抗纤复方Ⅰ号对肝星状细胞细胞外基质及其降解酶表达的影响

目的:研究乙醛对肝星状细胞(HSC)细胞外基质(ECM)及其降解酶表达的影响及中药抗纤复方Ⅰ号(KXI)的干预作用.方法:大鼠HSC体外原代及传代培养,大鼠灌以KXI制备药物血清,用乙醛及药物血清处理HSC.以放射免疫分析法及RT-PCR分别检测培养上清中层粘连蛋白(LN)及HSC中α1(Ⅰ),α1(Ⅳ)型胶原及基质金属蛋白酶-1,2(MMP-1,2)mRNA的表达.结果:培养上清中LN含量在100μmol/L乙醛处理24h后显著增加(52.0±12.1vs10.0±0.3,P<0.01),100ml/L药物血清起抑制作用(19.2±7.8vs52.0±12.1,P<0.01);100μmol/L乙醛刺激HSCα1(Ⅰ)型胶原及MMP-2mRNA的表达明显增强,100mL/L药物血清抑制其作用;100μmol/L乙醛减弱HSCα1(Ⅳ)型胶原及MMP-1mRNA的表达,100mL/L药物血清则使二者表达有所增强.结论:KXI能抑制乙醛刺激的HSC中LN的分泌,α1(Ⅰ)型胶原及MMP-2mRNA的表达;而增强乙醛所抑制的HSC中α1(Ⅳ)型胶原及MMP-1mRNA的表达.

抗纤复方Ⅰ号对酒精性肝病大鼠TNF-α的影响

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)在酒精性肝病大鼠肝脏中的表达及抗纤复方Ⅰ号(KXⅠ)对其表达的影响。方法Wistar大鼠给予乙醇8～10g·kg-1·d-1,3次灌胃,共12周,制备酒精性肝病大鼠模型为酒精组,对照组每只大鼠给予生理盐水2.0ml,KXⅠ组在给予同酒精组等量乙醇的基础上,给予KXⅠ水煎剂4.0ml.kg-1·d-1,2次灌胃,共12周。实验4,8,12周末分批处死对照组、酒精组、KXⅠ组大鼠,HE染色观察肝脏组织学改变。免疫组织化学技术检测TNF-α在酒精性肝病过程中的定位及表达,并用病理图像分析仪对其结果半定量分析。结果酒精组12周末,肝小叶脂肪变,肝细胞坏死增多,炎性细胞浸润明显;KXⅠ组肝细胞坏死及炎性细胞浸润不明显。对照组的正常肝脏组织,肝细胞的胞浆中散在有TNF-α弱表达,酒精组4周末开始,以中央静脉为中心,肝细胞胞浆中TNF-α表达增多,且随着乙醇刺激时间的延长,肝细胞胞浆中TNF-α的表达呈进行性增加,差异显著(P<0.01)。结论酒精性肝病过程中,TNF-α表达进行性增强,KXⅠ能抑制TNF-α的表达,延缓肝纤维化的形成和发展。

