血管瘤患儿血清粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子及转录激活因子3水平与瘤体增生的相关性

目的探索血管瘤患儿血清粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及转录激活因子3(STAT3)的表达水平并分析其与瘤体增生的相关性。方法选取2020年1月—2023年1月收治的152例血管瘤增生患儿作为研究对象,分为增生期组(87例)与退化期组(65例),另选择同期确诊为血管畸形的53例患儿作为血管畸形组。对血清GM-CSF、STAT3及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管生成素-1(Ang-1)的表达水平进行检测;Pearson法相关性分析血清GM-CSF、STAT3与bFGF、VEGF、HIF-1α、Ang-1的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清GM-CSF、STAT3对血管瘤瘤体增生的预测价值;多因素Logistic回归分析血管瘤瘤体增生的影响因素。结果增生期组患儿血清bFGF、VEGF、HIF-1α、GM-CSF、STAT3表达水平高于血管畸形组及退化期组患儿(P<0.05),但血清Ang-1表达水平低于血管畸形组及退化期组患儿(P<0.05);Pearson法相关性分析显示,增生期组患儿血清GM-CSF及STAT3水平均与bFGF、VEGF、HIF-1α水平正相关,与Ang-1水平负相关;ROC曲线下面积显示,GM-CSF和STAT3单独预测血管瘤瘤体增生风险的AUC分别为0.847,0.822,联合预测的AUC为0.918,联合预测的效能显著大于GM-CSF单独诊断的AUC(Z=2.459,P=0.014),STAT3单独诊断的AUC(Z=3.371,P=0.001)。多因素Logistic回归分析显示GM-CSF、STAT3是血管瘤瘤体增生的影响因素(P<0.05)。结论血管瘤瘤体增生患儿血清GM-CSF及STAT3表达水平升高,是瘤体增生的影响因素,联合检测能较好的预测血管瘤瘤体增生风险。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、血清淀粉样蛋白A及肺表面活性蛋白D与难治性肺炎支原体肺炎的关系及其临床意义

目的探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、血清淀粉样蛋白A(SAA)及肺表面活性蛋白D(SP-D)与难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)的关系,并分析其用于临床诊断的价值。方法选取2020年1月至2022年12月湖北省宜昌市妇幼保健院120例MPP患儿为研究对象,根据治疗情况分为普通型肺炎支原体肺炎(GMPP)组(77例)和RMPP组(43例)。对比分析两组患儿一般资料、临床症状及两组患儿血清GM-CSF、SAA及SP-D水平,采用受试者工作特征曲线探讨GM-CSF、SAA、SP-D及联合试验对RMPP的诊断效能。结果RMPP组患儿发热时间长于GMPP组,合并胸腔积液、肺不张患儿比例高于GMPP组(P<0.05);RMPP组患儿血清GM-CSF、SAA及SP-D水平明显高于GMPP组(P<0.05)。RMPP患儿急性期血清GM-CSF、SAA及SP-D水平明显高于恢复期(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,发热时间长、胸腔积液、肺不张、血清GM-CSF、SAA及SP-D升高是RMPP的独立危险因素(P<0.05)。GM-CSF、SAA与SP-D均具有诊断RMPP的效能,但灵敏度相对较低。以三项指标并联试验对RMPP诊断的ROC曲线下面积为0.920,灵敏度为86.0%,特异度为80.5%,临床应用价值大三项指标单独使用。结论血清GM-CSF、SAA及SP-D升高与RMPP的发生发展密切相关,三项指标并联试验可用于儿童RMPP的辅助诊断。

