棉花抗细胞凋亡基因GhDAD1的克隆、定位及表达分析

【目的】克隆陆地棉抗细胞凋亡新基因GhDAD1,为陆地棉细胞凋亡的分子机制提供依据,为培育不早衰陆地棉品种提供理论基础。【方法】采用RT-PCR以及电子克隆获得陆地棉GhDAD1的基因组序列以及全长cDNA序列并进行生物信息学分析,然后通过荧光原位杂交(FISH)技术进行染色体定位,利用real-timePCR进行表达模式分析,分析6-BA、乙烯、H2O2、SA以及NO对GhDAD1表达量的影响。【结果】棉花GhDAD1编码阅读框全长354bp,包含5个外显子,4个内含子以及232bp的5′非编码区和280bp的3′非编码区。氨基酸序列分析表明,GhDAD1蛋白属于DAD家族,与柑桔、拟南芥GhDAD1蛋白的相似性分别为91%和88%,起始密码子区符合Kozark规则,内含子剪接位点符合GT-AG规则。FISH技术将GhDAD1定位于染色体长臂上。real-time PCR分析表明,陆地棉各组织中均表达该基因,花和种胚等幼嫩组织表达量较高,并且随着衰老的进行,表达量降低。利用6-BA、乙烯、水杨酸、一氧化碳以及双氧水处理中棉所10号,qRT-PCR分析表明,6-BA、水杨酸处理能够延缓衰老,增加GhDAD1的表达量;乙烯能够加速衰老,降低GhDAD1的表达量;H2O2对GhDAD1的表达量的影响不大;而NO不同浓度影响不一样,随着浓度的升高,GhDAD1的表达量先升高后降低【。结论】陆地棉中存在抗细胞凋亡基因(GhDAD1)。

脊尾白虾抗细胞凋亡因子DAD1基因的克隆及其组织表达分析

取健康脊尾白虾（Exopalaemoncarinicauda）成体，体长（5．81±0．32）cm，体质量（1．18±0．35）g。根据本实验室已构建的脊尾白虾血细胞全长CDNA文库进行EST测序分析，获得脊尾白虾抗细胞凋亡因子DADl基因的cDNA全长并命名为EcDADl基因。该序列全长645bp，包括5非编码区184bp，开放阅读框345bp和3非编码区116bp，共编码114个氨基酸，预测分子量为12．85kD，理论等电点为8．75。同源性分析表明，脊尾白虾抗细胞凋亡因子EcDAD1氨基酸序列与其他物种DAD1有高度同源性，与斑节对虾（Penaeusmonodon）的相似性最高，为92％；与其他无脊椎动物的相似性为73％～80％。系统进化分析表明，脊尾白虾EcDAD1与斑节对虾的DAD1紧密聚为一支。荧光定量PCR分析结果表明，EcDAD1基因在脊尾白虾血细胞、鳃、肝胰腺、肌肉、卵巢、肠、胃和眼柄中均有表达，其中卵巢中的相对表达量最高。感染鳗弧菌（Vibrioanguillarum）和WSSV后6h和12h，脊尾白虾血细胞和肝胰腺中EcDAD1的表达量较对照组均显著增加（P〈0．01），且不同时间点间差异显著，表明EcDAD1基因可能在脊尾白虾抵抗病原体入侵机体的过程中具有重要作用。

抗细胞凋亡治疗缺氧缺血性脑损伤

缺氧缺血性脑损伤(hypoxia-ischemiabraindamage,HIBD)中神经细胞死亡并非简单的坏死,而存在着复杂的细胞凋亡机制,这种病理情况下的凋亡可引起或加重HIBD。如何早期中断凋亡,减轻脑损伤及后遗症的发生,是近年来的研究热点。

抗细胞凋亡蛋白DAD研究进展

结合国内外的研究,从抗细胞凋亡基因DAD(defender against cell death)的发现、核苷酸序列同源性、表达特性和蛋白结构与功能等方面,对近年来DAD蛋白的研究进展进行了综述.DAD作为寡聚糖转移酶(oligosaccharyltransferase,OST)的亚基组分,参与了内质网(endoplasmic reticulum,ER)中蛋白质的N-糖基化修饰,抑制程序性细胞死亡,与动植物的生长发育及多种生理与病理过程密切相关.

