阿萨希毛孢子菌与西弗射盾子囊霉的实验室鉴定与体外抗真菌药敏特点分析

目的探讨阿萨希毛孢子菌与西弗射盾子囊霉的实验室鉴定与体外抗真菌药敏特点,为临床用药、准确鉴定和流行病学研究提供依据。方法收集2017年1月—2022年9月广东省人民医院临床分离的2种少见酵母样真菌,其中阿萨希毛孢子菌54株,西弗射盾子囊霉23株,复苏后进行形态学鉴定、生化鉴定和质谱鉴定,同时采用FUNGUS-3 MIC法测定5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑的最小抑菌浓度(MIC)。结果阿萨希毛孢子菌主要感染65岁以上人群(46.30%),感染部位以创面感染(27.78%)与尿路感染为主(22.22%),主要分布于外科(35.19%)和内科(35.19%);而西弗射盾子囊霉感染患者主要以18~40岁(39.13%)和41~65岁(47.83%)两个年龄段为主,感染部位以耳道为主(78.26%),分布于耳鼻喉外科病区(60.87%)和耳聋专科门诊(26.09%);在形态学鉴定方面,2种真菌菌落均为白色凸起,呈镶嵌生长,其中阿萨希毛孢子菌生长速度快于西弗射盾子囊霉,菌落革兰染色可见关节孢子、关节菌丝、真假菌丝及芽生孢子,而西弗射盾子囊霉可见分枝分隔菌丝和单细胞、卵圆形的芽生孢子。在生化鉴定方面,阿萨希毛孢子菌尿素酶阳性,可水解七叶苷,同化多种糖类化合物,而西弗射盾子囊霉尿素酶阴性、不水解七叶苷,但可同化多种碳水化合物。微生物质谱对阿萨希毛孢子菌和西弗射盾子囊霉的鉴定率分别为96.30%和91.30%,具有良好鉴定效果;在体外药敏结果方面,两种真菌对5-氟胞嘧啶均表现出高MIC值,其中54株(100%)阿萨希毛孢子菌MIC值均≥4μg/mL,23株(100%)西弗射盾子囊霉MIC值均≥4μg/mL;同时也需警惕2种真菌对氟康唑出现高MIC值的情况,其中7株(12.97%)阿萨希毛孢子菌MIC值均≥4μg/mL,16株(69.56%)西弗念珠菌MIC值≥16μg/mL;两性霉素B、伊曲康唑、伏立康唑则整体上表现出较低的MIC值(≤2μg/mL),表现出较好的体外活性。结论阿萨希毛孢子菌和西弗射盾子囊霉的实验室鉴定与体外药敏结果具有不同特点,对其实现准确鉴定和进行抗真菌药敏试验,对临床用药、实验室鉴定和流行病学的研究具有重要意义。

念珠菌对5种抗真菌药物的体外敏感性试验

目的 :了解呼吸道感染患者痰中念株菌对抗真菌药物的敏感性特性 ,为临床合理用药提供依据。方法 :采用标准微量稀释法 (NCCLSM - 2 7A) 〔1〕测定 4 3株念株菌对氟康唑片、伊曲康唑胶囊、大蒜素注射液、大蒜液及氟康唑注射液的最低抑菌浓度 (MIC)。结果 :氟康唑MIC为 0 8～ 10 0 0 μg/ml,83 7% (36 / 4 3)敏感 ;氟康唑注射液MIC为 6 2 5～ 2 5 0 μg/ml,10 0 0 %敏感 ;伊曲康唑胶囊 2 5～ 10 μg/ml,90 7% (39/ 4 3)敏感 ;大蒜素注射液 4 6 9～ 18 75 μg/ml,10 0 0 %敏感 ;大蒜液 (本院制剂 0 78～ 10 0 0 μg/ml,88 4 % (38/ 4 3)敏感。 结论 :氟康唑注射液、大蒜素注射液对白色念珠菌 12 5 μg以上能提供临床有效的治疗深部念珠菌感染。

抗真菌药物敏感性试验方法的新进展

真菌感染,尤其是免疫低下患者机会性真菌感染发病率的不断上升使真菌病的治疗面临着严峻的挑战,各种新的抗真菌药物纷纷涌现。临床实践中,人们需要规范快速、易于应用的药敏试验来指导用药和判断预后,抗真菌药物敏感性试验在真菌感染的治疗中起着重要作用。