基于CT征象和血清巨噬细胞集落刺激因子、β-连环蛋白构建的联合模型对孤立性肺结节的评估价值

目的探讨基于CT征象和血清巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、β-连环蛋白(β-Catenin)构建的联合模型对孤立性肺结节的评估价值。方法选取2020年2月至2023年2月萍乡市人民医院病理结果显示孤立性肺结节的105例患者作为研究对象,以孤立性肺结节性质为结局指标,软件计算建模组所需样本量为75例,故随机抽取75例作为建模组、其余30例作为验证组,分析建模组孤立性肺结节不同性质患者一般资料、CT征象、生化指标,多因素logistic回归分析法筛选影响孤立性肺结节性质的独立影响因子,并建立预测模型。用验证组临床资料进行验证并将验证组临床资料代入预测模型,根据预测概率绘制ROC曲线评估该预测模型的效能。结果建模组75例病例中,良性肺结节43例(57.33%)、恶性肺结节32例(42.67)。单因素分析结果显示,良性、恶性肺结节患者毛刺征、分叶征、血管集束征、胸膜凹陷征、磨玻璃密度、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、癌胚抗原(CEA)、神经特异性烯醇化酶(NSE)、M-CSF、β-Catenin水平与建模组孤立性肺结节性质有关,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示:毛刺征(β=1.572,OR=1.612,95%CI=1.475~2.159)、分叶征(β=1.484,OR=1.650,95%CI=1.408~2.184)、血管集束征(β=1.292,OR=1.674,95%CI=1.466~2.198)、磨玻璃密度(β=1.307,OR=1.785,95%CI=1.501~2.263)、CEA(β=0.915,OR=1.797,95%CI=1.505~2.199)、NSE(β=0.920,OR=1.824,95%CI=1.618~2.218)、M-CSF(β=0.859,OR=1.765,95%CI=1.506~2.301)、β-Catenin(β=0.867,OR=1.806,95%CI=1.542~2.325)是影响建模组孤立性肺结节性质的独立危险因素(P<0.05),据此建立的联合模型ROC曲线结果显示:该模型评估孤立性肺结节良恶性的灵敏度为90.50%、特异度为75.26%、AUC为0.880(95%CI=0.802~0.935)、阳性似然比为4.05、阴性似然比为0.12、阳性预测值为82.80%、阴性预测值为89.90%。结论毛刺征、分叶征、血管集束征、磨玻璃密度及CEA、NSE、M-CSF、β-Catenin水平升高是影响孤立性肺结节良恶性的独立影响因素,据此构建的联合模型评估孤立性肺结节良恶性的效能较高。

干扰素调节因子5、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在细菌性肺炎病儿血清中的表达及预后价值

目的探讨干扰素调节因子5(interferon regulatory factor 5,IRF5)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macro-phage colony-stimulating factor,GM-CSF)在细菌性肺炎病儿血清中的表达变化及疾病预后价值。方法选取2019年4月至2021年5月中国人民解放军联勤保障部队第九二八医院收治的细菌感染性肺炎病儿96例作为细菌组,同期非细菌感染性肺炎病儿88例作为非细菌组,另外选取健康体检儿童96例为对照组,收集检测三组病儿基本临床资料。检测血清中IRF5、GM-CSF及其组间差异;采用Pearson法分析细菌性肺炎病儿血清IRF5、GM-CSF水平与病情指标的相关性;应用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析IRF5、GM-CSF及二者联合预测细菌性肺炎预后的价值。结果细菌组血清IRF5水平[(38.85±13.86)ng/L]显著高于非细菌组[(11.15±4.37)ng/L]和对照组[(10.76±1.55)ng/L],且重症组高于轻症组(P<0.05);细菌组血清GM-CSF水平[(54.73±16.56)ng/L]显著低于非细菌组[(246.73±28.94)ng/L]和对照组[(250.64±55.67)ng/L],且重症组低于轻症组(P<0.05)。重症组气促、吐沫、三凹征、肺部明显湿啰音比例、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞水平显著高于轻症组、非细菌组(P<0.05),轻症组、非细菌组CRP水平显著高于对照组(P<0.05),非细菌组CRP水平显著高于对照组(P<0.05)。血清IRF5水平与CRP、白细胞、临床肺部感染评分(clinical pulmonary infection score,CPIS)均呈正相关(r=0.34、0.36、0.41,P<0.05),血清GM-CSF水平与CRP、白细胞、CPIS均呈负相关(r=-0.40、-0.32、-0.45,P<0.05)。预后不良组血清IRF5水平高于预后良好组,血清GM-CSF水平低于预后良好组(P<0.05)。ROC曲线显示,IRF5、GM-CSF对预后预测的AUC分别为0.90、0.87,二者联合对预后预测的AUC为0.96,明显高于二者单独诊断,(Z联合vs.IRF5=2.86,P=0.004;Z联合vs.GM-CSF=2.24,P=0.025),其灵敏度、特异度分别为90.32%、90.77%。结论细菌性肺炎病儿血清IRF5水平升高,GM-CSF水平降低,二者在评估病情进展及疾病预后预测方面具有较高的价值。