抗纤复方Ⅰ号对酒精性肝病大鼠肝星状细胞活化的影响

目的:观察抗纤复方Ⅰ号对酒精性肝病大鼠肝星状细胞活化的影响,以探讨中药治疗酒精性肝病的机制。方法:给予Wistar大鼠乙醇8～10g.kg-1.d-1,分3次灌胃,12周制备酒精性肝病大鼠模型,对照组给予等量生理盐水,中药组在给予同酒精组等量乙醇的基础上,给予抗纤复方Ⅰ号水煎剂4.0ml.kg-1.d-1,分2次灌胃,共12周。实验4、8、12周末分批处死动物,HE及VG染色观察肝脏组织学改变,电镜下观察肝星状细胞形态学改变并检测肝内透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN)含量。结果:造模12周时,酒精组大鼠肝脏呈现重度脂肪变性,点片状肝细胞坏死及炎性细胞浸润,纤维条索形成;而中药组大鼠仅呈现轻度脂肪变,无纤维条索形成。电镜下酒精组大鼠肝细胞失去正常结构,星状细胞增多、变形,细胞外可见较多胶原纤维。中药组大鼠肝细胞及星状细胞形态基本正常,基质内亦可见少量胶原纤维。实验8周末酒精组LN浓度开始升高,12周末达到最高,与正常组及中药组比较差异有显著性意义[(37.69±5.01)vs(22.34±3.51)、(28.07±4.11),P<0.05];肝内HA浓度8周末各组间比较无统计学差异,12周末酒精组明显升高,与正常组及中药组比较,差异有显著性意义[(74.85±9.23)vs(41.26±8.34)、(53.62±4.85),P<0.01]。结论:抗纤复方Ⅰ号能降低肝内HA和LN,抑制酒精性肝纤维化形成,这与其抑制肝星状细胞活化有关。

抗纤复方I号抗酒精性肝病的实验研究

目的：利用酒精性肝病的大鼠模型,研究抗纤复方Ⅰ号(KXI)对酒精性肝病的预防作用及其机制．方法：采用乙醇灌胃法制备酒精性肝病大鼠模型．Wistar大鼠随机分为3组,正常组,酒精组及中药组.中药组在造模同时,给予抗纤复方Ⅰ号水煎剂(生药浓度4．5kg／L)4mL／kg-1,2次／d灌胃,观察12wk．实验4wk、8wk、12wk末分批处死动物,HE及VG染色观察各组大鼠肝细胞变性及纤维组织增生情况,应用病理图像分析仪对纤维组织增生进行半定量分析．电镜下观察肝星形细胞形态改变．应用TBA比色法测定各组大鼠肝组织中丙二醛(MDA)含量,羟胺法测定超氧化物歧化酶(SOD)含量．结果：HE染色酒精组4wk末即出现肝细胞坏死,脂肪变,炎性细胞浸润．12wk末脂肪变及肝细胞坏死增多,中药组8wk时才出现轻度脂肪变,肝细胞坏死及炎性细胞浸润均不明显．VG染色酒精组可见纤维组织增生,呈条索状向肝小叶内延伸,中药组无纤维条索形成．图像分析仪所示胶原面积百分比酒精组明显高于正常组及中药组(19．24±2．5vs4．6±0．7,19．24±2．5vs9±0．9,P<0．05)．电镜下观察酒精组肝细胞失去正常结构,星形细胞增多、变形,细胞外可见较多胶原原纤维．中药组肝细胞及星形细胞形态基本正常,基质内亦可见少量胶原原纤维．酒精组MDA在实验4wk末即已升高,与正常组及中药组比较差异显著(32±3vs16±7,32±3vs23±8,P<0．05),结论二抗纤复方I号具有良好的抗大鼠酒精性肝病的作用。

抗纤复方I号对酒精性肾损害PDGF-B表达的影响

目的:探讨抗纤复方I号对酒精性肾损害时血小板源性生长因子-B(platelet-derivedgrowthfactor-B,PDGF-B)表达的影响。方法:按本科室创建的方法用乙醇及抗纤复方I号直接灌胃,于4周、8周、12周末处死大鼠,应用HE染色、透射电镜等观察其病理改变;用免疫组化方法检测中药组、酒精组、正常组肾组织PDGF-B的表达。结果:中药组同酒精组相比较,随着抗纤复方I号干预时间的延长,HE染色可见肾小球系膜增殖、间质局灶性炎性细胞浸润、肾小管上皮扁平化和小管扩张等病理改变出现延迟且明显减轻。免疫组化染色,中药组PDGF-B表达也明显低于酒精组(P<0.05)。结论:抗纤复方I号有效地防治酒精性肾损害,可能是促进了酒精的代谢,或干预了致肾间质纤维化的细胞因子PDGF的生成。