胞增殖活性;以WISH细胞病变抑制法测定乐复能抗病毒活性;乐复能以胰蛋白酶酶切后,用HPLC分析肽图;其余检测项目按《中华人民共和国药典》(三部)2005年版的规定进行。结果:3批乐复能原液和成品的抗肿瘤比活性均≥2.0×106U/mg、抗病毒比活性均≥1.0×109IU/mg。3批乐复原液的HPLC肽图与参考品一致,乐复原液的蛋白含量、纯度、分子质量、等电点、末端氨基酸序列等指标及成品的细菌内毒素、苯甲酸含量、乙腈残留量等指标均符合规定。根据检定结果建立了乐复能的质量标准。结论:建立的质控方法和质量标准可以保证乐复能的安全、有效和质量可控,可用于乐复能的常规检定。

商陆抗病毒蛋白cDNA的克隆、测序及其植物表达载体的构建

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紫茉莉抗病毒蛋白（Mirabilis antiviral protein，MAP）的空间结构和与底物相互作用的模拟研究

首先应用同源构筑方法建立了低序列同源性的紫茉莉抗病毒蛋白（ＭｉｒａｂｉｌｉｓａｎｔｉｖｉｒａｌＰｒｏｔｅｉｎ，ＭＡＰ）的空间结构，然后对此粗结构进行了分子动力学优化。最后通过对ＭＡＰ，ＴＣＳ与其底物类似物的相互作用，了解ＲＩＰ特异糖苷酶活性的机制。结果表明模拟结构是合理的。ＲＩＰ特异糖苷酶活性主要是由于酶的活性口袋与底物的特殊构象相互匹配。

新型抗病毒蛋白CVN的构建及原核表达

目的构建重组抗病毒蛋白CVN原核表达载体,并进行表达和鉴定。方法采用全基因合成的方法合成目的基因CVN(Cyanovirin-N),将该片断插入到pBluescriptⅡSK(+)载体中后,亚克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET-CVN表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。用SDS-PAGE,Western-blot等方法分析鉴定表达产物。结果合成的目的基因全长303bp,重组载体pET-CVN经PCR和双酶切鉴定,证实构建成功。将其导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物相对分子量为17 000左右,与理论预期值完全相符。凝胶成像分析表明最高表达量可占菌体总蛋白的46.4%。SDS-PAGE,West-ern-blot分析表明目的蛋白得到了很好的表达。结论成功构建了pET-CVN原核表达载体,并得到了大量的表达,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。

商陆抗病毒蛋白基因的克隆、序列分析及在原核中的表达

从美洲商陆 (Phytolaccaamericana)叶片中通过异硫氰酸胍法提取出了完整的总RNA ,经RT PCR扩增出缺失突变型PAP基因 ,将该基因与克隆载体pGEM(r) T相连接 ,从SP6和T7两端同时对其进行序列测定 ,共测得 711个碱基 ,与国外报道的PAP基因序列相比较 ,其同源性达 99.6 %。同时将该基因克隆至原核表达载体pET 5a上 ,转化大肠杆菌菌株BL2 1(DE3) plysS ,在 0 .4mmol/LIPTG的诱导下表达 ,经SDS PAGE分析表明 ,该基因在大肠杆菌中得到了特异性表达 ,表达蛋白大小为 2 6ku ,与预期值相符。Westernblotting分析发现该表达蛋白与法国PAP抗血清有特异反应。琼脂双扩散免疫沉淀法鉴定发现表达蛋白与其自己的抗血清及法国的PAP抗血清均能形成免疫沉淀线 ,且这两条沉淀线在相交处呈融合状态 ,说明原核表达的该蛋白与法国从商陆叶片中提取出的PAP具有高度的同源性 。

类圆环病毒因子P1感染对猪外周血单个核细胞抗病毒蛋白mRNA转录的影响

为探讨类猪圆环病毒2型因子P1感染对猪抗病毒蛋白分子mRNA转录的影响,将P1分子克隆接种30日龄健康广西巴马小型猪,利用实时荧光定量PCR技术对猪外周血单个核细胞抗病毒蛋白分子PKR、2'-5'OAS2、 RNase L和Mx1的mRNA转录水平的变化进行了定量分析。结果表明,PKR mRNA转录在接种后8 d和40 d呈上调趋势;而2'-5'OAS2 mRNA在3 d和17 d下调,Mx1 mRNA也在接种后17 d下调;RNaseL mRNA转录水平则没有发生明显变化。研究揭示P1感染猪后,机体的抗病毒蛋白的功能受到了不同程度的影响。

Mx1抗病毒蛋白研究及应用

Mx蛋白是一类分子量在70~80 Da之间的蛋白质,在脊椎动物中由干扰素诱导产生。一些Mx蛋白在由干扰素诱导的抗病毒集团中起到细胞内介质的作用。

美洲商陆抗病毒蛋白研究进展

美洲商陆抗病毒蛋白(pokeweedantiviralproteins,PAP)是一类具多种生物功能和活性的蛋白,本文在阐述了该类蛋白的生化等特性的同时,综述了该类蛋白在抗植物病毒、抗动物病毒以及用作免疫毒素等方面的研究进展。

