PDK1抑制剂GSK2334470的抗真菌活性研究

侵袭性真菌感染严重威胁人类生命健康.白念珠菌是临床侵袭性真菌感染中较为常见的菌种之一.耐药性的产生和生物被膜的形成是其临床治疗失败的主要原因.因此,亟需开发抗耐药菌和生物被膜的新型药物.课题组通过药敏筛选实验发现化合物GSK2334470(J1)单用时对耐药白念珠菌表现一定的抑制活性(MIC值范围为32~>128μg/mL),且在较高浓度时(64~256μg/mL)能明显抑制生物被膜的形成及损伤成熟生物被膜.进一步,通过棋盘式微量液基稀释法、生长实验、存活实验、纸片扩散实验、生物被膜实验等证实J1与氟康唑合用后对耐药白念珠菌和热带念珠菌均表现较好的协同抗菌作用,它们能协同抑制耐药白念珠菌的生长以及生物被膜的形成.初步的机制研究发现J1能增加耐药白念珠菌的细胞壁厚度,并且还能抑制其药物的外排.因此,进一步对化合物J1深入研究,有望发现新型抗耐药真菌先导化合物或候选药物.

小菜蛾肠道成团泛菌PxG45的分离鉴定及其抗真菌活性

【目的】昆虫肠道共生细菌是栖息在昆虫肠道中的微生物,是肠道微生物群落中最主要的成员。它们对昆虫的生长发育、营养吸收以及免疫系统均具有重要影响。本研究通过对小菜蛾Plutella xylostella肠道共生细菌进行分离培养和功能鉴定,以探究肠道共生细菌对小菜蛾适应性的影响及其对真菌的广谱抑制作用。【方法】利用体外平板培养分离纯化小菜蛾3龄幼虫肠道细菌PxG45菌株,结合形态学、16S rDNA基因测序和生理生化测定进行菌种鉴定。利用生物测定探究PxG45对小菜蛾3龄幼虫存活率及球孢白僵菌Beauveria bassiana侵染小菜蛾3龄幼虫对存活率的影响。通过平板对峙法检测PxG45对球孢白僵菌的抑制作用,进一步检测PxG45对植物病原真菌希金斯炭疽菌Colletotrichum higginsianum、刺盘孢炭疽菌C.camelliae、尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种Fusarium oxysporum f.sp.cubense race 4、茄链格孢菌Alternaria solani、稻瘟病菌Magnaporthe oryzae和丁香假单胞菌杨梅致病变种Pseudomonas syringae pv.myricae的广谱抗性。【结果】小菜蛾3龄幼虫肠道菌PxG45为成团泛菌Pantoea agglomerans。与未饲喂PxG45的对照组相比,饲喂PxG45不仅显著提高了健康小菜蛾3龄幼虫的存活率,还提高了球孢白僵菌侵染后3龄幼虫的存活率。与PxG45拮抗培养的球孢白僵菌和6种植物病原真菌的菌落直径均显著小于单独培养球孢白僵菌和6种植物病原真菌时的直径,与PxG45拮抗培养后真菌的生长均被抑制。【结论】成团泛菌PxG45通过直接的抑菌作用影响小菜蛾对外界的适应性,且这种抑菌作用具备广谱性,可显著抑制植物病原真菌的生长。本研究表明PxG45具备生防菌潜力,并为利用害虫肠道共生菌提供新思路。

2-芳基-4-取代喹啉类化合物的抗真菌活性和作用机制研究

目的开发新型抗真菌药物以解决深部真菌感染发病率和死亡率高、抗真菌药物出现耐药性的临床问题。方法采用抗真菌药敏实验对内部化合物库进行活性筛选,进一步通过微量液基稀释法考察阳性化合物的抗真菌谱;通过生长实验、时间杀菌曲线实验评价阳性化合物对真菌存活的影响;通过倒置显微镜观察化合物对真菌菌丝形成的影响;采用流式细胞仪检测化合物对真菌细胞内活性氧(ROS)生成、生物膜通透性和凋亡的影响。结果2芳基4取代喹啉类化合物J6抗真菌活性最优,对白念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、新生隐球菌的最小抑菌浓度分别为18.9、18.9、37.8、37.8 mg/L。J6能明显抑制这4种真菌的生长,甚至对新生隐球菌表现杀菌作用。此外,J6还能抑制真菌菌丝的形成。作用机制研究显示,J6可增加真菌细胞膜通透性和细胞内ROS水平,诱导真菌细胞发生凋亡。结论2芳基4取代喹啉类化合物J6表现出较好的抗真菌活性,对其进一步结构优化和机制研究,有望发现新型的抗真菌药物。

