抗癌生物活性肽作用机制的研究进展

肿瘤已成为目前影响人类预期寿命和生存质量的重大疾病之一。目前关于肿瘤的治疗主要采用手术、放疗、化疗等方法,且已取得一定疗效,但不良反应严重、易产生耐药等问题会影响其临床应用效果。生物活性肽因具有特异性高、不良反应小、抗肿瘤作用明确等优势而成为有效抗肿瘤药物。生物活性肽的抗肿瘤作用主要通过促进细胞坏死和凋亡、靶向破坏异常信号通路、抑制肿瘤血管和淋巴管形成以及诱导免疫反应等机制实现。未来进一步深入研究生物活性肽的作用机制,可以为其临床转化提供帮助。

抗癌生物活性肽对人乳腺癌nm231细胞的增殖抑制作用

目的探讨抗癌生物活性肽(ACBP)对人乳腺癌nm231细胞的作用及其机制。方法nm231细胞经不同浓度(0.05、0.10、0.20、0.25μg/ml)ACBP作用72h,以噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性。以0.25μg/ml的ACBP分别作用于nm231细胞4、6、24、48、72h,行光镜和透射电镜(作用48h细胞)观察。应用DNA凝胶电泳和磷脂结合蛋白V(AnnexinV,AV)/碘化丙啶(PI)双标记染色流式细胞术等方法,观察0.25μg/ml的ACBP作用不同时间对nm231细胞凋亡发生及作用48h对细胞周期的影响。以上各项检测均设以RPMI1640培养液取代ACBP的对照组。结果浓度为0.1μg/ml的ACBP即对nm231细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率为10.3%,抑制作用具有浓度依赖性,ACBP浓度为0.25μg/ml时抑制率达35.1%。光镜观察显示,经0.25μg/ml的ACBP作用24h,细胞出现凋亡特征;作用48h,光镜及电镜下均可见大量的典型凋亡细胞。DNA凝胶电泳显示,经0.25μg/ml的ACBP作用24h的细胞出现DNA断裂;作用48h的细胞出现典型的梯形电泳图谱。流式细胞术分析显示,ACBP作用后AV(+)/PI(-)细胞和AV(+)/PI(+)细胞比例均随培养时间延长而增大;作用48h的nm231细胞G0/1期细胞比例高于对照组(P<0.01),而细胞增殖指数低于对照组(P<0.01)。结论ACBP可抑制nm231细胞的增殖,其机制与抑制nm231细胞的DNA合成和诱导细胞凋亡相关。

抗癌生物活性肽对实验性胃癌PCNA、caspase-8基因表达的影响

目的:探讨抗癌生物活性肽作用于荷胃癌裸鼠后,对其增殖及凋亡相关基因表达变化的影响。方法:将裸鼠接种胃癌MGC-803细胞后使之致瘤。实验随机分为3组,对照组11只,脾肽实验组12只,肝肽实验组11只;分别尾静脉注射生理盐水0.4mL、脾肽0.4mL(0.15mg/mL)、肝肽0.4mL(0.05mg/mL)。连续处理35d,停药4d后处死裸鼠,取肿瘤,以4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,4μm切片。应用免疫组化SABC法检测PCNA、caspase-8蛋白在实验组与对照组中的表达情况。结果:PCNA蛋白在对照组(NS组)肿瘤中阳性表达较强,在P组、G组裸鼠肿瘤中PCNA蛋白的表达均比对照组的表达弱,且有显著性差异(P<0.01);caspas-8蛋白在对照组(NS组)肿瘤中阳性表达较弱,P、G组裸鼠肿瘤中caspas-8蛋白的表达均比对照组表达强,且有显著性差异(P<0.01)。结论:抗癌生物活性肽能降低胃癌移植瘤细胞的增殖活性,并能促进其凋亡。

抗癌生物活性肽对人胃癌BGC-823细胞周期相关蛋白CDC2、CDK4表达的影响

目的:探讨抗癌生物活性肽对人胃癌细胞周期相关蛋白CDC2、CDK4的影响及其作用机制。方法:实验分为活性肽组及对照组,将不同浓度的抗癌生物活性肽按不同时间作用于培养的人胃癌细胞株(BGC-823),应用MTT法检测增殖抑制率。建立荷胃癌裸鼠模型,给予生理盐水作为阴性对照组,应用免疫组化技术对抗癌生物活性肽作用前后的胃癌裸鼠肿瘤中CDK4、CDC2的表达进行检测。结果:不同浓度的抗癌生物活性肽对胃癌细胞均有增殖抑制作用;抗癌活性肽S-2作用后人胃癌组织中的CDK4表达明显低于对照组(P<0.01),而CDC2表达高于对照组(P<0.01)。结论:抗癌生物活性肽具有抗胃癌细胞增殖作用,其抗肿瘤作用机制可能是通过下调CDK4和上调CDC2的表达实现。

