小鼠肝癌肿瘤浸润性淋巴细胞抗瘤活性的研究

作者对小鼠肝癌肿瘤浸润性淋巴细胞(Tumor-infiltrating lymphocyte,TIL)的抗瘤活性进行了初步研究。结果表明,新鲜分离的TIL对自身肝癌细胞的杀伤效应很低,经与IL-2共育后显著提高。培养10～30天达高峰,以后开始下降,灭活自身肿瘤细胞的再刺激,可对抗这种下降趋势。TIL对自身肝癌细胞的杀伤后性明显强于LAK细胞(P<0.01),并且表现为较强的肿瘤特异性,即对自身肿瘤细胞的杀伤明显强于对其它肿瘤的杀伤。将TIL与肿瘤细胞混合(10:1)注入小鼠皮下,肿瘤细胞的生长受到明显抑制。上述结果提示,TIL可望成为肿瘤过继免疫治疗中较LAK细胞更有效的活性细胞。

具抗瘤活性的创新霉素新衍生物研究

本文报道了由1-对甲苯磺酰基4-氨基吲哚出发制得了五个创新霉素类化合物,精原细胞法实验表明,1-对甲苯磺酰基-3-三氟甲基创新霉素具有抗瘤活性。

rIL-2激活的骨髓细胞抗瘤活性——白血病自体骨髓移植净化

用rIL-2激活未分离的骨髓外胞(bone marrow cell,BMC)观察其抗瘤活性和造血功能。经rIL-2激活24h后的未分离BMC即表现对NK细胞敏感的K562和NK细胞不敏感的Raji细胞均有杀伤活性;在一定时间内,随激活时间延长抗瘤活性增强,在第4天达高峰。rIL-2激活的未分离BMC与分离BMC二者抗瘤活性无差异。5例急性非淋巴细胞白血病病人骨髓经rIL-2激活后,白血病祖细胞CFU-L生成能力下降;经rIL-2激活的骨髓细胞生成CFU-GM能力无下降。根据我们的研究结果提出,rIL-2激活未分离BMC可用于白血病ABMT中残留白血病细胞净化,其方法简便、实用。

人TNFα基因转染的人肝癌细胞稳定高表达克隆SMMC7721-TNF体外抗瘤活性及其可能机制的初步研究

应用逆转录病毒载体介导人TNFα基因感染人肝癌细胞株SMMC7721，经G418筛选获得一稳定高表达SMMC7721-TNF，观察SMMC7721-TNF细胞及其培养液上清对SMMC7721和BEL7404肝癌细胞的抗瘤效应，结果表明SMMC7721-TNFα细胞本身对两种细胞均无明显的杀伤作用，但其培养液上清对这两种细胞均具有明显的抑制作用，

两种巨噬细胞系中PKC亚型表达的差别与其抗瘤活性的比较:依赖一氧化氮的杀瘤机制(英文)

目的 探讨LPS诱导的巨噬细胞杀瘤效应以及与PKC相关的分子机制。方法 两种巨噬细胞系P388D1和RAW264．7用LPS刺激、或先用PMA长期处理下调PKC表达、或用L-NAME阻断iNOS后再以LPS刺激，检测其杀伤肿瘤细胞系P815(MTT法)及分泌IL-1，TNF-α(ELISA法)和NO(Griess试剂)的作用；并用Western blot法检测PMA长期作用后两株细胞系中PKC亚型的表达。结果 LPS刺激的RAW264．7细胞有杀伤靶细胞的功能，而P388D1几乎没有杀伤作用。PMA预处理(1μg／mL，24 h)后可明显抑制LPS诱导的杀瘤作用。因上述结果提示PKC在巨噬细胞杀瘤活性中可能的重要作用，比较了PMA处理后两株细胞PKC亚型的表达：Western blot结果显示，在所检测的PKCα，β1，β2，δ及ε5种亚型中，在P388D1细胞均有表达，而在RAW264．7细胞仅有PKCα，PKCβ1，PKCδ表达；1μg/mL PMA作用24h后明显下调了RAW264．7细胞PKCα，PKCβ1和PKCδ的表达，在P388D1则有PKCα、PKCδ和PKCε下调，而PKCβ1和PKCβ2不被下调。结合LPS诱导的与PKC活化有关的IL-1、TNF-α及NO的产生，发现在P388D1细胞几乎不产生NO，而在RAW264．7细胞，NO合成酶抑制剂L-NAME不仅能阻断LPS诱导的NO的产生，而且明显抑制LPS诱导的杀瘤活性。结论