北沙参茎叶和根中挥发油的提取与抗真菌活性研究

目的探究北沙参茎叶和根中挥发油的提取工艺,解析北沙参茎叶和根中挥发油所含化学成分,并初步评价其体外抗真菌活性。方法以水蒸气蒸馏法为基础,通过单因素与正交实验优化北沙参茎叶和根中挥发油提取方法,利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术鉴定北沙参茎叶和根中挥发油所含化学成分并计算其相对百分含量。采用纸片扩散法测定北沙参茎叶和根中挥发油对茄病镰刀菌、半裸镰刀菌、尖孢镰刀菌、寄生曲霉和黄曲霉的抗真菌活性。结果北沙参最佳提取工艺为料液比1∶15,蒸馏时间5 h,KCl浓度15%。从北沙参茎叶挥发油中鉴定出11种成分,根挥发油中共鉴定出8种成分。人参炔醇为北沙参茎叶挥发油和根挥发油的共有成分,其在茎叶中的含量为38.21%,根中的含量为74.02%。北沙参茎叶挥发油和根挥发油对茄病镰刀菌、半裸镰刀菌、尖孢镰刀菌、寄生曲霉和黄曲霉均有一定的抑制作用,以茎叶挥发油较强。结论北沙参茎叶挥发油和根挥发油的化学成分差异明显,但二者均具有一定的体外抗真菌活性。

海洋链霉菌MA12的次级代谢产物及抗真菌活性研究

对一株海洋放线菌Streptomyces sp.MA12进行次级代谢产物的研究和体外抗真菌活性测试,采用MCI中压柱色谱、硅胶柱色谱、SephadexLH-20凝胶柱色谱及半制备高效液相色谱(HPLC)等方法对发酵产物进行分离和纯化,综合运用质谱(MS)和核磁共振(NMR)等波谱学方法进行结构解析和鉴定。从放线菌Streptomyces sp.MA12发酵产物中分离鉴定出3种化合物,分别是trienomycin A(化合物1)、trienomycin B(化合物2)和ansatrienin B(化合物3)。抗菌活性测试发现,化合物3对3株白色念珠菌(标准敏感白色念珠菌SC5314,临床分离耐氟康唑白色念珠菌901,实验室基因编辑耐氟康唑白色念珠菌816)有明显抑制作用,MIC值分别为4、8、4μg·mL^(-1)。从该海洋放线菌中发现了安莎三烯类化合物,并首次报道了其对氟康唑耐药真菌的抑制活性,研究结果丰富了海洋微生物的次级代谢产物种类,可为新型抗真菌药物的研发提供科学参考。

含丙基侧链的新型三唑类化合物的设计、合成和抗真菌活性研究

目的研究具有正丙基侧链和二取代苯环结构的三唑醇类化合物的抗真菌活性。方法设计合成了11个目标化合物;其结构通过1H NMR确证,部分化合物还通过13C NMR、高分辨质谱(HRMS)确证;选择3种真菌为实验菌株,根据美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)推荐的标准化抗真菌敏感性实验方法,进行体外抑菌活性测试。结果化合物B11对白念珠菌SC5314的活性较氟康唑更好,与泊沙康唑相当;化合物B10、B11、B4对新型隐球菌H99的活性较氟康唑更好,化合物B2、B3、B5、B6、B7对新型隐球菌H99的活性与氟康唑相当;所有化合物对烟曲霉菌活性欠佳。结论部分引入正丙基侧链和二取代苯基结构的目标化合物有一定抗真菌活性,可作为潜在的先导抗真菌药物。

