抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素融合蛋白在荷瘤裸鼠体内的预定位显像

目的 研究1 53Sm 生物素和抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素融合蛋白 (CEAScFv core streptavidin)在荷人结直肠癌裸鼠体内的两步法预定位显像和体内分布。方法 对 2 3只荷人结直肠癌裸鼠腹腔注射CEAScFv core streptavidin进行预定位 ,2 4h后腹腔注射1 53Sm 生物素 ,其中2 0只于 1、4、8和 2 4h进行体内分布研究 ,余 3只于 8和 2 4h进行定位显像。结果 在荷人结直肠癌裸鼠腹腔注射CEAScFv core streptavidin预定位后 2 4h ,注射1 53Sm 生物素后 1h ,肿瘤 血比值为 0 .4 9,4和 8h达 1.2 1和 1.5 6 ,2 4h达最高 ,为 3.0 9。裸鼠定位显像示 ,8h肿瘤部位放射性明显浓聚 ,2 4h本底明显降低 ,肿瘤呈放射性“热”区。结论 1 53Sm 生物素和CEAScFv core streptavidin预定位显像能提高靶 非靶比值 ,缩短显像时间 ,改善图像质量。

抗癌胚抗原单链抗体-PE40免疫毒素基因的克隆与表达

目的扩增抗癌胚抗原单链抗体(CEA-ScFv),与绿脓杆菌外毒素(PE40)进行重组及原核表达,旨在进一步研究重组蛋白CEA-ScFv-PFA0的靶向抗肿瘤作用。方法分别扩增抗癌胚抗原单链抗体的重链区、轻链区,用overlap PCR按照VH-VL的顺序连接,克隆至pMD18T载体中。再将VH-VL基因片段与含有.PE40的表达载体pET28a连接,转化B121(DE3),IPTG诱导表达。结果经DNA测序,其结果与设计完全相符。SDS-PAGE分析,在相对分子质量66000处可见明显表达带,表达量可占菌体蛋白总量的13％以上。免疫印迹表明重组蛋白具有PF40的抗原特异性。结论抗癌胚抗原单链抗体-PE40免疫毒素的成功克隆与表达,为进一步研究其生物活性奠定基础。

怎样看待血清癌胚抗原(CEA)的检验结果

癌胚抗原（CEA）是辅助诊断直、结肠癌的重要肿瘤标志。它于1965年被发现，是用人直肠癌组织抽提物经过给动物进行注射免疫取得了抗血清（抗癌胚抗原抗体），再经过与正常人直肠组织抽提液作用而去除了抗正常直肠组织的成分。于是此种抗血清只能与肿瘤组织的产物发生反应而不与正常组织发生反应，

抗癌胚抗原嵌合抗体在秋粘虫细胞中的重组与表达

经同源重组构建了同时含抗癌胚抗原（ＣＥＡ）嵌合抗体重、轻链基因的双重组病毒ＢａｃＣｈＨＬ２５。利用双重感染和双重组病毒感染秋粘虫（Ｓｆ９）细胞，免疫杂交结果显示嵌合抗体重、轻链同时在胞内得到了表达，并且两种情况均能在胞内组装成完整免疫球蛋白四聚体分子。ＲＩＡ和ＥＬＩＳＡ检测证明嵌合抗体与亲本鼠源单抗Ｅ７Ｂ１０具有相似的结合抗原ＣＥＡ的能力。

CEA微型抗体载体的构建及在大肠杆菌中的高效表达

目的制备适合放免显像的抗癌胚抗原微型抗体。 方法在已获得的抗癌胚抗原重链可变区 (VH)及轻链可变区 (VL)基因的基础上将重链可变区 (VH)与轻链可变区 (VL)基因直接连接制成微型抗体基因 ,并在大肠杆菌进行表达。 结果大肠杆菌高效表达了微型抗体C端 6×His的融合蛋白 ,表达量达菌体总蛋白的 15 % ,SDS -PAGE和Western印迹显示表达物分子量为 2 6kd与基因编码蛋白的理论推算值相符 ,RIA表明表达物与CEA特异性结合。

CEA串连表位-HSP70融合基因疫苗诱导小鼠的表位特异性免疫应答

目的:观察癌胚抗原(CEA)串联表位-HSP70融合基因疫苗诱导的免疫应答,为开发新型肿瘤特异性基因疫苗奠定基础。方法:在已经构建含有变异热休克蛋白(HSP)序列的基础上,插入重组CEA串联表位的编码片段获得CEA串联表位-HSP融合基因疫苗。3次肌肉注射免疫Balb/c小鼠,设立注射生理盐水的阴性对照组、注射氢氧化铝佐剂混悬CEA串联表位的阳性对照组及注射pCITriCEA625-667-mtHSP70的实验组。FCM分析脾脏T细胞亚群;体外培养脾细胞,ELISA检测培养上清中干扰素γ(IFNγ)的相对含量;同时测定小鼠血清CEA特异性抗体的滴度。结果:阴性对照组脾细胞中CD3+和CD4+T细胞分别为55.1%±6.1%和30.2%±4.1%;实验组脾细胞中CD3+和CD4+T细胞分别为78.7%±9.2%和48.9%±4.7%,两组比较差异有显著性(P<0.01)。其体外特异性抗原肽诱导的IFNγ分泌处于本底水平,可视为生理性参数,体外非特异性和特异性的IFNγ分泌分别增加3和6倍(P<0.01)。血清中CEA表位特异性抗体滴度阴性对照组为0,阳性对照组<1:500,而融合基因疫苗免疫组达到1:4000。结论:CEA串联表位-HSP融合基因疫苗在体内诱导以激发辅助性T细胞为特征的免疫应答。