抗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子自身抗体阳性隐球菌性脑膜炎患者的临床特征分析

目的探讨抗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)自身抗体阳性隐球菌性脑膜炎患者的临床特征和预后影响因素。方法回顾性纳入2014年1月至2021年12月于复旦大学附属华山医院住院治疗且隐球菌培养阳性的非艾滋病相关隐球菌性脑膜炎确诊病例216例, 采用酶联免疫吸附测定法检测血清抗GM-CSF自身抗体水平, 比较抗体阳性和阴性隐球菌性脑膜炎患者的临床表现和预后。统计学比较主要采用χ2检验或Fisher确切概率法。采用Cox回归模型分析患者预后相关危险因素。结果 216例患者中, 抗GM-CSF自身抗体阳性者23例(10.6%)。23例患者中格特隐球菌感染者7例, 新型隐球菌感染者16例。抗GM-CSF自身抗体阳性组中格特隐球菌感染占30.4%(7/23), 高于抗体阴性组的1.6%(3/193), 差异有统计学意义(χ2=38.82, P<0.001)。抗GM-CSF自身抗体阳性组患者肺部有肿块型病灶(直径>3 cm)的比例为30.0%(6/20), 1年全因死亡率为50.0%(10/20), 分别高于抗体阴性组的3.4%(5/145)和16.1%(29/180), 差异均有统计学意义(均Fisher确切概率法, P<0.01)。年龄≥60岁[风险比(HR)=4.146, P=0.002]、合并免疫低下因素(HR=3.160, P=0.021)、癫痫(HR=6.129, P=0.002)、抗GM-CSF自身抗体阳性(HR=2.675, P=0.034)、脑脊液白细胞计数<100 ×106/L(HR=2.736, P=0.039)、脑脊液隐球菌荚膜多糖抗原效价≥1∶1 280(HR=4.361, P=0.009)是隐球菌性脑膜炎患者1年全因死亡的独立危险因素。结论在非艾滋病相关隐球菌性脑膜炎患者中, 抗GM-CSF自身抗体阳性率高达10.6%,抗体阳性患者可感染新型隐球菌和格特隐球菌, 其肺部出现肿块型病灶的比例显著多于抗体阴性患者。抗GM-CSF自身抗体阳性患者1年生存率下降, 为影响隐球菌性脑膜炎预后的独立危险因素。

巨噬细胞集落刺激因子-1及其受体在牙周炎中的研究进展

牙周炎是一种影响牙齿周围支持组织的慢性炎症性疾病。牙周组织损伤主要由宿主的免疫反应介导,而目前临床治疗牙周炎主要以局部机械清除菌斑和结石为主,免疫疗法在牙周临床中应用很少。因此,对牙周炎免疫治疗的研究就显得极其重要。巨噬细胞参与宿主免疫反应的关键环节,通过识别、吞噬和清除外来病原体和异物在牙周炎的发生、发展过程中发挥重要作用。研究表明,这一过程是通过巨噬细胞集落刺激因子-1(colony stimulation factor-1,CSF-1)/巨噬细胞集落刺激因子-1受体(colony stimulation factor-1 receptor, CSF-lR)信号轴介导的巨噬细胞炎性调控、破骨细胞骨吸收调控进行的。本综述将CSF-1/CSF-1R信号轴在牙周炎中的作用及其作用机制进行总结,以期为后续研究及牙周炎的免疫治疗提供依据。