吡喃鎓衍生物N2的体外抗真菌活性研究

目的研究N2系列化合物的抗真菌作用。方法利用微量液基稀释法考察化合物N2系列化合物的体外抗真菌活性;在菌丝和被膜诱导条件下考察N2化合物对白念珠菌菌丝和被膜形成的抑制效果。结果N2化合物对临床常见条件致病真菌白念珠菌有明显抗真菌活性;N2化合物可以明显抑制白念珠菌菌丝生长和被膜的形成;N2化合物可以通过损伤白念珠菌细胞膜和细胞壁发挥杀菌作用。结论N2化合物具有较为广泛的抗真菌谱,能起到明显的体外抗真菌效果,对真菌菌丝和生物被膜的形成均有明显的抑制作用,可以认为N2化合物具有抗真菌潜力,可作为先导化合物,指导进一步改造。筛选获得了具有抗真菌活性的N2化合物,为抗真菌药物研发和解决真菌耐药问题提供新思路。

通过统计优化培养条件增强链霉菌S-159的抗真菌活性

目的:采用统计实验方法优化培养条件,以增加链霉菌S-159抗真菌活性成分的产量。方法:首先采用Plackett-Burman设计以评估11个培养条件(包括2个虚拟变量)的显著性,发现大豆粉添加量、葡萄糖添加量、发酵时间和初始pH值为影响抗真菌活性的最显著因素。接下来通过最速上升路径分析确定进一步优化的中心点,并使用响应面法(RSM)中的中心复合设计(CCD)进一步优化获得的4个显著因素。结果:实验结果符合二阶多项式模型,其确定系数(R^(2))为0.986,调整后的确定系数(Adj R^(2))为0.974。求解方程得到优化组合条件为大豆粉添加量23.53 g/L、葡萄糖添加量17.04 g/L、发酵时间60.20 h和初始pH值7.61,抗真菌活性实测值为410.5 U/mL,与该模型预测的413.6 U/mL基本一致,优化后链霉菌S-159代谢产物的抗真菌活性提高了1.7倍。结论:统计实验方法可用于链霉菌S-159的发酵培养条件优化,研究结果为链霉菌S-159的大范围应用提供了数据基础。

剑叶龙血树中芪类化合物及其抗真菌活性的研究

目的 对剑叶龙血树含脂木材进行化学成分和活性研究。方法 采用硅胶柱层析、制备 TL C进行分离 ,运用 U V、IR、MS、1 H,1 3CNMR等光谱法鉴定化合物的结构 ,并对分得的化合物进行抗真菌活性筛选试验。结果 得到 2个类化合物 :4′-羟基 - 3,5 -二甲氧基对苯乙烯 (4′- hydroxy- 3,5 - dimethoxystillben,紫檀 )和 4′,3,5 -三羟基对苯乙烯 (resveratrol,白藜芦醇 ) ,具有抗真菌活性。

黄酮和甾体类化合物的抗真菌活性

用琼脂扩散法对从药用植物中分离到的12个黄酮和5个甾体化合物进行了抗真菌活性实验,其中黄芩甙元(baicalein)、funkioside C和胡萝卜甙(daucosterol)对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和白色念珠菌(Candida albicans)的生长均有抑制作用,对尖孢镰刀菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为0.112、0.217和0.108g/L,对白色念珠菌的MIC分别为0.264、0.310和0.078g/L。对其构效关系进行了初步讨论。

银杏内生真菌抗真菌活性菌株的分离和筛选

从银杏(Ginkgo biloba L．)的根、茎、叶和果实中分离获得522株内生真菌,采用菌丝生长抑制法测定 了对7种植物病原真菌的抑制作用。结果表明302株具有抗菌活性,占总数的57．85％,其中12株抗菌效果非 常明显。银杏组织中存在丰富的内生菌,不同组织内生真菌的数量存在一定差异;对病原真菌具有活性的内 生真菌比例较高;对大多数供试病原菌都可以筛选到拮抗效果较好的菌株;银杏内生真菌可以产生丰富的具 有抑菌活性的次生代谢产物,可以作为对多种病原物具有抑菌活性物质筛选的资源。

