番茄花叶病毒移动蛋白和番茄抗病基因Tm-2^2的互作诱导烟草转化体程序性细胞死亡

番茄的抗病基因Tm -2 2 与番茄花叶病毒 (ToMV)的移动蛋白MP基因是一对互作的基因 ,Tm- 2 2 基因和ToMV MP基因同时在烟草中表达 ,并分别获得单一基因整合的纯合转化体植株。病毒接种试验表明 ,Tm -2 2 基因转化体与Tm- 2 2 番茄对Tobamavirus病毒的特异抗性结果一致 ;Tm -2 2 转基因植株和ToMV MP转基因植株杂交试验及其农杆菌注射试验均证明 :(1)Tm -2 2 基因与ToMV- MP在转基因烟草上保持“基因对基因”的互作关系 ;(2 )在外源乙烯的参与下 ,ToMV的移动蛋白与Tm -2 2 基因编码蛋白的互作能够诱导转化体程序性细胞死亡。这一结果为今后研究Tm -2 2 与MP互作的分子机制奠定了基础。

番茄抗病基因Tm-2^2及其等位基因氨基酸序列的比较

从4个番茄栽培品种（Lycopersicon esculentum Miller）中获得了Tm-2^2等位基因的同源克隆，进行序列分析，结果表明：‘沙龙’、‘渝抗2号’和‘97-4’分别与‘GCR-267’（Tm-2^2）、‘GCR-236’（Tm-2）、以及‘GCR-26’（tm-2）有100％的同源性，而樱桃番茄（Lycopersicon peruvianum．var．cerasiforme）品种‘樱红1号’与‘GCR-26’（tm-2）仅有98％的同源性；在C-端的LRR结构域中，抗病基因Tm-2。和Tm-2编码蛋白的氨基酸序列与感病基因tm-2存在624和704两个位点的氨基酸差异，即624位点的脯氨酸（P）对应亮氨酸（L）、704位点的甲硫氨酸（M）对应异亮氨酸（I）；在601—790个氨基酸的LRR结构域中，抗病基因Tm-2、Tm-2及其秘鲁种（Lycopersicon peruvianum var．dentatum）lptm-2三者均与感病基因tm-2的编码蛋白存在23个氨基酸的差异；樱桃番茄品种‘樱红1号’与含有tm-2基因的栽培种之间具有同源性关系。

番茄Tm-2^2基因在烟草中的表达及其对番茄花叶病毒（TOMV）的特异抗性

Tm-22基因在烟草上的转化和表达表明,Tm-22基因在同科不同属植物体上的功能没有改变。在两种类型的纯合转化体上,Tm-22基因编码蛋白能够抗Tobamovirus属5种不同的毒株,并能被ToMV-2a毒株感染而失去抗病性。这个结果表明:移动蛋白上的氨基酸变异能够影响R蛋白对ToMV的应答反应。Tm-22基因转化体在不同启动子的调控下,对ToMV-2a毒株感染所表现的症状不同,说明启动子在Tm-22基因的抗病反应中具有非常重要的作用。

抗病番茄材料114F_6^(4-2)的选育与应用

1 1 4F64 - 2 是高抗青枯病、抗病毒病的优良的番茄育种材料 ,非自封顶类型 ,果实稍长圆形 ,单果重 1 2 0 g,果面微棱沟 ,硬度好 ,果肉厚 ,果皮红色有光泽。在高温条件下能正常坐果。

深绿木霉T2发酵液蛋白分离物诱导抗病作用研究

采用生长速率法和产孢量测定法,研究了不同培养基和温度、pH、接菌量、培养基量对深绿木霉T2生长和产孢量的影响。结果表明,PDA培养基有利于深绿木霉T2的生长;深绿木霉T2发酵产孢最优条件为温度25℃、pH 7、接菌量为0.05mL/L、培养基量为100mL/250mL,此条件下发酵72h时产孢量最大,为1.5×109个/mL;76h时产孢量下降;发酵液通过盐析及凝胶层析获得具有3个洗脱峰的蛋白质液,分别为Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ;采用生长速率法和诱导活体接种法分别测定不同浓度的3个洗脱液对百合灰霉菌的抑菌率及其诱导抗病效果,结果表明洗脱峰Ⅰ蛋白质的100倍液对百合灰霉菌的抑菌率最小,仅为1.16%,而其诱导抗病效果最好,为84.77%。