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在宫颈癌放疗致急性放射性直肠炎的临床应用

目的探索重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在宫颈癌放疗致急性放射性直肠炎中的临床疗效。方法分析本院2021年1月—2022年6月接受放射治疗的宫颈癌且出现急性放射性直肠炎的患者60例资料,随机分为观察组和对照组各30例。对照组给予0.9%NaCl注射液100 mL+甲硝唑氯化钠注射液100 mL+地塞米松10 mg,观察组给予0.9%NaCl注射液100 mL+甲硝唑氯化钠注射液100 mL+地塞米松10 mg+GM-CSF 150μg,均行保留灌肠。结果观察组及对照组的患者均经过对症处理后好转,好转率均为100%;两组的治愈率分别为73%(22/30)vs 60%(18/30),(χ^(2)=1.20,P=0.412);观察组及对照组症状好转所需时间分别为(7.60±2.17)d vs(8.83±1.60)d,两组之间差异均具有统计学意义(t=4.470,P=0.039);治疗第7天的CRP值两组之间具有差异(t=6.795,P=0.012),观察组更具优势;使用SOMA量表分别对患者灌肠前后进行评分,两组患者自身对比灌肠后便血、腹泻、里急后重、腹痛评分均较灌肠前明显降低(均P<0.05);分组比较两组患者灌药前后各症状评分差异均无统计学意义(均P>0.05)。两组治疗均耐受良好,无严重治疗相关毒副反应。结论重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子联合保留灌肠能有效改善急性放射性肠炎患者的临床症状,并缩短治疗时间,可作为一种治疗急性放射性肠炎的新方法。

立体定向体部放疗联合粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子治疗原发性肝癌患者的效果

目的探讨立体定向体部放疗(SBRT)联合粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)治疗原发性肝癌患者的效果。方法纳入接受SBRT联合GM-CSF治疗的31例原发性肝癌患者。观察治疗后患者的近期疗效(疾病控制率、客观缓解率)和远期疗效(无病生存期、总生存期),分析治疗前后患者的免疫指标(CD4^(+)T淋巴细胞水平、CD8^(+)T淋巴细胞水平及CD4^(+)/CD8^(+)值)、肝功能指标(ALT、AST、总胆红素、白蛋白水平)、肝癌指标(甲胎蛋白、癌胚抗原水平)、生活质量[Karnofsky功能状态(KPS)评分]的变化。结果治疗后1个月、3个月、6个月和12个月的客观缓解率分别为77.42%、90.00%、58.62%和40.74%,疾病控制率分别96.77%、93.33%、75.86%和70.37%。31例患者的中位无病生存期为9.1个月,中位总生存期为21.0个月。不同临床特征患者的中位无病生存期和中位总生存期差异均无统计学意义(均P>0.05)。与治疗前1周比较,治疗后1周患者的CD4^(+)T淋巴细胞水平、CD8^(+)T淋巴细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)值、白蛋白水平下降,ALT、AST水平升高(均P<0.05);与治疗后1周比较,治疗后1个月、3个月患者的CD4^(+)T淋巴细胞水平、CD8^(+)T淋巴细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)值升高(均P<0.05),而ALT、AST、白蛋白水平恢复至治疗前水平。治疗后1周、1个月、3个月患者的血清癌胚抗原、甲胎蛋白水平较治疗前1周有所下降,治疗后患者的KPS评分呈先降低后升高的趋势(均P<0.05)。结论SBRT联合GM-CSF可改善原发性肝癌患者的生活质量,维持患者肝功能的稳定,增强患者的免疫功能,提高患者远期临床疗效,可作为失去手术指征的原发性肝癌患者的治疗方案。

链霉亲和素-人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白的制备与活性鉴定

目的:制备链霉亲和素(SA)连接的人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)融合蛋白(SA-hGM-CSF),并对其生物学活性进行鉴定。方法:在NCBI数据库中查找SA和hGM-CSF序列,将序列合成后连接入Pet28表达载体中,构建SA-hGM-CSF-Pet28重组表达载体,在BL21(DE3)表达感受态中利用IPTG诱导剂诱导表达,经His镍柱纯化,尿素梯度复性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法和蛋白质印迹法(WB)鉴定融合蛋白,通过TF-1细胞检测融合蛋白的生物学活性。结果:SA-hGM-CSF融合蛋白可在BL21(DE3)中高效诱导表达,经His镍柱纯化后该融合蛋白纯度较高。经尿素梯度复性后,细胞学实验验证该融合蛋白具有生物学活性。结论:成功表达具有生物活性的融合蛋白SA-hGM-CSF,该结果为SA-hGM-CSF表面锚定修饰的肿瘤细胞疫苗的研究提供了实验基础。

