神经微丝的纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定

本文采用羟基磷灰石吸附洗脱法,从牛脊髓中分离神经微丝(NF)。用SDS-PAGE显示其分子量为72K,164K及195K,负染电镜可见直径为8-10nm的丝状结构。以此为抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS1细胞融合,获得了一株持续分泌抗NF单克隆抗体的杂交瘤细胞株AN_1。其染色体众数为91,所分泌抗体属IgG1亚类。免疫印迹表明此抗体为NF195特异性。免疫组化显示该抗体具有神经纤维特异性,对神经原胞体及非神经组织呈阴性反应。

抗百日咳丝状血凝素单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的制备抗百日咳丝状血凝素(FHA)的单克隆抗体,并建立特异、准确的FHA定量检测方法.方法采用杂交瘤技术制备McAb,以ELISA间接法筛选稳定分泌抗FHA-McAb的杂交瘤细胞株,并进行系统的鉴定和纯化,建立定量检测FHA的ELISA 方法.结果获得6株分泌抗FHA-McAb的杂交瘤细胞株,抗体类别均为IgG1(κ),效价达1:105～1:1:106,并能特异性识别FHA,与流感病毒血凝素及百日咳毒素无交叉反应,应用ELISA检测FHA的灵敏度为1.04μg/L,批内变异系数为5.49%,批间变异系数为9.31%,平均回收率为94.18%.结论已成功制备了抗FHA-McA,建立了一种特异、准确地定量检测FHA的ELISA方法,可用于无细胞百日咳疫苗原液中FHA含量的检测,为该疫苗的质量控制提供了有力的手段.

抗神经丝重链抗体相关脑炎一例并文献复习

目的 报告国内首例抗神经丝重链抗体相关脑炎病例,并复习相关文献,总结抗神经丝重链抗体相关脑炎的临床特征。方法与结果 1例63岁女性抗神经丝重链抗体相关脑炎患者临床表现为认知功能障碍、反复癫痫发作、失语;头部MRI显示双侧额顶叶多发异常信号,部分脑回略肿胀,幕上脑室系统扩张,脑萎缩以双侧颞叶、海马为甚;18F-DPA714 PET/MRI显示额颞顶枕叶多脑区局灶性摄取异常增高,提示神经炎症;脑电图呈频繁痫样放电;脑脊液白细胞计数和葡萄糖升高,血清和脑脊液自身免疫性脑炎相关抗体阴性,血清TBA法显示小脑神经丝样荧光包绕浦肯野细胞,进一步检测抗神经丝蛋白抗体,血清抗神经丝重链抗体强阳性(1∶1000)。临床诊断为抗神经丝重链抗体相关脑炎,予静脉注射免疫球蛋白和甲泼尼龙治疗,预后改善。结论 抗神经丝重链抗体相关脑炎临床罕见,临床表现多样,早期诊断与鉴别诊断困难,早期予以免疫治疗对预后至关重要。

运动神经元单克隆抗体的制备及初步鉴定

以猪脊髓前角运动神经细胞制备的匀浆免疫Balb/c小鼠。按常规方法制备、筛选抗运动神经元单克隆抗体(Monoclonal Antibodies Against moto-neurons McAb)。总计35株杂交瘤细胞所分泌的McAb,与大鼠半月神经节细胞免疫组化反应均呈阴性,30株与脊髓前角运动细胞(Mn)呈阳性反应、其中5株McAbs免疫组化反应特异性较强,用ELISA方法测定其滴度在2048～4096之间,免疫双扩散法测定,5株杂交瘤均分泌IgG、

马来丝虫微丝蚴表面抗原的单克隆抗体减轻感染沙鼠的微丝蚴血症

作者用单克隆技术研制了马来丝虫微丝蚴表面抗原的单克隆抗体MF—1,并研究和分析了MF—1的特性和作用。以埃及伊蚊叮咬感染了马来丝虫的沙鼠后12—14天,将蚊杀死,取得感染性蚴(L(?))

中间丝系列单克隆抗体的研制与特性鉴定

中间丝(Intermediate Filaments,IF)是真核细胞内的蛋白性丝状结构,在电镜下其直径为8～10mm,介于微丝与微管之间而得名。它们广泛地分布于各种细胞内,特别是在核周与细胞连接点上,与微丝微管—起构成细胞骨架。中间丝是细胞骨架及细胞成分中最为稳定的部分,当用高、低离了强度溶液或非离子去垢剂溶解细胞蛋白、离心去除后,中间丝仍为不溶部分,易于分离。它由多肽所组成,但各种中间丝多肽的分子量差别极大,从40～200KD不等。近年在细胞生物学中的一项重大成就是阐明了中间丝可分成五大类,一种细胞类型主要含有一种中间丝,如(1)上皮型细胞含有细胞角蛋白(分子量4D～65KD);(2)肌肉型细胞含有结蛋白(51KD);(3)间质型细胞含有波形蛋白(55KD);(4)神经胶质细胞含有胶质纤维酸性蛋白(50KD);(5)神经细胞含有神经微丝蛋白(70、140、210KD)。可见它们在细胞内的分布具有一定的型特异性。进一步研究发现,细胞内的中间丝在细胞恶变时,仍保留其表达能力,因而可用于低分化肿瘤的组织起源的判断,成为组织肿瘤标志物之一,在肿瘤病理学中具有很大的实用价值。