^(99)Tc^m-MIBI SPECT/CT联合外周血β_2-微球蛋白对脑肿瘤鉴别诊断的价值研究

目的探讨99Tcm-MIBI SPECT/CT联合外周血中的β2-微球蛋白(β2-M)对脑肿瘤良恶性判断的临床价值研究。方法对53例脑肿瘤的患者行99Tcm-MIBI SPECT/CT显像,并于手术前采血测试其中β2-微球蛋白的含量,以术后病理为准,通过计算及统计学比较,对以上两种方法及二者的联合诊断对脑肿瘤定性诊断的效能进行分析与比较。结果99TcmMIBI SPECT/CT和外周血中的β2-M及联合诊断的灵敏度、特异性、准确性分别为68%、71.4%、69.8%,72%、64.3%、67.9%,92%、92.9%、92.5%。结论99Tcm-MIBISPECT/CT显像联合外周血β2-M对鉴别诊断脑肿瘤良恶性较单一方法具有更好的临床应用价值。

^(99m)Tc-DTPA肾动态显像与尿β_2微球蛋白在糖尿病肾病中的诊断价值

目的 :通过99mTc-DTPA肾动态显像及尿 β2 微球蛋白的测定 ,对糖尿病肾病进行更为准确的临床分期。方法 :选取我院 1 0 9例 2型糖尿病患者以及正常人群对照组 2 7例 ,分别测定GFR以及尿 β2 微球蛋白和 2 4小时尿白蛋白。结果 :病程 <5年的糖尿病患者尿 β2 微球蛋白增加 ,2 4小时尿白蛋白正常 ;而GFR上升 ,与病程 5～1 0年和 >1 0年者比较有差异 (P <0 0 5 )。结论 :99mTc -DTPA肾动态显像结合尿 β2

Tim-3靶向CD8^(+)T细胞调控TNF-α/IL-22/STAT3通路加重自身免疫性肝炎小鼠肝损伤

目的探讨T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域的分子3(Tim-3)对自身免疫性肝炎的影响及其机制。方法将30只小鼠分为3组:空白组、模型组和模型+Tim-3阻断组,每组10只。空白组经尾静脉注射等量生理盐水;其他两组尾静脉注射10 mg/kg刀豆蛋白A建立自身免疫性肝炎小鼠模型,造模成功后模型+Tim-3阻断组每天1次腹腔内注射液0.1 mg/ml Tim-3,注射7 d。HE染色观察小鼠肝组织病理改变;全自动生化分析仪检测血清AST、ALT;酶联免疫吸附法检测IL-22、TNF-α水平;流式细胞分析肝组织CD8^(+)T比例;实时荧光定量PCR检测肝组织Tim-3、IL-22、TNF-α、STAT3 mRNA相对表达;免疫印迹试验检测肝组织Tim-3、IL-22、TNF-α、STAT3蛋白相对表达。结果空白组小鼠肝脏组织无变化;模型组肝脏组织大面积性肝炎;模型+Tim-3阻断组见显著淋巴细胞浸润与大量空泡。与空白组比较,模型组和模型+Tim-3阻断组ALT、AST、IL-22、TNF-α水平均升高(P<0.05);与模型组相比,模型+Tim-3阻断组ALT、AST、IL-22、TNF-α水平升高(P<0.05)。与空白组比较,模型组和模型+Tim-3阻断组CD8^(+)T细胞比例表达均升高(P<0.05);与模型组相比,模型+Tim-3阻断组CD8^(+)T细胞比例下降(P<0.05)。与空白组比较,模型组和模型+Tim-3阻断组Tim-3、IL-22、TNFα、STAT3 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05);与模型组相比,模型+Tim-3阻断组Tim-3 mRNA及蛋白表达下降,IL-22、TNF-α、STAT3 mRNA及蛋白相对表达升高(P<0.05)。结论阻断Tim-3可下调CD8^(+)T细胞,促进TNF-α/IL-22/STAT3炎症信号表达,加重自身免疫性肝炎小鼠肝损伤。