血清粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、人中性粒细胞多肽1-3、CD64联合预测新生儿败血症抗感染转归的价值

目的探讨血清粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、人中性粒细胞多肽1-3(HNP1-3)、中性粒细胞表面抗原CD64联合预测新生儿败血症抗感染转归结局及预防措施。方法选取三二〇一医院2019年1月至2021年10月新生儿败血症病儿92例作为研究对象,均行抗感染治疗,治疗7 d后根据抗感染转归结局分为有效组(69例)与无效组(23例)。比较两组血清GM-CSF、HNP1-3、CD64水平,分析各血清指标预测抗感染转归结局的预测价值。结果无效组血清GM-CSF(0.24±0.08)µg/L、HNP1-3(92.75±17.22)µg/L、CD64(1281.00±89.04)平均荧光强度(MFI)高于有效组(0.17±0.05)µg/L、(78.40±14.16)µg/L、(362.00±82.37)MFI(P<0.05);血清GM-CSF、HNP1-3、CD64水平与新生儿败血症病情程度呈正相关(P<0.05);logistic回归分析,校正前,病情程度、低体质量儿、早产、合并化脓性脑膜炎、血清GM-CSF、HNP1-3、CD64对新生儿败血症抗感染转归结局有独立影响,校正病情程度、低体质量儿、早产、合并化脓性脑膜炎等其他因素后,血清GM-CSF、HNP1-3、CD64仍对新生儿败血症抗感染转归结局有独立影响(P<0.05);血清GM-CSF、HNP1-3、CD64联合预测新生儿抗感染转归结局的AUC为0.91[95%CI:(0.83,0.96)],大于各指标单独预测0.84[95%CI:(0.75,0.91)]、0.80[95%CI:(0.70,0.87)]、0.77[95%CI:(0.67,0.85)],灵敏度为91.30%,特异度为81.16%。结论血清GM-CSF、HNP1-3、CD64联合预测新生儿败血症抗感染转归结局的价值较为可靠,临床可根据其血清水平变化制定相关防治措施,同时还应关注病情程度、低体质量儿、早产、合并化脓性脑膜炎等因素对抗感染转归结局的影响。

粒细胞或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子致肺毒性临床特征分析

目的探讨粒细胞或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(G-CSF或GM-CSF)致肺毒性的临床特点。方法检索中国知网、万方、维普、PubMed、Embase数据库自建库至2022年8月31日期间发表的关于G-CSF或GM-CSF致肺毒性的病例报道,对其进行回顾性分析。结果共纳入34例患者,中位年龄为59岁(3~82岁);肺部症状多在G-CSF或GM-CSF给药后第5日出现,主要表现为呼吸困难(64.7%)、发热(47.1%)、咳嗽(20.6%);影像学特征以双侧肺渗出(82.1%)和肺间质性损伤(50.0%)为主。在停用G-CSF或GM-CSF并接受治疗干预(包括糖皮质激素和吸氧治疗)后,25例(73.5%)患者症状改善。结论肺毒性是G-CSF或GM-CSF罕见的不良反应,早期诊断、及时停药和治疗干预对预后有重要意义。G-CSF或GM-CSF治疗期间应加强呼吸困难、咳嗽和发烧等症状的监测,警惕G-CSF或GM-CSF导致肺毒性的发生。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与调节性相互作用改善不明原因复发性流T细胞之间的产相关机制的研究进展