仿刺参水溶性海参皂苷的分离制备及抗真菌活性的研究

利用海洋生物资源进行天然抗真菌新药的开发，从冻干海参加工废液中提取了水溶性海参皂苷，并对其抗真菌活性进行了研究。采用大孔吸附树脂法提取水溶性海参皂苷，经Libermann Burchard反应等对提取物的性质进行鉴定后，利用管碟法对所得提取物的抗菌活性进行了测定，并利用琼脂稀释法测定了所得水溶性海参皂苷对6株供试真菌的最低抑菌浓度（MIC）。提取物在Molish反应、沉淀反应和泡沫实验中均为阳性，说明提取物中确含有皂苷类成分；在Libermann Burchard反应中，液体的颜色处在红色与紫色之间，显示提取物可能是1种三萜类皂苷。水溶性海参皂苷对6株供试真菌均具有显著的抑制作用，且在浓度为0．5～4mg／mL的范围内，其抑菌活性与所用浓度之间呈明显的正相关性；在浓度为4mg／mL时，水溶性海参皂苷对6株供试真菌抑制活性的大小依次为裂殖酵母菌、啤酒酵母菌、白色念珠菌、葡萄炭疽病原菌、黄瓜枯萎病原菌和黑曲霉，海参皂苷对6株真菌的MIC值依次分别为0．002，0．016，0．063，0．063，0．125．0．250mg／mL。

麻疯树毒蛋白(curcin)的抗真菌活性研究

以植物病原真菌水稻稻瘟病菌(PyriculariaoryzaeCav.)、松赤枯病菌(Pestalotiafunerea)、玉米纹枯病菌(RhizoctoniasolaniKuha)、油菜菌核病菌[Sclerotiniasclerotiorum(Lib)deBary]为实验菌,检测了麻疯树毒蛋白(curcin)的抗真菌活性。结果表明,5μg/mLcurcin能明显抑制菌丝生长和孢子的产生。浓度提高到50μg/mL时,水稻稻瘟病菌基本不形成孢子,对松赤枯病菌的孢子形成抑制率达83.8%。光镜下可见处理菌丝明显缩小、变形。SDS-PAGE显示,处理菌丝的蛋白质条带减少。curcin对菌丝生长和孢子发育的阻碍作用可能与curcin阻碍了蛋白质合成有关。

山胡椒果挥发油的化学成分与抗真菌活性

本文采用GC-MS技术分析了山胡椒果水蒸气蒸馏和溶剂提取所得挥发油的化学成分。前者主要成分为正癸酸、大根香叶烯A、正十二烷酸、表水菖蒲乙酯和氧化丁香烯;后者主要成分为莰烯、3,6,6-三甲基-2-降蒎烯、癸酸乙酯、桉叶素和罗勒烯。体外抗真菌实验表明,前者对四种皮肤致病真菌(MIC值0.03～0.5ml/L)和五种污染霉菌(MIC值1.0～1.5ml/L)均具有明显的抑制活性,而后者活性较弱,这与其几乎不含倍半萜类或其含氧衍生物有关。

山苍子叶挥发油的化学成分与抗真菌活性

本文利用GC-MS联用技术确定了山苍子叶挥发油24种化学成分的结构与相对含量,其中α-罗勒烯(25.11％)、3,7-二甲基-1,6-辛二烯醇-3(16.85％)和橙花椒醇(13.89％)为主要组分。该挥发油具有很好的体外抗真菌活性,对供试皮肤致病菌的MIC为0.03～0.4μl/ml,对污染霉菌的MIC为1.0～2.0μl/ml。

农抗702抗真菌活性的测定

探索农抗702的抗真菌活性。通过以农抗702为供试材料,霉菌、酵母菌以及14种植物病原真菌为供试菌,采用菌丝生长速率法和菌丝干重法测定农抗702对各种供试菌的抑制作用。结果表明农抗702对黑曲霉、青霉、毛霉、根霉、木霉、啤酒酵母、产朊假丝酵母、稻纹枯病、稻瘟病和稻曲病的最低抑菌浓度(mg/L)分别为3.3、6.5、6.5、3.3、3.3、6.5、3.3、23.8、59.64、475.4。农抗702对供试植物病原真菌的EC50(mg/L)和EC90(mg/L)依次是:油菜菌核病菌为0.23和1.95,葡萄炭疽病菌为0.27和2.91,车前草穗枯病菌为0.33和8.58,烟草赤星病菌为0.89和12.02,车前草菌核病菌为1.23和4.02,小麦赤霉病菌为1.40和7.38,棉花黄萎病菌为1.53和5.07,富贵竹炭疽病菌为1.73和5.61,水稻纹枯病菌为1.89和7.03,紫荆炭疽病菌为3.21和14.17,辣椒根腐病菌为3.40和20.78,交链孢病菌为4.13和22.01,稻瘟病菌为12.51和29.36,稻曲病菌为59.42和201.80。研究表明农抗702具有较强的抗真菌活性,为农抗702的应用提供有益的试验证据。