抗微管相关蛋白1B抗体阳性相关神经系统副肿瘤综合征1例报告

神经系统副肿瘤综合征(paraneoplastic neurological syndrome,PNS)是癌症的远隔效应,可影响神经系统的各个部分,发病通常由免疫机制介导。随着抗体生物标志物的发现不断增多,PNS的发现率也逐渐升高,每300例癌症患者中有1例为PNS[1]。2021年7月,国际专家组[2]提出了PNS最新诊断标准及新的诊断评分系统,重新定义PNS常见临床表型,并将其分为高风险表型、中风险表型;同时对抗体进行危险分层,将抗微管相关蛋白1B(microtubule associated protein 1B,MAP1B)抗体作为“高风险抗体”,认为其与肿瘤发生有强相关性。但是,目前抗MAP1B抗体引起PNS的病例报道及相关研究尚较少。现报告1例MAP1B抗体相关PNS病例。

胶质纤维酸性蛋白和神经微丝蛋白的纯化及其抗体的制备和鉴定

参考Ｅｎｇ和Ｌｉｅｍ两法予以改进。自牛脊髓中同时提取纯化胶质纤维酸性蛋白和神经微丝蛋白，用淋巴结内微量注射法免疫家兔获得相应抗体。用免疫转移电泳和免疫组织化学技术（ＰＡＰ法）对抗体进行鉴定。兔抗胶质纤维酸性蛋白与牛脊髓的相应蛋白组分以及中枢神经系统和视神经的星形胶质细胞呈阳性反应。兔抗神经微丝蛋白则和牛脊髓中的相应蛋白以及神经元和神经纤维呈阳性反应。

胞体型神经微丝单抗的研制

胞体型神经微丝单抗的研制Ｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒｏｎａｌｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｔｏｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ￥／／杨青峰，廖维宏，丁珍明，范维珂（第三军医大学野战外科研究所）６３００４２关键词胞浆丝；神经元...

一种可识别神经元特异微管蛋白的抗体

通过人工合成大鼠巢蛋白（Nestin）C-末端的一段20肽，制备得到了抗巢蛋白的抗体--Anti-Nes－2。我们发现该抗体除了能识别小鼠240kD的巢蛋白条带外，还特异性识别另一分子量约为50kD的蛋白条带。蛋白印迹反应提示，该50kD蛋白可能与神经细胞的增殖和分化相关。经分高纯化和N-端氨基酸序列测定证实：该50kD蛋白为微管蛋白（α-tubulin）。我们发现，通过免疫吸附反应该抗体只能被脑中分离的微管蛋白所特异性吸附，而不能被肺来源的微管蛋白所吸附。蛋白印迹反应结果还表明：与一般的α-和β-tubulin在各种组织和细胞株中都有表达的情况不同，该50kD蛋白只在小鼠发育不同时期的脑组织及神经前体细胞中特异性表达，并随神经发育过程其表达县不断增加；而在其它组织和所考察的细胞株中都不表达。鉴于以上结果，我们认为Anti－Nes－2抗体所识别的50kD蛋白是神经细胞特异的α－tubulin，并可能是一种神经元特异的α-tubulin翻译后加工产物。

治疗用武汉抗CD3单克隆抗体(WuT_3)的致突变性研究

观察了武汉抗ＣＤ３单克隆抗体（简称ＷｕＴ３）对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌ＴＡ９７、ＴＡ９８、ＴＡ１００及ＴＡ１０２菌株的回复突变作用。结果显示在５～５０００μｇ／皿的剂量范围内，ＷｕＴ３所致的诱发回复突变菌落数与自发回复突变菌落数之比ＭＲ（Ｒｔ／Ｒｃ），无论加大鼠肝匀浆，辅酶Ⅱ及葡萄糖６－磷酸（Ｓ－９混合液）或不加Ｓ－９混合液，均不超过２。同时观察了ＷｕＴ３对小鼠骨髓细胞微核率及对人外周血淋巴细胞染色体畸变率的影响，结果显示小白鼠ｉｖＷｕＴ３，每日一次，连续２日，在２５～１００ｍｇ·ｋｇ－１范围内，ＷｕＴ３各剂量组的微核细胞率与溶剂对照组相比均无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。而环磷酰胺（ＣＰ）阳性组与溶剂对照组相比有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）。ＷｕＴ３在２５～２５０μｇ／瓶的剂量范围内，各剂量组的染色体畸变细胞率与溶剂对照组相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５），而ＣＰ组与溶剂对照组相比有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）。