青石斑鱼抗细胞凋亡因子DAD1的克隆及表达特征分析

抗细胞凋亡因子(Defender against cell death 1,DAD1)是一种重要的内源性细胞凋亡抑制因子.采用RACE-PCR方法,结合SMART cDNA合成方法、抑制性差减杂交技术,从青石斑鱼脾脏中克隆DAD1并研究其在正常的青石斑鱼和注射了脂多糖的青石斑鱼各组织中的表达模式.结果表明:DAD1基因cDNA全长721 bp,包含一个342 bp的完整阅读框,编码一个由113个氨基酸组成的蛋白.RT-PCR半定量分析显示DAD1在正常的青石斑鱼和注射了脂多糖的青石斑鱼的脾、心、头肾、肾、肝中都有转录,在脾、肝中表达水平较高,而在肌肉中未见明显表达.DAD1在注射了脂多糖的青石斑鱼各组织中的表达量均高于正常的青石斑鱼.

杆状病毒的抗细胞凋亡基因──35k蛋白基因的结构和功能

杆状病毒的抗细胞凋亡基因──３５ｋ蛋白基因的结构和功能施先宗，陈曲侯，王章（华中师范大学昆虫学研究所，武汉４３００７０）在长期进化过程中，昆虫的杆状病毒同其它生物一样，对自己的生活环境表现出高度的适应性，并获得了某些进化上的生长优势。它们不仅能在个体...

虹鳟抗细胞凋亡因子(DAD1)基因全长cDNA克隆与进化分析

抗细胞凋亡因子1(Defender against cell death 1,DAD1)是内质网内膜上糖基转移酶复合体亚基之一。本文通过RT-PCR及RACE技术从虹鳟脑组织中克隆到DAD1基因cDNA全长序列(GenBank登录号:FJ849061)。该基因包括88 bp 5'-UTR、292 bp 3'-UTR以及342 bp开放阅读框(ORF)。该基因编码113个氨基酸,存在三个明显跨膜区,无信号肽序列。通过蛋白序列比对显示虹鳟DAD1蛋白序列与大西洋鲑、白斑狗鱼、斑马鱼以及裸盖鱼同源性均在90%以上。系统发育分析显示DAD1蛋白主要聚成两个群:脊椎动物DAD1群与无脊椎动物DAD1群。虹鳟DAD1与大西洋鲑DAD1蛋白亲源关系最近。

利用双杂交系统对SeNPV泛素与抗细胞凋亡蛋白相互作用的研究

本文报道利用酵母双杂交系统研究甜菜夜蛾核多角体病毒(SeNPV)的泛素(Ubiqutin)与抗细胞凋亡蛋白(IAP2,IAP3)相互作用的结果。使用Clontech公司的MACHMAKERGAL4Two-hybridsystem3,以病毒ubiquitin基因与酵母GAL4的DNA结合域重组表达“诱饵”蛋白,以病毒iap2或iap3基因与DNA活化域重组表达“猎物”蛋白,在低严谨型筛选培养基上均得到阳性克隆。这一结果表明,甜菜夜蛾核多角体病毒泛素与IAP2或IAP3在体外能进行相互作用,这种作用利用了酵母内源性E1和E2。SeNPV的抗细胞凋亡蛋白(IAPs)可能是泛素-蛋白酶水解途径(UPP)中的泛素连接酶(E3),或者是泛素依赖性蛋白水解酶的靶底物。