多发性骨髓瘤患者树突状细胞介导的特异性抗瘤活性的体外诱导

目的 :观察U2 6 6 细胞及其可溶性抗原激发的多发性骨髓瘤 (MM)患者树突状细胞 (DC)体外诱导U2 6 6 特异性CTL的作用。方法 :将MM患者外周血来源的单核细胞在rhGM CSF 80 0U ml与IFNα 6 0 0U ml条件下利用无血清技术培养生成DC ,应用丝裂霉素C处理的U2 6 6 细胞及用U2 6 6 细胞制备的可溶性抗原预刺激DC ,然后与自体淋巴细胞共同孵育 5～ 7d以诱生特异性CTL ,采用MTT法检测对U2 6 6 细胞的特异性杀伤效果。结果 :MM患者外周血单核细胞在GM CSF IFNα条件下培养 8d后生成具有典型特征的DC ,高度表达CD86、CD5 4及MHCII类分子HLA DR。应用MTT法检测U2 6 6 细胞及其可溶性抗原激发的DC诱导特异性CTL对靶细胞U2 6 6 的杀伤率分别为 2 1 2 %± 5 4 %和 2 8 0 %± 7 6 % ,对照组未用抗原刺激组都为 11 7%±4 3%。而以抗原直接刺激自体淋巴细胞组为 15 6 %± 4 8%和 13 1%± 5 5 % (P <0 0 1)。结论 :U2 6 6 细胞及其可溶性抗原激发的DC与自体淋巴细胞孵育能诱导抗U2 6 6 特异性CTL。

河豚肝脏提取物多肽A的抗瘤活性实验

目的 :了解河豚肝脏提取物多肽A、B、C的抗瘤活性。方法 :体外细胞毒试验是用噻唑蓝 (MTT)法。体内抗瘤试验是用小鼠肿瘤模型S 180肉瘤。结果 :多肽A在 12 5～ 10 0 0mg·L-1浓度下 ,对人鼻咽癌细胞 (CNE2 )、人肝癌细胞 (Bel 74 0 2 )、人肺腺癌细胞 (GLC 82 )和人白血病细胞 (K 5 6 2 )的半数抑制浓度分别为 341.5 5、6 0 7.96、5 2 0 .82mg·L-1和 833.13mg·L-1;而对人胚肾上皮细胞 (HK 2 93)、人脐血管内皮细胞 (EVC 4 0 3)和人体肝细胞 (ChangLiver)的IC50 分别为 6 2 6 .2 2、5 74 13、4 93.4mg·L-1。而多肽B、C对上述细胞的生长均无作用。体内抗瘤试验表明 ,多肽A用 6 0～ 180mg·(kg·d) -1,ipqd× 10d ,对小鼠肿瘤S 180肉瘤的抑制率为 4 2 .0 %～ 4 5 .2 % ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :河豚肝脏提取物多肽A在体内、体外试验有一定的抗瘤活性 ,但其抗瘤作用与剂量无相关性 。

香菇多糖与IL-2合用对肺癌浸润淋巴细胞抗瘤活性的影响

目的 探讨香菇多糖与 IL- 2合用对肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)抗瘤活性的影响。方法 将 TIL 分别置于含IL- 2或 IL- 2加香菇多糖培养液中培养 30 d,观察 TIL的扩增能力、抗瘤活性的变化。结果 IL- 2加香菇多糖培养的 TIL平均扩增倍数和抗瘤活性均明显高于 IL- 2培养的 TIL。IL- 2加香菇多糖培养的 TIL对自体瘤细胞 ,K5 6 2 和 Raji细胞的最大杀伤活性分别为 :6 7.18± 14.73% ,71.2 5± 15 .86 %和 6 6 .15± 15 .0 7% ;而单纯 IL- 2培养的 TIL 对各种靶细胞的最大杀伤活性分别为 43.81± 12 .17% ,5 0 .83± 13.5 6 %和 45 .41± 13.76 %。两组相比 ,差异显著 (P<0 .0 5 )。结论 香菇多糖与 IL- 2合用具有促进 TIL 扩增 。

