转多个抗真菌蛋白基因水稻植株的获得及其抗稻瘟病菌的初步研究

用基因枪法将水稻碱性几丁质酶（ＲＣ２４）基因、苜蓿葡聚糖酶（βＧｌｕ）基因、大麦核糖体失活蛋白（ＢＲＩＰ）基因和潮霉素（ｈｐｔ）基因同时导入籼稻品种（七丝软占）中，获得了７个潮霉素抗性再生系，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证明２～３个抗真菌蛋白基因已整合到水稻基因组中．

抗稻瘟病菌活性植物醇提物组方及其体内体外活性

借鉴Wadley法评价植物源农药复配联合作用的思想,将参与组方的单剂引起25%抑制率的剂量定为中间水平,应用均匀设计安排试验来实现四种植物醇提物抗稻瘟病菌活性组方的配比优化。根据均匀设计的统计分析方法,应用DPS软件进行逐步回归,确定获得最高试验指标时各醇提物的配比(无患子∶广玉兰∶油茶∶木荷=1∶4.6∶1∶2.4)。对组方进行的盆栽试验结果表明组方对水稻稻瘟病既有预防作用又有治疗作用,质量浓度为20 000 mg/L的组方对水稻稻瘟病的预防作用的防效可达到93.2%,而治疗作用可达到91.2%,组方预防作用的EC50值为4 939 mg/L,治疗作用的EC50值为5 944 mg/L,预防作用明显优于治疗作用。

抗稻瘟病菌活性多植物提取物组方研究

为了强化植物天然产物抗稻瘟活性和减少使用剂量,进行了菌丝生长和孢子萌发抑制活性测定、配伍药效模型多植物提取物活性级分组方,结果显示:木荷叶、无患子果皮、广玉兰叶、油茶叶、苦槠叶、雪松叶等材料醇级分抑制稻瘟病菌活性较强,抑制菌丝生长的中有效浓度(EC50)/最小抑菌浓度(MIC)分别为:0.08/0.60、0.08/0.80、0.17/1.00、0.22/0.60、0.35/1.50、0.16/1.00㎎/mL,抑制孢子萌发的最小浓度(MIC)分别为:1.6、1.7、2.9、3.1、2.9、4.6㎎/mL。70%乙醇提取物组方抑菌效果表明:对菌丝生长抑制,两两组合时无患子和广玉兰的协同作用最强,木荷和雪松的拮抗作用最强;多组合时木荷、无患子、广玉兰取高剂量时可以获得最大的抑制效果。对孢子的抑制情况,两两组合时均能加强抑制稻瘟病菌孢子的萌发,多组合时木荷、无患子、广玉兰、油茶、苦槠组方时可以获得最好的抑制效果。本文所选用的组方药效模型具有预测值与实测值相关性好,可预测性强的特点,适用于开发植物源杀菌剂的多组分组方优选。

抗稻瘟病菌活性木荷皂甙类似物的分离条件及其分离

新型木荷各皂甙极性相似,结构相近,给分离带来了极大困难,制约了抗稻瘟病菌活性木荷皂甙先导物的确立。运用单因素(色谱柱填料、流速、流动相配比)探索其色谱行为,综合塔板理论、速率理论及线性放大原理推导,以及菌丝生长速率法测定活性,确定了木荷皂甙的色谱分析条件为:Hypersil BDS C18色谱柱,流速0.8 mL/min,特定的梯度洗脱程序,获得了较为满意的色谱分析图谱,推导出木荷皂甙的速率理论半经验公式为H=!23.5195×10!3+0.1155×10!1/u+14.9675×10!3u,应用到半制备HPLC,成功分离出7个木荷皂甙单体,其中2种具有强抗稻瘟病菌活性,其EC50/EC90分别为5.9123/21.6912,5.2064/16.9781。