ATB FUNGUS 2法在念珠菌属和新生隐球菌抗真菌药敏试验中应用的评价

目的评价ATB FUNGUS 2半固体培养基法在测定念珠菌属和新生隐球菌对4种常用抗真菌药物敏感性中的应用价值。方法利用CLSI M27-A2微量液基稀释法和ATB FUNGUS 2法同时测定131株念珠菌和20株新生隐球菌对两性霉素B(AmB)、氟康唑(FLC)、氟胞嘧啶(5-FC)和伊曲康唑(ITC)的敏感性。结果两种方法对于AmB、5-FC、FLC和ITC的一致性分别为98%、89.4%、78.8%和78.1%。②所有受试菌株中两种方法的一致性为80%;但ATB FUNGUS2法将2/5株M27-A2法检查为FLC耐药的白念珠菌判断为敏感或剂量依赖,将8/10株M27-A2法检查为FLC剂量依赖的白念珠菌判断为敏感或耐药。③ATB FUNGUS 2法中AmB的MIC值判读范围偏高,以致于实际工作中不能读出准确的值。结论ATB FUNGUS 2半固体培养基法在测定念珠菌属和新生隐球菌对4种常用抗真菌药物的敏感性时不失为简单、快速而且重复性好的方法。

尝试用微量液体稀释法做皮肤癣菌抗真菌药物敏感试验

目的利用实验室现有资源,改进实验方法和手段,为临床治疗皮肤癣菌病选择合理、有效的抗真菌药物提供依据,更好地支持《抗菌药物临床应用指导原则》的实施。方法用微量液体稀释法做皮肤癣菌的抗真菌药物敏感试验,同时做K-B药敏纸片法相对照。结果经过一年对照试验和两年临床实践,微量液体稀释法与一般应用的K-B药敏纸片法结果有很好的一致性。结论微量液体稀释法与K-B药敏纸片法结果有很好的一致性,并且操作简便易行,有利于皮肤癣菌抗真菌药敏试验在临床常规开展。

两种重要抗真菌药敏试验的比较研究

目的 :比较NCCLS方案与Etest法两种重要的抗真菌药敏试验的优劣。方法 :对NCCLS方案与Etest法方法的过程、条件、对唑类药物抗真菌MIC的一致性方面进行比较。结果 :Etest法更优。结论 :NCCLS方案准确性强 ,但操作步骤复杂 ,而Etest较为简便、可靠、准确。

抗真菌药物敏感性试验方法学研究进展

近二十年来,抗真菌体外药敏试验的需求与日俱增,其主要原因有:第一,随着现代医学技术的发展如器官移植的开展及AIDS的流行,导致免疫缺陷的患者增加,使得真菌感染的发病率和死亡率逐渐上升。据报道,美国每年每10万人中有6～24人罹患念珠菌菌血症[1];第二,新的抗真菌药物的发展:新一代的抗真菌药物如三唑类药物(伏立康唑、泊沙康唑、雷夫康唑)和棘球白素类(卡泊芬净、阿尼芬净、米卡芬净(micafungin)的广泛应用,随之出现的抗真菌药物的耐药问题也引起了临床关注。