转番茄Tm-2^2基因烟草T2代植株的生物学性状变异

Tm-22基因转化烟草并获得表达,表明Tm-22基因的功能在同科不同属的植物体上没有改变.但是转基因烟草的T2代出现了许多生物学性状的变异,例如,无花粉花药、花瓣呈浅色、植株体矮化、种苗黄化等,这种变异性状的产生不仅有外源基因重组的因素,也是该基因与其它基因相互作用的结果.这些变异的个体为研究该基因的功能及其遗传变异规律提供了丰富的材料.

^(99m)Tc-MDP放射性骨显像观察重组人骨形成蛋白-2与珊瑚人工骨修复牙槽骨缺损

目的 探讨应用99mTc -MDP放射性骨显像观察重组人骨形成蛋白 - 2与珊瑚人工骨在牙槽骨缺损修复中成活和成骨效果的价值。方法 拔除 1 2只成年狗两侧上颌第 2及第 3切牙 ,并去除牙槽窝之间的牙槽间隔 ,一侧随即植入复合骨 ,对侧植入珊瑚人工骨 (珊瑚骨 )作为对照。并于植入后 4 ,8,1 2周取材 ,采用组织学观察、图像分析和99mTc -MDP核素骨显像等方法比较两种植入材料在牙槽窝中的骨修复能力。结果 复合骨植入牙槽骨后 ,材料被逐渐降解吸收 ,新骨不断生成 ,1 2周后 ,植入材料完全被成熟的骨组织取代 ;图像分析结果显示不同时间复合骨组新骨形成的比值显著高于珊瑚骨组 (P <0 0 5) ;4和 8周复合骨组核素浓聚程度高于珊瑚骨组 ,1 2周两组核素浓聚程度差异不明显。结论 99mTc -MDP放射性骨显像能早期判断移植骨的成活情况及成骨效果。

^(60)Coγ线全身照射对大鼠组织内α_2-巨球蛋白含量的影响

用放射免疫分析法观察电离辐射对大鼠组织内α2-巨球蛋白(α2M)含量的影响。一组大鼠8313.5Gy ^(60)Goγ线全身照射,在照后一周内观察各组织中α2M含量变化。结果表明:电离辐钳后,尤其是照后第7天,组织内α2M含量显著上升,肝脏、骨髓、肾脏、皮肤、腮腺和脾脏内α2M含量分别为对照组的25.67、25.11、14.79、11.22、11.22和6.46倍。另一组大鼠7.0Gy^(60)C0γ线全身照射,在照后四周内观察α2M在皮肤中变化情况。结果表明:皮肤内α2M含量在照后第1天即见上升,至第7天达高峰,以后逐渐下降,至第21天接近正常水平,但至第28天又见上升。比较两组实验结果,可发现随着照射剂量的增加,皮肤内α2M含量变化加大。

Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白在L6骨骼肌细胞调节性体积增加中的作用(英文)