抗病毒蛋白PKR的结构和功能

病毒感染后，细胞合成分泌大量的干扰素（In—terferon，IFN），这些IFN通过自分泌或旁分泌的方式与细胞膜上的受体结合。激活STAT／JAK信号级联反应，调控300多个干扰素调控基因（Interferonstimulatedgenes，ISGs）的转录翻译水平，其中包括经典的抗病毒蛋白PKR。PKR即双链RNA依赖性蛋白激酶，是一种丝／苏氨酸蛋白激酶。

拮抗TMV菌株By33产抗病毒蛋白分离纯化及发酵特性研究

从烟田耕层土壤分离获得对TMV有拮抗作用的菌株By33。其无菌发酵液对TMV的体外钝化作用为81.81%,涂抹菌液24h后接种,仍有73.01%的防效;硫酸铵沉淀获得的活性粗蛋白对TMV体外钝化作用为85.35%。粗提蛋白液经PEG浓缩、凝胶过滤和柱层析分离纯化,再经SDS-PAGE电泳确定该蛋白分子量为27.5KDa,对TMV的钝化效果为80.8%。NB培养基在初始pH6.5、温度30℃、通气量150mL/500mL、180r/min发酵培养48h,产物活性最高。

新型抗病毒蛋白2CVN融合基因的构建、表达与纯化

目的构建新型抗病毒蛋白2CVN融合基因,增强CVN对病毒的结合性及中和活性,为进一步研究抗病毒药物奠定基础。方法采用PCR法,以pBluescriptⅡSK(+)-CVN质粒为模板,扩增CVN片段,在引物中引入Linker序列,将扩增的CVN片段与载体pET-CVN连接,构建pET-2CVN原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),进行表达及产物纯化。结果表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,相对分子质量为29000,与理论预期值完全相符。凝胶成像分析表明目的蛋白表达量可占菌体总蛋白的31.48%,纯化后的目的蛋白纯度达95%以上。结论已成功构建了2CVN融合基因,并获得高效表达。

重组蓝藻抗病毒蛋白N的纯化复性及其抗单纯疱疹病毒1型活性的研究

目的纯化复性重组蓝藻抗病毒蛋白N(cyanovirin-N,CV-N)并研究其抗病毒活性。方法将诱导表达的重组CV-N经Ni Sepharose柱纯化并以稀释法复性,在Vero细胞中进行CV-N抗单纯疱疹病毒1型(herpes si mplex virus type1,HSV-1)活性的研究。通过观察细胞病变效应(CPE)及MTT比色法检测细胞活性,以判断CV-N的抗病毒效应。结果重组CV-N经Ni Sepharose柱纯化后,SDS-PAGE显示11KDa处清晰的单一条带,复性的重组CV-N对Vero细胞毒性极低,对HSV-1无直接灭活作用,CV-N对病毒的吸附及生物合成均有抑制作用,且强于阳性对照药物阿昔洛韦。结论经纯化复性的CV-N具有良好的抗HSV-1活性,值得进一步研究和开发。

蓝藻抗病毒蛋白N的研究进展

蓝藻抗病毒蛋白N(Cyanovirin-N)简称CV-N,相对分子质量11kD,含有101个氨基酸残基,主要是由β-叠片结构形成的链状蛋白,其中有2个内部二硫键。通过基因重组表达纯化的产物,其结构和活性均与天然CV-N相同。CV-N与人类免疫缺陷病毒(HIV)包膜糖蛋白120(gp120)具有高度亲和性,并能够阻断由包膜蛋白介导的细胞融合过程从而阻止病毒的扩散。CV-N不仅能够有效地抑制多个亚型的人类免疫缺陷病毒1(HIV-1),2(HIV-2),猴免疫缺陷病毒(SIV),而且对单纯疱疹病毒、流行性感冒病毒及其他一些包膜病毒也有抑制作用。CV-N的若干特性使其有可能成为一种非常有价值的新型抗病毒药物。

鸡体抗病毒蛋白基因荧光定量PCR检测方法的建立和初步应用

为建立检测鸡干扰素诱生的3种抗病毒蛋白(IFIT5、PKR和OASL)基因表达水平的荧光定量PCR方法,并将其应用于实践,本研究设计和筛选了3个基因的特异性扩增引物,制备了各基因的质粒标准品,绘制了荧光定量PCR的标准曲线,并检测了该方法的灵敏度、重复性和特异性。结果表明所建立的方法敏感度高、特异性强、检测线性范围广、重复性好,应用该方法检测了新城疫病毒感染SPF鸡胚后相关基因的表达情况,发现在病毒感染后IFIT5、PKR与OASL基因的表达水平均迅速提高。

重组蓝藻抗病毒蛋白N抗柯萨奇B3病毒的体外实验研究

目的:研究重组蓝藻抗病毒蛋白N(CV-N)体外抗柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的作用。方法:通过观察药物毒性、细胞病变效应(CPE)、MTT比色法检测细胞增殖,判断CV-N的细胞毒性及抗病毒效果。结果:CV-N对Vero细胞毒性较低(TC50为359μg/ml),对CVB3无直接灭活作用,对阻止CVB3病毒吸附细胞的作用优于病毒唑,而对病毒的复制无明显抑制作用。结论:CV-N作用于CVB3病毒感染的早期,有可能作为柯萨奇病毒感染的预防药物。