不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)是妊娠早期最常见的并发症,严重影响着孕龄期女性。URSA的发病机制与母胎免疫耐受失衡密切相关。母胎免疫耐受的创建与维持需要多种免疫因子及细胞因子共同参与调节。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage-colony stimulating factor,GM-CSF)是一种淋巴造血细胞因子,具有广泛的增殖、分化、趋化和黏附作用,在许多细胞类型中均有表达。GM-CSF是影响妊娠结局的重要因素之一,其通过免疫调节剂的形式促进胎儿-胎盘组织的母体免疫耐受,以及作为营养生长和生存因子参与植入前胚胎发育和胎盘形态调节。但GM-CSF在不明原因复发性流产中的作用仍存争议,且作用机制尚不明确。研究发现,外源性GM-CSF可能通过树突状细胞的扩增来扩增调节性T细胞并减少同种抗原诱导的炎症免疫反应。GM-CSF与Treg细胞之间的相互作用可能是GM-CSF能够改善URSA的关键原因。因此,了解GM-CSF在URSA的确切作用机制及其在建立和维持妊娠过程中的重要性,将GM-CSF设计为新的干预措施以治疗复发性流产,并在临床方面得到更广泛的应用。

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、神经生长因子、白介素-17在自身免疫性前列腺炎中的作用

目的探讨粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、神经生长因子(NGF)、白介素-17(IL-17)在实验性自身免疫性前列腺炎(EAP)大鼠前列腺组织中表达的意义。方法建立实验性自身免疫性前列腺炎大鼠模型并分为对照组、EAP组、抗GM-CSF对照组(阻断对照组)、抗GM-CSFEAP组(阻断EAP组),予痛觉行为测试。取各组大鼠前列腺组织,免疫组化观察GM-CSF在前列腺组织中表达;通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测GM-CSF、NGF、IL-17的mRNA及蛋白表达。结果痛觉测试:抗GM-CSF组在EAP中显示出比EAP组更轻的慢性盆腔疼痛。HE染色:抗GM-CSF组在EAP诱导后组织炎症反应较少。对照组EAP炎症重于抗GM-CSF组。免疫组化:EAP组大鼠前列腺组织在免疫组化检测中,GM-CSF呈阳性表达(主要在细胞核表达)。RT-PCR:抗GM-CSF组EAP后50 d用RT-PCR检测IL-17和NGF,抗GM-CSF显著降低了EAP诱导的前列腺组织中IL-17和NGFmRNA表达的增加。Western blot:抗GM-CSF组EAP后50 d用WB检测IL-17和NGF蛋白表达量,抗GM-CSF显著降低了EAP诱导的前列腺组织中IL-17和NGF蛋白的表达。结论GM-CSF、NGF、IL-17在EAP大鼠前列腺组织中表达增加,它们可能是慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征(CP/CPPS)的重要炎症介质;且在抗GM-CSF后NGF、IL-17的表达下降,说明GM-CSF很有可能成为CP/CPPS的潜在治疗靶点。

前列腺特异性膜抗原、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子双顺反子DNA疫苗的构建及其免疫活性的测定

目的:构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)核酸疫苗并测定其免疫活性。方法:应用DNA疫苗载体pIRES构建pIRES-PSMA-mGM-CSF、pIRES-PSMA、pIRES-mGM-CSF重组质粒,酶切鉴定正确后与pIRES空质粒分别免疫C56BL/6小鼠(每组15只),LDH释放试验测定各自免疫后小鼠的特异性细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性。结果:成功构建上述重组质粒;pIRES-PSMA-mGM-CSF免疫后小鼠特异杀伤率最高,pIRES-PSMA、pIRES-mGM-CSF次之,pIRES空质粒最差(P<0.05),各组杀伤效果以效靶比为10:1时最高。结论:PSMA及mGM-CSF双顺反子DNA疫苗有望在前列腺癌的基因治疗中发挥积极的作用。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合乙肝疫苗增加抗HBs应答率研究

目的研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合乙肝疫苗能否提高抗-HBs应答率。方法对61例乙肝疫苗初次接种失败病例增加乙肝疫苗剂量,并对其中28例接种前24h注射GM-CSF作为研究观察组。结果研究组和对照组的抗-HBs阳性率分别为82.1%和27.3%,两者差异有显著性,χ2=18.12,P<0.005。结论乙肝疫苗接种前注射GM-CSF可以提高抗-HBs的应答。