在许多类型的哺乳动物细胞中,细胞体积对介导胰岛素发挥其生理功能起关键作用.细胞体积调节机制在胰岛素的主要靶组织骨骼肌中尤为重要.为了解该组织中细胞体积调节的机制,对Na+K+2Cl-共转运蛋白在大鼠L6骨骼肌细胞中的表达及其在调节性体积增加中的作用进行了研究.应用免疫印迹法,在L6肌管细胞中检测到分子量为170kD的钠钾氯共转运蛋白.K+(86Rb+)输入实验结果表明,54%的86Rb+是通过钠钾氯共转运蛋白输入细胞的,而其余86Rb+的输入是通过钠钾三磷酸腺苷酶和其他未知转运蛋白实现的.当L6细胞被置于高渗透压溶液(420mosmolL)中,导致细胞体积减少40%,同时钠钾氯共转运蛋白的活性迅速增加(高达2倍).细胞体积在60min内恢复至正常,但在钠钾氯共转运蛋白抑制剂bumetanide存在时,这种调节性体积增加的过程被阻断.这些结果表明,L6肌管细胞表达具有生理活性的钠钾氯共转运蛋白;此转运蛋白被高渗透压诱导造成的细胞体积缩小激活的现象表明,它是细胞调节性体积增加(RVI)机制中的关键元素,在L6骨骼肌细胞体积的调节中起重要作用.

Nafion膜固定血红蛋白和银纳米粒子构筑NO_(2)^(-)生物传感器

利用Nafion膜将血红蛋白(Hb)和银纳米粒子(AgNPs)固载到玻碳电极表面制作N O-2生物传感器.循环伏安实验表明:Hb/AgNPs/Nafion膜电极在pH值为6.9的PBS缓冲溶液中呈现出一对明显的HbFe(Ⅲ)/(Ⅱ)氧化还原峰,该电极对N O2-有良好的催化作用,线性范围为2.0×10-5~3.4×10-4 mol/L(n=18,R=0.997),检测限为1.2×1 0-6 mol/L(信噪比为3);故该膜电极可做N O-2生物传感器.

β-制动蛋白2在炎性痛小鼠脊髓背角的表达及作用

目的:通过建立不同类型的炎性痛模型,观察β-制动蛋白2(Arrb2)在炎性痛小鼠疼痛发展过程中的作用。方法:在WT小鼠和Arrb2^(-/-)小鼠建立由卡拉胶(carrageenan)诱导急性炎性痛模型和弗氏完全佐剂(CFA)诱导慢性炎性痛模型,通过von Frey纤维丝法测定不同时间点的机械缩足反应阈值(PWT);利用Western Blot技术观察Arrb2在急性痛和慢性痛中的表达;在脊髓背角采用鞘内给药的方式,通过von Frey纤维丝法检测小鼠给予μ受体选择性激动剂(DAMGO)后短期和长期的PWT。结果:与WT小鼠相比,Arrb2^(-/-)小鼠在急性痛状态下痛敏恢复程度较慢,而在慢性痛早期表现出显著的抑痛作用。Western Blot结果显示:在急性痛模型下,脊髓背角Arrb2蛋白表达无明显变化,而在慢性痛模型下,Arrb2蛋白表达下降。最后,鞘内注射DAMGO实验表明,在急性痛模型下,敲除Arrb2后鞘内注射DAMGO短期无显著作用,后期可诱发吗啡耐受样痛敏;在慢性痛状态下,敲除Arrb2后鞘内注射DAMGO则在短期和长期均表现出镇痛作用的显著增强。结论:Arrb2在不同类型的炎性痛中表达和作用均有所不同。