抗CD20单克隆抗体利妥昔单抗

对利妥昔单抗在非恶性自身免疫性疾病中的作用结果来自于几个小型试点临床研究，包括对特发性血小板减少、重症肌无力、多发性神经病、移植物抗宿主病、器官移植排斥和类风湿关节炎（RA）的研究。

神经病和单克隆丙种球蛋白病

尽管对单克隆丙种球蛋白病伴发的神经病疾病分类看法仍有争论，但是对这些单克隆内种球蛋白病与神经病联系的了解已经几年了，同样悬而未决的是在抗神经抗体的临床实践中发病机制作用和诊断的相关性以及给这些病人最有效的治疗（如果有的话），抗神经抗体常与IgM同型但意义不明的单克隆内种球蛋白病相关联，过去12个月里几篇论文提出了这些争论，本文将重点回顾这些论文结果。

一项利妥昔单抗治疗副肿瘤性神经系统综合征相关抗体的非对照试验

Anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab) is effectively used in the treatment of B-cell lymphomas. Recent reports in the literature suggest that antibody associated autoimmune disorders may respond to rituximab. We therefore treated nine patients with anti-Hu or anti-Yo associated paraneoplastic neurological syndromes (PNS) with a maximum of four monthly IV infusions of rituximab (375 mg/m2). In this uncontrolled, unblinded trial of rituximab, three patients improved ≥ 1 point on the Rankin Scale (RS). One patient with limbic encephalitis improved dramatically (RS from 5 to 1). Further studies of rituximab in autoantibody associated PNS are warranted.

类风湿关节炎五种自身抗体的检测及其诊断意义

目的分析在类风湿关节炎(RA)中抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、抗核周因子抗体(APF)、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体(AFA)、抗RA33抗体和类风湿因子(RF)在诊断中的意义。方法选取RA组63例,非RA组67例,正常对照组30例,进行相关实验指标测定,并对结果进行统计学分析。结果抗CCP抗体、APF、AFA、抗RA33抗体、RF在RA诊断中的敏感度为87.3%、55.6%、38.1%、27.0%、69.8%;特异度为91.0%、92.5%、94.0%、91.0%、79.1%;联合检测五个指标,出现其中一种抗体阳性者63例(100%),两种阳性者54例(85.7%),三种阳性者34例(54.0%),四种阳性者18例(28.6%),五种检测均阳性者6例(9.5%)。在非RA中,无四种以上抗体检测阳性者。抗CCP抗体阳性组和阴性组患者在肿胀关节数、压痛关节数、DAS28评分、RF滴度,骨侵蚀发生率方面差异有统计学意义(P<0.05)。结论抗CCP抗体对RA的诊断有较高的敏感度和特异度。联合检测多种血清学指标,有助于RA的诊断和鉴别诊断。抗CCP抗体与RA的骨侵蚀和病情活动度有关。

抗肝癌米托蒽醌免疫毫微粒球的制备及鉴定

采用乳化高温固化法制备载米托蒽醌 (DHAQ)的牛血清白蛋白 (BSA)毫微粒球 (NP)(DHAQ- BSA- NP)后 ,应用改进的 N-琥珀酰亚胺基 - 3- (2 -吡啶二硫 )丙酸酯 (SPDP)法将抗人肝癌单克隆抗体 HAb18与 DHAQ- BSA- NP偶联 ,制得抗人肝癌抗体免疫毫微粒球 HAb18- DHAQ- BSA-NP。再利用 12 5I标记的兔抗小鼠免疫球蛋白 Ig G测定 HAb18- DHAQ- BSA- NP表面结合的 HAb18数量。结果显示 ,HAb18偶联到毫微粒球 DHAQ- BSA- NP表面 ,且每克 HAb18- DHAQ- BSA- NP表面偶联 3.5mg

几种自身抗体辅助诊断类风湿关节炎临床应用评价

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是以关节慢性炎症为主的自身免疫性疾病,疾病后期患者关节致残率很高。预防和减少骨关节破坏,减少致残率并提高患者的生活质量,关键在于对RA患者进行早期诊断和早期治疗。本研究检测RA患者血清中类风湿因子（rheumatoid factors,RF）、抗环瓜氨酸肽（cyclic citrullinated peptide,CCP）抗体、抗RA33抗体、抗核周因子（antiperinuclear factor,APF）、