4种抗真菌药物对近平滑念珠菌复合群的体外药敏试验结果分析

目的:评价4种抗真菌药物对近平滑念珠菌复合群的抗真菌体外药物敏感性试验结果,为临床治疗、真菌耐药监测和流行病学研究提供参考。方法:收集2020年1月~2022年7月期间本院278例侵袭性真菌感染患者临床分离的非重复近平滑念珠菌复合群278株,并采用分子测序技术进行复核。根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)更新的M59和M60指南,通过ATB FUNGUS3法测定两性霉素B、伏立康唑、氟康唑和伊曲康唑的最低抑菌浓度(MIC),并计算抑制50%菌株的MIC值(MIC_(50))、抑制90%菌株的MIC值(MIC_(90))、MIC值几何均数(GM)、野生型(WT)菌株或敏感菌株占比。结果:278株受试菌株中,近平滑念珠菌213株(76.62%),似平滑念珠菌43株(15.47%),拟平滑念珠菌22株(7.91%);病原菌主要分离自创面分泌物(85株,30.58%),且在66岁以上人群中更为常见(128例,46.04%);患者主要分布于外科病区(89例,32.01%)、内科病区(79例,28.42%)和ICU病区(77例,27.70%)。在复合群水平上,对氟康唑耐药的有16株(5.76%),剂量依赖性敏感的有6株(2.16%);伊曲康唑的非野生型(NWT)菌株4株(1.44%);对伏立康唑耐药的有9株(3.24%),中介的有7株(2.52%);所有菌株均为两性霉素B的WT菌株(100.00%)。在种水平上,所有菌株均为两性霉素B的WT菌株(100.00%);伊曲康唑对3种菌均表现出较好的抑菌活性,95%以上菌株均为伊曲康唑WT菌株(P>0.05)。近平滑念珠菌中,MIC_(90)为2μg/ml,199株(93.43%)为氟康唑敏感株;似平滑念珠菌中,MIC_(90)为2μg/ml,42株(97.67%)为氟康唑WT菌株;拟平滑念珠菌中,MIC_(90)为16μg/ml,15株(68.18%)为氟康唑WT菌株,与其他两种菌比较有统计学差异(P<0.05);拟平滑念珠菌与其他两种菌相比,其氟康唑NWT菌株分离率最高(7株,31.82%)。伏立康唑对近平滑念珠菌和似平滑念珠菌MIC_(90)均为0.06μg/ml,GM分别为0.0688、0.0672μg/ml,204株(95.77%)近平滑念珠菌为敏感株,42株(97.67%)似平滑念珠菌为WT菌株;拟平滑念珠菌的MIC_(90)为0.5μg/ml,GM为0.1213μg/ml,GM与其他两种菌比较有统计学差异(P<0.05),仅16株(72.73%)为WT菌株,与其他两种菌比较有统计学差异(P<0.05)。结论:两性霉素B和伊曲康唑对近平滑复合群内3种念珠菌均表现出较强的抗菌活性,氟康唑和伏立康唑的抗菌活性则存在种间差异,表现为二者对拟平滑念珠菌的抗菌活性较差。因此,临床需重视真菌监测和菌株的准确鉴定,合理应用抗菌药物,同时需警惕耐药情况的发生。

一种全自动药敏系统检测念珠菌抗真菌药物敏感性的应用评价

目的评价一种全自动真菌药敏分析系统检测念珠菌属对常用抗真菌药物体外敏感性的临床应用价值。方法利用微量肉汤稀释法CLSI M27-A4和全自动真菌药敏系统检测100株念珠菌对9种抗真菌药物的敏感性,对两种方法的一致性进行分析。结果两种方法的一致性与所检测的念珠菌属及抗真菌药物种类有关,检测白念珠菌时,卡泊芬净的基本一致性为75%,检测光滑念珠菌时,卡泊芬净和伏立康唑的分类一致性分别为61.1%和66.7%,其他基本一致性和分类一致性为83%~100%;两种方法测定100株念珠菌对9种抗真菌药物总的基本一致性在89%以上,总的分类一致性在91%以上。结论全自动真菌药敏分析系统检测念珠菌属体外药物的敏感性与CLSI方法一致性较好,具有快速和自动的优势,在临床微生物实验室具有很好的应用价值。

关于皮肤真菌病诊断和抗真菌药物敏感试验的新尝试

目的:利用实验室现有资源,改进实验方法和手段,提高皮肤致病癣菌的检出率,为明确诊断,临床治疗选择合理、有效的抗真菌药物提供依据,更好地支持《抗菌药物临床应用指导原则》实施。方法:在临床标本采集的过程中先加用1%KOH液软化组织,溶解蛋白、脂滴,再用无菌刀片刮取表皮贴近真皮表面的皮屑来培养、鉴定。培养出致病癣菌后,尝试用微量液体稀释法做其抗真菌药物的敏感试验。结果:经过近4年临床观察、1年对照试验和2年临床实践、采用新方法取标本后,致病皮肤癣菌阳性检出率明显提高,经久不愈的皮肤病,因有明确诊断和药敏试验指导,临床疗效显著改善。

口腔念珠菌病的菌群分布特点及体外抗真菌药敏试验研究

目的探讨分析口腔念珠菌病的菌群分布特点,研究体外抗真菌药敏试验。方法随机抽取口腔念珠菌病患者85例,分离菌株,并采用显色培养基培养,鉴定分离株的菌群分布特点;进行体外抗真菌药敏试验,检测念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的敏感性。结果氟康唑对白色念珠菌的敏感率(66.7%)显著高于伊曲康唑对白色念珠菌的敏感率(39.4%),组间比较差异有统计学意义(x2=8.724,P=0.016,P<0.05)。结论口腔念珠菌以白色念珠菌最多,并有一定的耐药现象,白色假丝酵母菌对氟康唑敏感性好。