新型三唑类化合物的合成及抗真菌活性

目的 寻找广谱、高效、低毒的新一代三唑类抗真菌药物。方法 根据靶酶活性位点的空间特征、各种力 场和关键残基分布,设计并合成了21个1 (1,2,4 三唑 1H 1 基) 2 (2,4 二氟苯基) 3 (4 取代 1 哌嗪基) 2 丙醇类 化合物,并测定了体外抑菌活性。结果 体外抑菌测试结果表明,所有化合物对8种致病真菌均有一定程度的抗真 菌活性,对深部真菌的活性明显优于浅部真菌。在哌嗪的各种取代基中,苯基和杂环取代的抗真菌活性明显优于苯 甲酰基取代。结论 有多个化合物的体外抗真菌活性明显高于氟康唑和特比萘芬,其中化合物VIII 1,4,5和IX 3 具有广谱、高活性的优点,值得进一步研究。

嗜铬粒蛋白N区抗真菌活性片段研究

为寻找高效低毒的抗真菌药物,利用PCR技术扩增了编码人嗜铬粒蛋白N端18-76、18-66和31-76位氨基酸(CGA18-76、CGA18-66和CGA31-76)的DNA片段,将之克隆进枯草杆菌诱导型表达载体pSBPTQ,获得3种重组质粒pSC18-76、pSC18-66和pSC31-76,转化枯草杆菌DB1342。SDS-PAGE分析结果显示:经蔗糖诱导后,CGA18-76、CGA18-66和CGA31-76片段分别在枯草杆菌工程菌中获得表达,产物分泌到细胞外。表达量分别为5.6 mg/L、5.3 mg/L和5.6 mg/L。利用孔穴琼脂扩散法检测表达产物的抗真菌活性,并与CGA1-76进行比较,发现CGA18-76、CGA18-66和CGA31-76对烟曲霉菌、黄曲霉菌、石膏样小孢子菌和白念珠菌均有抑制作用,并以CGA31-76对白念珠菌的抑制作用为最强,CGA18-66对除白念珠菌之外的另3种测试真菌的抑制作用较强,而CGA18-76对测试真菌的抑制作用最弱。

五种新疆植物的抗真菌活性(英文)

对采自新疆的黄花蒿 (Artemisiaannua)、北艾 (Artemisiavulgaris)、梭梭 (Haloxylonammodendron)、盐爪爪 (Kalidiumfoliatum)和多枝柽柳 (Tamarixramosissima)抗植物病原真菌的活性进行了研究 ,植物病原真菌包括番茄灰霉病菌 (Botrytiscinerea)、棉花枯萎病菌 (Fusariumoxysporumf .sp .vasinfectum)、稻瘟病菌(Magnaporthegrisea)、烟草黑胫病菌 (Phytophthoraparasiticavar .nicotianae)和瓜果腐霉 (Pythiumaphani dermatum) ,其中黄花蒿对真菌菌丝生长、多枝柽柳对稻瘟病菌孢子萌发表现出强的抑制活性。本研究为植物病害防治和新疆植物资源的开发和利用提供了依据。

水溶性海参皂苷的分离纯化及其抗真菌活性研究

从冻干仿刺参加工废弃液中分离纯化出水溶性海参皂苷,筛选并纯化出其强抗真菌活性组分,为利用水溶性海参皂苷研制高效抗真菌药物创造条件.先后利用大孔树脂柱层析和硅胶柱层析对水溶性海参皂苷进行了纯化,并对各种纯化组分的抗真菌活性进行了测定.在30%,50%,70%,80%,95%乙醇溶液的大孔树脂柱层析洗脱组分中,70%乙醇溶液洗脱组分对裂殖酵母菌和白色念珠菌的抗真菌活性最强.70%乙醇溶液洗脱组分经硅胶柱层析进一步纯化后,得到了SC-1、SC-2、SC-3和SC-4四种纯化样品,除SC-1无抗真菌活性外,其它3种纯化样品对裂殖酵母菌和白色念珠菌均具有显著的抗真菌活性,且组分SC-2和SC-3的抗真菌活性高于SC-4.SC-2纯化样品在高压液相柱层析(HPLC)图谱中仅显示为单一洗脱峰,且在旋转蒸发后可形成结晶,表明其纯度极高,可用于高效抗真菌药物的研制.