急性病毒感染条件下组蛋白甲基化转移酶EZH2对CD4^+T细胞mTOR信号通路的影响

目的探究在急性病毒感染条件下组蛋白甲基化转移酶EZH2对CD4^+T细胞mTOR信号通路的影响。方法运用淋巴细胞脑膜炎脉络丛病毒Armstrong病毒株对EZH2条件性诱导敲除小鼠进行感染,建立急性病毒感染模型。在不同时间点给与他莫昔芬处理,诱导EZH2敲除,然后采用流式细胞术检测小鼠脾脏CD4^+T细胞的频率和数量,以及mTOR通路和相关代谢指标的表达情况。结果 1)感染第8天,EZH2敲除组的CD44^+CD4^+T细胞的频率和数量与对照组相比都显著下降,mTORC1信号通路下游靶标S6,4E-BP1的磷酸化水平以及CD71,CD98的表达量显著下降,而mTORC2信号通路下游靶标Akt,FoxO1/3a的磷酸化水平显著升高。2)感染后第4～7天给予他莫昔芬处理诱导EZH2敲除,第8天检测他莫昔芬处理组CD44^+CD4^+T细胞的数量下降,但下降程度降低。S6及Akt磷酸化水平无统计学差异,p4E-BP1和CD71、CD98表达量降低,而pFoxO1/3a表达量上升。3)在感染后期第9～12天进行他莫昔芬处理的小鼠与对照组相比,其CD44^+CD4^+T细胞的数量和频率,以及mTORC1、mTORC2相关指标的表达量均没有统计学差异。结论在急性病毒感染条件下甲基化转移酶EZH2对CD4^+T细胞的免疫应答至关重要,同时对CD4^+T细胞的mTOR信号通路具有调控作用,并且这样的调控作用主要发生在感染早期。

乳腺癌中CDC25A和P57^(kip2)蛋白表达与病理分级及临床分期的关系

目的探讨CDC25A和P57^(kip2)蛋白在乳腺癌中的表达与病理分级、临床分期的关系,并对CDC25A和P57^(kip2)之间的相关性进行研究。方法选择免疫印迹方法对64例乳腺癌患者进行检测,对CDC25A和P57^(kip2)蛋白在乳腺癌中的表达、病理特征以及临床分期三者之间的联系进行确切的研究探讨。结果乳腺癌以及癌细胞周围的正常细胞中都能够找CDC25A蛋白的表达,但在乳腺癌中则表现为高密度表达(P<0.05);肿瘤的分化程度越低,CDC25A蛋白的表达逐渐提升(P<0.05)。CDC25A蛋白表达在临床Ⅰ期、Ⅱ期,是否伴有淋巴结转移间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。P57^(kip2)蛋白在乳腺癌中呈低水平表达,在癌旁正常腺体中均呈高表达(P<0.05),但在伴和不伴淋巴结转移中差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CDC25A的过度表达和P57^(kip2)的低表达可能在乳腺癌的发生中起作用;乳腺癌发生机制中有涉及细胞周期调节环路中的CDC25A、P57^(kip2)基因的异常;CDC25A及P57^(kip2)可能成为乳腺癌的诊断标记,预后判断。

可溶性丙型肝炎病毒E2糖蛋白抑制人活化CD4^+T细胞的促炎细胞因子分泌

目的探索可溶性丙型肝炎病毒(HCV)E2糖蛋白对人活化CD4^+T细胞的免疫调节作用。方法真核表达质粒pcDNA3.1-HCV sE2转染HEK293T细胞,细胞培养上清经Ni-NTA树酯亲和层析纯化可溶性HCV E2蛋白。应用流式细胞术分选健康捐献者外周血CD4^+T细胞,经1.0μg/mL小鼠抗人CD3单克隆抗体、1.0μg/mL小鼠抗人CD28单克隆抗体刺激培养48 h。刺激后的CD4^+T细胞分成空白对照组、(2、5、10)μg/mL HCV E2蛋白组,后者经HCV E2糖蛋白处理。培养36 h后,流式细胞术检测CD4^+T细胞程序性死亡蛋白1(PD-1)的表达变化,ELISA检测细胞培养上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的水平。结果与空白对照组比较,HCV E2蛋白组CD4^+T细胞PD-1表达轻微降低,但差异无统计学意义。与空白对照组比较,可溶性E2蛋白组CD4+T细胞分泌TNF-α水平明显降低,并呈剂量依赖性;可溶性E2蛋白组CD4^+T细胞分泌IFN-γ水平明显降低,但高低剂量组无明显差异。结论可溶性HCV E2蛋白抑制人活化CD4^+T细胞促炎细胞因子的分泌。