AST-YS08药敏卡片检测酵母菌体外抗真菌药物敏感性的评价

目的评估使用AST-YS08真菌药敏卡片进行酵母菌体外抗真菌药物敏感性试验的准确性。方法选取该院2019年3月29日至2022年5月8日临床分离的念珠菌和新型隐球菌,共100株,分别使用该卡片及微量肉汤稀释法(BMD法)检测菌株对5-氟胞嘧啶、伏立康唑、米卡芬净、两性霉素B、氟康唑、卡泊芬净的最小抑菌浓度(MIC),比较该卡片与BMD法的检测时长、基本一致率(EA)和分类一致率(CA)。结果对于念珠菌,AST-YS08卡片检测时长为(13.63±2.55)h,与BMD法检测的总EA为87.2%,6种药物中EA最低的为卡泊芬净(55.8%);AST-YS08卡片与BMD法检测白色念珠菌及近平滑念珠菌复合群的各类药物CA均>90.0%,CA较低的念珠菌及对应药物为光滑念珠菌伏立康唑(78.9%)及卡泊芬净(5.3%)、克柔念珠菌卡泊芬净(0.0%)、热带念珠菌氟康唑(81.3%)及伏立康唑(56.3%)。对于培养48 h的新型隐球菌,AST-YS08卡片检测时长为(20.67±5.13)h,与BMD法检测的总EA为100.0%,各类药物两种方法的CA均>90.0%;AST-YS08卡片检测培养24 h菌株时检测时长为(20.31±5.84)h,AST-YS08卡片检测与BMD法检测的总EA为96.3%,除两性霉素B(78.6%)外,其余药物两种方法的CA均>90.0%。结论检测念珠菌和新型隐球菌药物敏感性时,AST-YS08药敏卡片与BMD法一致率较高,是一种准确、快速的商品化酵母菌药敏试剂,但念珠菌对卡泊芬净非敏感的结果需谨慎报告,似平滑念珠菌对伏立康唑的药物敏感性需使用其他方法检测。

标准稀释法和冰冻板抗真菌药敏试验商品化试剂盒用于临床分离200株酵母试验结果的比较性评价

日本医学真菌学会（JSMM）临床实验室标准化委员会建立了微量稀释法作为抗真菌药敏试验的标准方法，该方法是基于美国NCCIS标准M27-P的改进，实践证明它具有诸多优点，然而试验时需制备新鲜的微量稀释板耗时、费力，十分不便。为此，日本Eiken化学药品有限公司在JSMM标准方法的基础上加以改进后推出用于酵母的冰冻板抗真菌药敏试验商品化试剂盒，自1996年以来在日本广泛应用，

ROSCO纸片法与ATBFUNGUS3微量稀释法抗真菌药敏试验结果对比分析

近年来,真菌感染已成为白血病,淋巴瘤,长期使用免疫抑制、广谱抗生素,中心静脉插管,中性粒细胞减少,血液透析,骨髓或器官移植,机械通气等特殊人群的严重感染性疾病,是医院内感染的重要部分,抗真菌药物的广泛应用导致真菌的耐药率逐年上升，病原性酵母菌的药敏试验已显得极其重要。

比较国产与进口伏立康唑注射剂的体外抗真菌活性

目的观察血清和溶媒对伏立康唑(抗真菌药)注射制剂体外抑菌活性的影响。方法国产与进口伏立康唑注射液分别用专用溶媒和蒸馏水溶解,参照美国临床和实验室标准化研究所(CLSI)的微量液基稀释法,测定并比较2种制剂的体外抗真菌活性。在培养基中加入人血清(10%),比较2者抗真菌活性的差异。受试菌株包括114株念珠菌,20株新生隐球菌,10株阿萨希毛孢子菌,62株曲霉,10镰刀菌以及10株尖端赛多孢子菌。结果在体外,2种制剂的溶媒对常见致病真菌的抗真菌活性无明显差异;在有血清存在的条件下,2种制剂的抗真菌活性一致。结论国产与进口伏立康唑的体外抗真菌活性无明显差异。