人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子cDNA 5'端的修饰提高其在大肠杆菌的表达

应用聚合酶链反应(PCR)法和人工合成的寡聚DNA引物,对人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的cDNA作了修饰。在不改变氨基酸的前提下,将一些G或C改成A或T,以避免形成不利的二级结构,并将一些密码子换成大肠杆菌喜用的密码子。修饰后的GMCSF cDNA在大肠杆菌的表达水平高于其母株。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明其表达量约占菌体总蛋白的20％,免疫学和生物学活性检测表明该表达产物具有天然GM-CSF的构型和生物学活性。部分纯化的重组人GM-CSF已用于维持依赖人GM-CSF的TF-1细胞系的生长。

猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的克隆和序列分析及其基因表达

采取三元杂交猪的外周血,提取单核细胞总RNA,采用RT-PCR克隆猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)cDNA(GenBank登录号为DQ108393)。以pcDNA3.1(-)为质粒载体,构建猪GM-CSF基因真核表达质粒pGM-CSF,对克隆片段进行测序,并进行不同物种间同源性的比较。将重组质粒转染COS-7细胞,Western blotting鉴定表达蛋白的特异性。序列分析表明,GM-CSF的cDNA开放阅读框为435 bp,编码144个氨基酸和大部分信号肽,与用作PCR引物设计的参考序列比较,其核苷酸的同源性为97.5%,氨基酸的同源性为95.1%,同绵羊、人、牛、小鼠和犬的GM-CSF序列比较,其核苷酸的同源性分别为86.2%、80.5%、81.7%、69.7%和81.8%,氨基酸的同源性分别为78.5%、71.3%、70.3%、55.9%和71.5%。Western blotting证实目的基因可以在真核细胞中特异性的表达GM-CSF蛋白。以上结果表明,猪的GM-CSF基因被成功克隆,它存在着种属特异性。这为进一步研究该基因的生物学作用特别是利用GM-CSF增强DNA疫苗的免疫效果奠定了基础。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与生长抑素融合表达质粒对断奶仔猪生长及相关激素的影响

选择40头断奶的长大二元杂交仔猪,随机分为4组,每组10头,公母各半,其中Ⅰ组为对照组,Ⅱ-Ⅳ组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的DNA疫苗pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF＋pcS/2SS,分析这些DNA疫苗对断奶仔猪的生产性能和相关激素分泌的影响。结果显示,与Ⅱ组和Ⅳ组相比,Ⅲ组平均日增重分别提高了8.37%（P〉0.05）和17.2%（P〈0.05）,饲料利用率分别提高了14.8%和6.7%。Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组血浆中GH的含量有升高的趋势。Ⅱ组IGF-Ⅰ的含量一直处于较高的水平,Ⅲ和Ⅳ组在第2周后处于较低的分泌水平,Ⅲ组IGF-Ⅰ的峰值高于其他组。Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ组T3的含量呈下降的趋势,而Ⅲ组呈上升趋势,免疫后第8周,Ⅲ组的T3分泌水平显著高于Ⅱ和Ⅳ组（P〈0.05）,而与对照组差异不显著。Ⅰ组T4的含量不断降低,而Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组有不断升高的趋势,Ⅱ组和Ⅲ组T4的分泌一直保持在较高的水平。上述结果表明,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）对SS DNA疫苗有一定的免疫增强作用,pGM-CSF/SS的免疫效果要优于pGM-CSF＋pcS/2SS共免疫。

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子包涵体提取、复性和纯化的研究

由基因工程大肠杆菌表达的重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭＣＳＦ）以包涵体的形式存在于细胞中，通过破菌、洗涤获得包涵体，再经过溶解、凝胶过滤、复性、疏水和离子交换柱层析得到了均一的产品，经高压液相和ＳＤＳＰＡＧＥ电泳测定纯度均大于９８％，ｒｈＧＭＣＳＦ的比活为３２×１０７ＩＵ／ｍｇ，纯化获得的ｒｈＧＭＣＳＦ为一酸性蛋白，等电点约为５２，ＮＨ２末端前２０个氨基酸序列测定结果与文献报道一致。ｒｈＧＭＣＳＦ的ＮＨ２末端不均一，其中带Ｍｅｔ的分子约占５９５％，第一个氨基酸为Ａｌａ的分子约占２４６％，为Ｐｒｏ的分子约占１４６％。纯化过程中蛋白的纯化倍数为３９，生物活性总得率为６９１％，工艺重复性好。