抗癌生物活性肽对实验性裸鼠肿瘤组织中p53和Bcl-2表达的影响

目的探讨抗癌生物活性肽(ACBP)作用于荷胃癌裸鼠后对肿瘤中p53和Bcl-2蛋白表达的影响,探讨ACBP可能的作用机制。方法成功建立荷胃癌裸鼠模型后将鼠随机分为2组,各组10只。对照组给予生理盐水;实验组腹腔注射活性肽0.4 mL(50 mg/L)。连续处理35 d,停药4 d后处死裸鼠,取肿瘤,应用免疫组化链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法检测突变型p53蛋白及Bcl-2蛋白的表达情况。结果 p53和Bcl-2蛋白在对照组肿瘤中阳性表达较强,在活性肽组中的表达均比对照组的表达弱,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 ACBP对荷瘤裸鼠肿瘤生长有明显的抑制作用,可能是通过影响p53和Bcl-2的表达实现的。

抗癌生物活性肽对BGC-823细胞基因表达的影响

目的:利用基因芯片技术分析一种新型抗癌生物制剂-抗癌生物活性肽对人胃癌BGC-823细胞的基因表达谱调控的影响,并对部分差异表达基因进行RT-PCR检测,从而验证芯片的有效性。方法:订制表达谱芯片,分别将400条和648条人类基因的PCR产物点样于特殊处理后的玻璃片上制备基因表达谱芯片。以加入不同浓度抗癌生物活性肽及处理不同时间的BGC-823细胞为实验组,以生理盐水处理的BGC-823细胞作为对照组,当确定最佳作用时间及抗癌生物活性肽有效作用浓度后,分别提取实验组与对照组细胞的总RNA,反转录成cDNA,以两种荧光素Cy5和Cy3标记后作为探针,与制备好的表达谱芯片进行杂交,以生物信息学方法进行数据的处理和分析,并将其中的差异表达基因p15和HSP701B进行RT-PCR的验证。结果:两张芯片上差异表达的基因共47个,其中上调27个,下调20个。这些基因按照功能分类涉及细胞周期、代谢酶、免疫相关、细胞凋亡、抑癌基因等类别,包括HSP701B、HSP75、HSP90、磷脂酶D2(PLD2)、凋亡抑制基因(IEX-1L)、人类杆状病毒IAP重复序列3、E2泛素耦联酶Ubch5c、人类缺氧诱导因子1α亚基、γ-干扰素、TNF诱导因子、人类黑色素瘤抗原p15基因等。同时RT-pCR结果验证了芯片的检测的有效性。结论:抗癌生物活性肽具有调控人胃癌BGC-823细胞基因表达的作用,其中对抑癌基因、热休克蛋白家族基因等有较明显的影响;基因芯片可以为阐明抗癌药物的作用机制提供有力的分子基础。

抗癌生物活性肽对与肿瘤相关成纤维细胞共培养的食管癌细胞的增殖影响

该研究旨在探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖的影响及抗癌生物活性肽(ACBP)对增殖的干预作用和可能的作用机制。收集5例手术切除患者的食管癌组织,分离培养得到ESCC CAFs并进行特征指标鉴定;建立CAFs与ESCC细胞共培养体系,CFSE染色和流式细胞术检测细胞增殖;收集CAF-1的条件培养基,加入ACBP进行联合培养KYSE140细胞,IncuCyte检测细胞增殖;qRT-PCR和Western blot检测Hedgehog信号通路相关基因的表达水平。该研究成功分离CAFs,Western blot结果显示CAFs均表达波形蛋白(Vimentin)及纤维连接蛋白(Fibronectin),不表达E-钙黏蛋白(E-cadherin);相比于单独培养,与CAF-1共培养的KYSE140细胞的CFSE水平降低,细胞融合率增加(P<0.05),细胞中的GLI1和PTCH1的mRNA和蛋白水平升高(P<0.05);相比于条件培养基组,ACBP加入可以使KYSE140细胞的融合率下降(P<0.05);相较于单独培养,ACBP加入后KYSE140细胞的GLI1和PTCH1的mRNA和蛋白水平显著下降(P<0.05)。该研究表明,CAFs可以通过激活Hedgehog信号通路促进食管癌细胞增殖,ACBP可在与CAFs共培养条件下通过抑制Hedgehog信号通路抑制食管癌细胞的生长。