三七总皂苷抗细胞凋亡作用与MIF/AMPK的关系研究

目的我们前期的研究表明三七总皂苷(panaxnotoginseng saponin,PNS)能够抗SGOD(serum,glucoseand oxygen deprivation)诱导的H9c2细胞凋亡,本论文我们进一步探讨PNS抗缺血诱导的心肌细胞凋亡的可能作用机制。方法将心肌H9c2细胞株分为正常对照组(control),模型组(model)和PNS组。DCFH-DA和JC-1荧光探针分别检测细胞内活性氧的水平和线粒体膜电位,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡率,Western blot检测MIF,AMPK和磷酸化AMPK(p-AMPK)以及cleaved caspase-3蛋白的表达水平。结果与model组比较PNS能够稳定线粒体膜电位,降低胞内ROS水平;PNS抗细胞凋亡的作用能够被MIF拮抗剂ISO-1显著逆转(P=0.000);Western blot结果显示SGOD处理后能够明显的升高胞内活化的caspase-3蛋白(cleaved caspase-3)的表达水平,同时升高MIF和p-AMPK蛋白的表达水平,而PNS能够显著的降低cleaved caspase-3的蛋白水平,并进一步促进MIF和p-AMPK蛋白的表达。结论 PNS能够抗线粒体途径介导的心肌细胞凋亡,其抗凋亡的机制与激活MIF/AMPK有关。本研究将为进一步探讨PNS保护心脏的分子机制及将PNS更好地应用于临床治疗提供有意义的实验依据。

细胞凋亡与病毒的抗细胞凋亡

病毒的侵入可引起机体宿主细胞的凋亡 ,细胞凋亡有利于机体清除感染的细胞 ,保护自身免受病毒的侵害 ,是机体对病毒侵入的防御机制之一。一些病毒具有许多抗细胞凋亡和抗CTL活性的机制 ,如编码免疫调节分子和凋亡调节分子 ,降低细胞凋亡基因的表达以延长感染细胞的存活期 ,以利于病毒的增殖。现对细胞凋亡及病毒抗细胞凋亡的机制进一综述。

嗜淋巴细胞病毒的抗细胞凋亡策略

病毒感染细胞中诱导凋亡是一种重要的宿主细胞防御机制。然而,有的病毒却具有能编码抗凋亡蛋白或调节凋亡细胞调节物表达的基因。病毒对于宿主细胞凋亡的干扰必将导致病毒复制的增强,并可逃避细胞毒T细胞对于病毒的杀伤效应。本文综述嗜淋巴细胞病毒对抗凋亡的主要策略。

香芹酚通过抗氧化及抗细胞凋亡途径抑制大鼠卵巢衰老

目的探讨香芹酚对大鼠衰老卵巢的保护作用及其相关机制研究。方法 15月龄SD大鼠30只,随机分为模型组,阳性对照组,香芹酚组,4月龄SD大鼠10只为青年组。给药30 d后测定大鼠卵巢组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)以及一氧化氮(NO)含量和总一氧化氮合酶活性;Western-blot法检测凋亡蛋白caspase-3、Bax和Bcal-2蛋白表达。结果香芹酚有效抑制衰老卵巢MDA表达,而提高SOD、T-AOC及GSH-px在衰老卵巢中的表达(P<0.05);模型组大鼠卵巢NO含量、总NOS活性显著低于青年组(P<0.05),而香芹酚组可使其活性明显提高(P<0.05);Western-blot结果显示,与模型组比较,香芹酚组Bcl-2蛋白表达明显提高,而Bax蛋白和caspase-3蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论香芹酚可通过抗氧化应激和抗卵巢细胞凋亡作用,抑制和延缓大鼠卵巢衰老。

针灸疗法在神经系统疾病治疗中的抗细胞凋亡作用

细胞凋亡在神经系统疾病的发病和发展过程中起着重要的作用,而针灸治疗神经系统疾病能抑制细胞凋亡,使疾病得到明显的缓解。本文介绍针灸疗法在脑缺血再灌注损伤、阿尔茨海默病、抑郁或应激、脊髓损伤、帕金森病等神经系统疾病治疗中的抗细胞凋亡作用,为相关临床医务工作者提供参考。

细胞凋亡的基因调控和抗神经细胞凋亡剂的研究

细胞凋亡的基因调控和抗神经细胞凋亡剂的研究张均田段文贞吴俊芳（中国医学科学院，中国协和医科大学药物研究所）英国科学家于７０年代早期提出：正常细胞的死亡是一种主动自杀过程。这一惊人的发现是划时代的，它吸引全世界科学工作者试图解开细胞自杀死亡之谜，探索细...