人骨肉瘤浸润淋巴细胞和引流淋巴结细胞体外抗瘤活性

从１２例骨肉瘤患者手术切除的实体瘤中分离肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），从患者引流淋巴结中分离淋巴细胞（ＬＮＬ），以ｒＩｌ—２激活培养，并以４小时５１Ｃｒ释放试验测定ＴＩＬ和ＬＮＬ体外抗瘤活性。结果表明：１２例骨肉瘤患者的ＴＩＬ培养１５～２５天，对Ｋ５６２和ＬｉＢｒ靶细胞（效靶比２５∶１）平均杀伤活性分别为５９．７±１２．６％和４４．２±１０．２％，激活的ＬＮＬ对Ｋ５６２和ＬｉＢｒ细胞的杀伤活性分别为５５．２±１１．６％和４０．８±９．１％，二者对Ｋ５６２和ＬｉＢｒ细胞杀伤活性相差不显著（Ｐ＞０．０５）。其中６例患者ＴＩＬ和ＬＮＬ对自身肿瘤细胞杀伤活性分别为３８．８±９．５％和３５．５±７．６％，二者相差不显著（Ｐ＞０．０５）。

肺鳞癌TIL的体外扩增、抗瘤活性及表型分析

本文对8例人原发性肺鳞癌的TIL进行分离培养并检测了TIL的抗瘤活性及细胞表型。结果表明8例TIL的平均扩增倍数为430；TIL在10．30天之间显示出高水平的非特异性杀伤活性，10-20天时对A1及Daudi的杀伤百分率分别为79．2％和43．4％，20．30天时分别为51．7%和27．9%。非特异杀伤活性在30天以后降至较低水平。

肝癌癌周组织淋巴细胞和TIL的分布及抗瘤活性的研究

目的 :研究肝癌癌周组织淋巴细胞和肝癌TIL的分布及抗瘤活性。方法 :用冷胶原酶消化分离法来分离肝癌癌周组织淋巴细胞及肝癌实质部和中心部TIL并测定它们的获得率。用3H -TdR释放法测定它们对自体肝癌细胞的杀伤活性。结果 :肝癌实质部TIL获得率最高 ,肝癌癌周组织淋巴细胞获得率次之 ,肝癌中心部TIL获得率最低。它们对自体肝癌细胞的杀伤活性从高到低则分别为肝癌实质部TIL、肝癌中心部TIL和肝癌癌周组织淋巴细胞。结论 :肝癌癌周组织和肝癌组织不同部位的淋巴细胞分布有所不同。它们的抗瘤活性也各不相同。为了获得数量多和抗瘤活性高的淋巴细胞 。

胸腺素增强白细胞介素Ⅱ介导的活化淋巴细胞抗瘤活性研究

本文作者研究了胸腺素(Thymosin,TH)对重组白细胞介素Ⅱ(rIL_2)诱生活化杀伤细胞(Lymphokine Activated Killer cells,LAK)的影响。试验采用正常人及肝癌患者的外周血淋巴细胞(Peripheral Blood Lymphocyte,PBL)为效应前体细胞,以新鲜人体肝癌细胞为靶细胞,并与K_(562)红白血病细胞株做了比较。结果显示:经低剂量rIL_2(300U/ml)与TH联合活化的效应细胞,其杀肿瘤细胞活性明显高于等剂量rIL_2单用组(方差分析P<0.05),而与大剂量rIL_2(1000U/ml)单用组效应相近;胸腺素与rIL_2联合应用的增效强度不受植物血凝素(phasin,PHA)的影响,且在肝癌患者和正常人PBL之间及以新鲜人体肝癌细胞或K_(562)细胞株为靶细胞之间的差异无显著性意义。这提示TH可增强rIL_2介导的LAK活性,且此增效作用具有广谱性和可重复性。

去甲斑蝥素对CIK细胞体外扩增及抗瘤活性的影响

目的 探讨去甲斑蝥素（norcanlharidin，NCTD）对细胞因子诱导的杀伤细胞（cylokine—indueedkillercells，CIK）增殖及CIK细胞杀伤活性的影响。方法采用Ficoll密度梯度法提取脐血单个核细胞，定向诱导成CIK细胞，实验分为加入终浓度为30ixmoL／LNCTD的NCTD—CIK组和不加NCTD的对照CIK组。通过细胞计数法、流式细胞术及MTT法观察CIK细胞的增殖、免疫表型及细胞毒活性的变化。结果NCTD—CIK组细胞增殖率和抗瘤活性均明显高于对照CIK组，差异均有统计学意义（P〈0．05），结论NCTD促进CIK细胞扩增，增强其抗瘤活性，为CIK细胞的过继性免疫治疗提供了一种新的方法。