Sensititre YeastOne显色药敏板与微量肉汤稀释法检测曲霉体外抗真菌药物敏感性的一致性研究

目的评估显色药敏板Sensititre YeastOne与微量肉汤稀释法检测曲霉体外抗真菌药物敏感性的一致性。方法使用同样的孢子悬液按照CLSI M38-A2微量肉汤稀释法和Sensititre YeastOne YO10对307株曲霉进行体外抗真菌药物敏感性试验,计算两种药敏方法结果间的基本一致性、分类一致性以及错误率。结果CLSI M38-A2药敏试验显示98.4%(302/307)曲霉菌株对测试的6种抗真菌药物持野生型状态,Sensititre YeastOne则检出97.1%(298/307)菌株为野生型。除伊曲康唑外,其余5种抗真菌药物在Sensititre YeastOne与CLSI M38-A2间的基本一致性均>90%。两种方法在曲霉药物敏感性检测的分类一致性为98.1%(301/307),极显著错误率为0.3%(1/307),显著错误率为1.6%(5/307)。结论Sensititre YeastOne在检测曲霉体外药物敏感性方面与CLSI方法一致性良好,可用于临床实验室曲霉体外药敏检测。

曲霉菌临床分离株的分子鉴定及体外抗真菌药物敏感性分析

目的研究曲霉菌临床分离株的分子鉴定及体外抗真菌药物的敏感性。方法采用Internal Transcribed Spacer(ITS)及β-tubulin基因部分测序对临床分离的53株经形态学鉴定为曲霉的菌株进行分子鉴定,并按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的M38-A2微量液基稀释法测定唑类(伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑),两性霉素B和棘白菌素类(米卡芬净、阿尼芬净和卡泊芬净)共7种抗真菌药物对所有菌株的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)或最低有效浓度(minimum effective concentration,MEC)。结果 53株曲霉菌包含烟曲霉复合体22株(烟曲霉21株和仑图卢斯曲霉1株),黑曲霉复合体23株(塔宾曲霉16株、黑曲霉5株和百岁兰曲霉2株)及土曲霉和黄曲霉各4株;米卡芬净、阿尼芬净、卡泊芬净、泊沙康唑、伏立康唑、伊曲康唑、两性霉素B对曲霉菌株的MIC_(90)为0.031、0.031、0.25、0.5、0.5、1、2μg/mL。除1株烟曲霉对伊曲康唑(MIC≥16μg/mL)和伏立康唑(MIC为2μg/m L)耐药及1株仑图卢斯曲霉对两性霉素B耐药(MIC为8μg/m L)外,其余菌株对7种药物均敏感。4种曲霉复合体对7种抗真菌药物的敏感性差异有统计学意义(P<0.05)。结论棘白菌素类药物体外抗曲霉菌活性最好,两性霉素B体外抗曲霉菌活性相对较差,唑类药物介于以上两者之间。不同种曲霉菌对不同抗真菌药物的敏感性存在差别。

特比萘芬和伊曲康唑联合应用对暗色孢科真菌的体外药敏试验研究

目的本试验探讨特比萘芬和伊曲康唑单独及联合应用对54株暗色孢科真菌的体外相互作用。方法应用美国国家临床和实验室标准研究所(CLSI)的M38-A方案。菌悬液终浓度为(0.4～5)×106CFU/ml,孵育温度35℃,培养时间5～7d。各药单独和联合应用时的MIC值均为与生长对照孔相比100%生长抑制的最低药物浓度;药物间相互作用用分数抑菌浓度(FIC值)表示;FIC<1认为有协同作用,1≤FIC<2认为有相加作用,FIC=2认为无相关性,FIC>2认为有拮抗作用。结果单独用药时特比萘芬在紧密着色霉、裴氏着色霉、卡氏支孢霉和疣状瓶霉组中MIC的几何均数分别为0.198μg/ml,0.372μg/ml,0.215μg/ml,0.456μg/ml,伊曲康唑在紧密着色霉、裴氏着色霉、卡氏支孢霉和疣状瓶霉组中MIC的几何均数分别为0.232μg/ml,0.323μg/ml,0.186μg/ml和0.315μg/ml。体外联合用药时二者MIC几何均数低于其单独应用时的MIC值。在54株受试菌中,联合用药时协同作用为29.6%(16/54),相加作用为68.5%(37/54),拮抗作用为1.9%(1/54)。结论特比萘芬和伊曲康唑联合应用时表现以协同和相加作用为主,很少菌株表现拮抗现象。