基于生存分析模型抗细胞凋亡因子表达水平与胃癌放疗敏感相关性分析

目的抗细胞凋亡因子(defender against cell death 1,DAD1)具有抑制凋亡的功能,可能与肿瘤的发生以及预后有关,可作为肿瘤治疗和预后的重要靶标。本研究旨在探讨DAD1与胃癌放疗敏感性关系。方法采用肿瘤基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)公开的胃癌数据库,经数据清理后获得371例数据,采用交叉验证方法,将全部数据完全随机分为测试数据和验证数据2份。在不同DAD1表达水平下,采用Cox模型分析放疗和未接受放疗组患者生存率差异。结果分析结果表明,DAD1表达与胃癌患者总生存差异无统计学意义的关联;测试和验证数据结果表明,高表达DAD1的胃癌患者在放疗与非放疗组间总生存差异无统计学意义,多因素调整后差异也无统计学意义,测试数据和验证数据调整后HR=1.00,95%CI:0.30~3.34,P=1.00和HR=0.64,95%CI:0.26~1.60,P=0.34;而DAD1低表达的胃癌患者,接受放疗较未接受放疗的患者获得了显著的生存收益,测试数据和验证数据调整后HR=0.20,95%CI:0.04~0.68,P=0.009 7和HR=0.09,95%CI:0.01~0.52,P=0.007 4。结论低表达DAD1与胃癌放疗敏感性存在统计学意义的关联,低表达DAD1患者在接受放疗后生存率提高,提示DAD1可作为胃癌精准放疗的潜在有效分子标志物。

新的抗细胞凋亡因子——Clusterin研究新进展

Clusterin是近年来发现的新的抗细胞凋亡因子 ,尤其在肿瘤细胞中存在高表达 ,并发挥抗肿瘤细胞凋亡的作用。本文将近年来有关 Clusterin抗凋亡作用研究的新进展进行综述 ,希望能为今后对这一新的抗凋亡因子的研究提供帮助。

低氧反应元件介导的Bcl-2-shRNA对缺氧诱导抗凋亡肺血管内皮细胞的调控作用

目的探讨低氧反应元件(HRE)介导的Bcl-2基因沉默对缺氧诱导抗凋亡肺微血管内皮细胞的影响。方法设计针对Bcl-2的siRNA序列,构建含Bcl-2-shRNA和HRE的表达载体并进行慢病毒包装,重组病毒感染肺微血管内皮细胞,分别在常氧(21%)或低氧(5%)条件下培养;96 h后通过荧光标记物确认感染效率,Western blotting检测转染后细胞内Bcl-2蛋白表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Bcl-2基因沉默明显下调细胞内Bcl-2 mRNA和蛋白的表达;HRE启动子仅在低氧环境中活性显著增强;重组慢病毒感染肺微血管内皮细胞后96 h时的转染效率约为90%,细胞内Bcl-2蛋白表达下调,细胞凋亡增加;在低氧环境中,受HRE的调控,Lv-HRE-Bcl-2-shRNA组细胞凋亡率显著增高。结论低氧条件下,HRE作为氧敏感调控开关,可进一步增强Bcl-2-shRNA的作用,诱导肺血管内皮细胞凋亡,这将为肺动脉高压的血管重塑提供潜在的治疗靶标。

细胞抗凋亡信号转导

细胞抗凋亡是生物机体为了适应生存的一种主动的自我保护行为。无论是凋亡或抗凋亡均由多因素引发、多分子参与的启动、执行等信号级联放大过程。细胞抗凋亡作用的信号转导是在外界与内在生存因子刺激下 ,激活NF κB信号偶联途径 ,诱导抗凋亡的生存基因表达。PI3K和PKB/Akt在细胞抗凋亡信号传递起重要作用。