冷冻复苏后肺癌肿瘤浸润淋巴细胞抗瘤活性的观察

目的 观察液氮冷冻法对肺癌 TIL的扩增能力、细胞表型及抗瘤活性的影响。方法 将 TIL液氮冻存 ,然后复苏。结果 冷冻复苏后肺癌 TIL的扩增能力、抗瘤活性及细胞表型与冷冻前比较无显著改变 (P>0 .0 5)。结论 液氮冷冻法保存 TIL不会影响其免疫学特征 ,仍保持对肿瘤细胞较高的杀伤活性。

羟喜树碱对人肾上腺皮质癌裸鼠移植瘤的抗瘤活性研究

目的观察羟喜树碱对人肾上腺皮质癌SW-13细胞裸鼠移植瘤的作用。方法裸鼠腋窝皮下接种人肾上腺皮质癌SW-13细胞,造模成功后随机分为对照组、干预A组和干预B组,每组8只,分别给予腹腔注射生理盐水、0.30 mg/ml羟喜树碱溶液和0.45 mg/ml羟喜树碱溶液,注射体积均为10 ml/kg,1次/d,每周连用5 d停2 d,总疗程2周。测量并绘制移植瘤生长曲线和无事件生存曲线,计算各干预组最佳相对肿瘤增长率(%T/C)、无事件生存期(EFS)T/C值。结果各干预组移植瘤生长曲线均较对照组平缓且出现生长延迟。对照组中位无事件生存期为5 d,干预A组为8 d,B组为17 d。两个干预组的最佳%T/C均<40%,羟喜树碱干预有效。干预A组的EFS T/C值为1.75,该浓度羟喜树碱具有低度抗瘤活性;干预B组的EFS T/C值为3.25,而移植瘤体积无净减小,具有中度抗瘤活性。结论羟喜树碱对人肾上腺皮质癌SW-13细胞裸鼠移植瘤具有一定抗瘤活性,可抑制瘤体生长,其浓度对抗瘤活性的影响有待进一步研究。

肝癌肿瘤浸润淋巴细胞抗瘤活性及表型特征

目的 探讨肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的抗瘤活性及表型特征。方法 13例肝癌患者 (7例接受术前TACE,6例未接受 ) ,MTT法检测 TIL细胞抗肿瘤活性 ,APAAP法检测 TIL细胞表型。结果 TACE组 TIL细胞在第 2周增殖达到高峰 ,至第 3周平均扩增 5 2倍 ,而未接受术前化疗组在第 3周扩增达到高峰 ,平均扩增了 12倍。术前介入化疗患者 TIL细胞肿瘤杀伤活性增强 ,CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 不同程度的增加。结论 术前介入化疗可缩短肝癌患者 TIL细胞增殖时间 。

链球菌制剂SM诱导人外周血淋巴细胞抗瘤活性的研究

目的 探讨链球菌制剂SM对人外周血淋巴细胞 (PBL)的增殖效应及抗瘤活性。方法 将不同浓度的链球菌制剂SM( 0 .5KE/ml～ 0 .0 15KE/ml)与正常人PBL共同孵育 2 0小时 ,以MTT法检测经诱导后的人PBL的增殖效应及对K562 细胞的杀伤活性 ,并采用生物活性检测法测定其上清中TNF α的含量。结果 PBL与不同浓度的链球菌制剂SM作用 2 0小时后 ,细胞都有不同程度的增殖 ,且对K562 细胞的杀伤活性随之增加 ,尤其浓度为 0 .12 5KE/ml时最为理想。其上清中亦能检测到较高水平的TNF α,在 0 .12 5KE/ml～ 0 .0 15KE/ml时与对照组相比 ,P值 <0 .0 1。结论 链球菌制剂SM能增强PBL的增殖效应及抗瘤活性 ,其作用与其药物的浓度有关。

腹水巨噬细胞分离及在抗瘤活性测定中的应用

目的:建立临床实用的巨噬细胞(MΦ)分离技术。方法:腹腔注入植物血球凝集素(PHA),收集肝癌患者腹水,并经离心沉淀、贴壁培养等处理。结果:纯度>85%,活细胞>99%;用 LPS 激活后 MΦ杀瘤细胞毒活性37.4%,对照组为0.8%(P<0.005)。结论:从腹水中分离 MΦ取材容易,操作简便,不需特殊设备,纯化效果好,可满足 MΦ体外培养及杀瘤活性测定等研究应用,具有较高的实用价值。