CD4^(+)/CD8^(+)在2型糖尿病合并蛋白尿患者外周血中的变化及临床意义

目的探讨外周血CD4^(+)/CD8^(+)在2型糖尿病合并蛋白尿(albuminuria,AU)发生过程中的变化及临床意义。方法收集2020年3月~2021年6月于徐州医科大学附属医院内分泌科住院的2型糖尿病患者595例,根据尿微量白蛋白/肌酐比值(urinary albumin to creatinine ratio,UACR)分为非AU组(n=329)和AU组(n=266),另选取同期体检的健康人群作对照组(NC组,n=154),收集研究对象的一般资料及实验室指标,探讨CD4^(+)/CD8^(+)与2型糖尿病合并AU的关系。结果与NC组、非AU组比较,AU组的CD4^(+)/CD8^(+)显著降低(P<0.05)。2型糖尿病合并蛋白尿患者UACR与CD4^(+)/CD8^(+)呈显著负相关(P<0.001)。Logistic回归分析显示,糖尿病病程、收缩压、肌酐、超敏C反应蛋白水平升高、CD4^(+)/CD8^(+)降低可能是2型糖尿病合并AU的危险因素(OR=0.519,95%CI:0.359~0.750,P<0.001)。结论2型糖尿病合并AU患者外周血CD4^(+)/CD8^(+)降低可能在蛋白尿的发生、发展中起重要作用。

深绿木霉蛋白质TraT2A诱导兰州百合抗灰霉病的作用

采用生长速率法和活体试验法分别测定了深绿木霉Trichoderma atroviride蛋白质Tra T2A对兰州百合灰霉菌的抑制作用和诱导抗病效果及持效期。结果表明TraT2A高浓度(5×液)具有较高的抑制作用,抑制率为47.44%,低浓度(100×液)具有较高的诱导抗病作用,其诱导效果可达55.89%;TraT2A 100×液处理兰州百合植株3 d后挑战接种灰霉菌,分别于0、1、3和5 d对兰州百合叶片中的PAL、PPO、POD和SOD酶活性及丙二醛、叶绿素含量变化进行了测定。发现TraT2A诱导处理后可提高百合叶片中与抗病性相关的防御酶PAL、PPO、POD、SOD活性和叶绿素含量,降低丙二醛的含量;在接种后1、3和5 d时,4种酶活性和叶绿素含量显著高于对照,丙二醛含量则低于对照,4种酶活性在第5 d时均达到最大值,PAL、PPO、POD和SOD分别是对照的1.47、2.28、1.36和1.49倍;在接种后1、3和5 d时,叶绿素含量分别比对照高10.13、12.05和6.05 mg/g;丙二醛含量仅为对照的0.68、0.40和0.51倍;TraT2A防治百合灰霉病的持效期为7 d,高于阿泰灵和速克灵的持效期。

^(99m)Tc-DTPA肾动态显像联合尿β_2-MG测定评估妇科肿瘤患者化疗肾功能损伤的应用价值

目的探讨应用99mTc-亚锡喷替酸(99mTc-DTPA)肾动态显像测定肾小球滤过率(GFR)、高峰时间(Tb)和半排时间(C1/2)联合尿β2-微球蛋白(β2-MG)含量测定,评估其在妇科肿瘤顺铂(DDP)化疗时肾功能早期损伤的诊断价值。方法用自身对照法对98例妇科肿瘤患者在首次化疗前与化疗2周期后行99mTc-DTPA肾动态显像,测定GFR、Tb、C1/2,同期测定血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)以及血、尿β2-MG含量。应用配对t检验对比观察。结果 98例患者化疗2周期后较化疗前GFR明显下降(P<0.05),而Tb、C1/2显著延长(P<0.01);尿β2-MG含量明显升高(P<0.01),而血中BUN、SCr、β2-MG变化均不明显。结论与测定血BUN、SCr、β2-MG含量比较,99mTc-DTPA肾动态显像测定GFR、Tb、C1/2及尿β2-MG含量,能发现含DDP化疗患者肾功能早期的损伤,对于临床合理用药、观察和保护肾功能有一定的参考价值。