庄河大骨鸡抗粘液病毒基因和溶菌酶基因多态性的研究

为研究庄河大骨鸡抗粘液病毒基因(myxovirus resistant,Mx)和溶菌酶基因(1ysozyme,LYZ)的多态性,本试验从大骨鸡血液中提取DNA,PCR扩增Mx和LYZ基因后分别进行RsaⅠ和HindⅢ酶切及琼脂糖凝胶电泳。研究结果表明,所选取的262只庄河大骨鸡Mx基因片段均能得到PCR扩增产物,产物大小为101 bp,经酶切后获得GG、GA和AA 3种基因型,基因型频率分别为0.744、0.229、0.027,因此大骨鸡Mx基因具有多态性;所选取的120只大骨鸡LYZ基因片段也均能得到PCR扩增产物,产物大小为590 bp,经酶切后仅获得一种基因型GG型,因此该基因此酶切位点上无多态性。本研究为庄河大骨鸡资源保存、品种选育和开发利用提供了科学依据。

MxA抗病毒蛋白的研究概况

MxA抗病毒蛋白是新发现的由I型干扰素(IFNα/β)诱导产生的分布于细胞质中的78 kD的蛋白质,具有广谱的抗病毒作用。随着对MxA研究的深入,现已清楚,MxA蛋白对多种RNA病毒和部分DNA病毒均有抑制作用(Arloric等,1990;Ordien等,2001),而且其水平高低可以作为机体IFN诱导状态的适宜标志。因此开展MxA蛋白研究具有很高的医学价值。

6种鸡形目和雁形目禽类Mx蛋白编码基因的适应性进化

为进一步了解禽类Mx基因(myxo-virus resistance gene)进化历程,结构与功能变异及筛选新的潜在抗性位点。根据GenBank中已报道的6种鸡形目(galliform)和雁形目(anseriform)禽类Mx基因编码序列,联配后进行最适核苷酸替代模型筛查,序列重组事件和核苷酸替换的饱和性检验;并采用最大似然法检测各位点承受的选择压力。AIC信息量准则检验结果表明6种鸡形目和雁形目禽类Mx基因的最优核苷酸替代模型为"GTR+G",核苷酸替换的饱和性检测结果表明序列的核苷酸替换并未饱和。单一断裂点(single break-point)和遗传算法扫描(GARD)在联配序列中发现两个断裂点,分别位于162bp和999bp处,将联配序列分为3个独立非重组部分。密码子置换模型的"位点特异模型"检测到禽类Mx基因编码序列承受了正选择作用,似然比检验(LRT)确定模型M2a和M8为正选择位点优先检测模型(P<0.05,P<0.01),分别在3部分非重组序列中检测到4个、1个和3个后验概率大于95%的正选择位点,正选择位点主要分布于禽类Mx蛋白特有的N-端结构域和Mx蛋白抗病毒作用所必须的三联GTP酶结合区,可能与Mx蛋白的抗病毒活性有关。