多发性骨髓瘤单克隆抗体疗法、靶向B细胞成熟抗原疗法研究进展

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种以骨髓中单克隆浆细胞恶性增殖为特征的血液系统疾病。尽管多种新型药物的应用使患者生存及预后有所改善,但很大程度上仍复发难治。单克隆抗体靶抗原、B细胞成熟抗原均在骨髓瘤细胞上高表达,是理想的靶抗原,因此针对靶抗原的单克隆抗体疗法及靶向B细胞成熟抗原疗法在多发性骨髓瘤中显示出较好的临床疗效。现结合相关文献对上述两种疗法的研究进展进行综述。

抗白细胞介素-5单克隆抗体治疗哮喘效果的Meta分析

目的:系统评价抗白细胞介素-5(IL-5)单克隆抗体治疗哮喘的临床效果。方法:在PubMed、Embase和Cochrane对照试验中央注册中心检索有关抗IL-5单克隆抗体治疗哮喘的随机对照试验文献,检索时间为截至2024年3月,对数据采用CMA 2.0软件进行Meta分析。结果:纳入21篇文献,共8717例患者,试验组4593例,对照组4124例。Meta分析结果显示,在第1秒用力呼气容积(FEV1)、哮喘生活质量问卷评分、不良事件发生情况方面,试验组优于对照组。结论:抗IL-5单克隆抗体治疗哮喘的临床效果较好,可改善患者FEV1、生活质量,且安全性较高。

一株猪CD56单克隆抗体的制备及抗原表位的初步鉴定

CD56作为NK细胞的重要表面分子,在NK细胞的发育、亚群分型和功能发挥等方面发挥重要的作用。因此,为了便于筛选不同亚群的猪NK细胞并探究其生物学功能,本研究制备了猪CD56单克隆抗体并对其抗原表位进行了初步鉴定。首先,通过生物信息软件预测并选取猪CD56蛋白胞外区的优势抗原表位的氨基酸序列(50-499aa),利用原核表达系统表达猪CD56胞外区的优势抗原表位蛋白并进行纯化和复性,之后,将猪CD56重组蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、亚克隆等试验,获得一株稳定分泌猪CD56单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1G8。Western blot结果显示,制备的猪CD56单抗可以与猪脑和脾总蛋白发生特异性结合;为了进一步验证CD56单抗的特异性,作者分离了猪外周血NK细胞,以制备的猪CD56单抗作为一抗进行间接免疫荧光试验,结果显示,制备的单抗能够与NK细胞膜特异性结合。最后,为了进一步探究单抗识别的抗原表位,作者将选取的猪CD56基因进一步截短为四个截短体(50-192 aa、193-294 aa、295-397 aa、398-499 aa)并构建真核表达重组质粒,然后转染至293T细胞进行真核表达,Western blot和间接免疫荧光结果显示,制备的CD56单抗识别的抗原表位为猪CD56蛋白的193-294 aa。综上,本研究成功制备了猪CD56单克隆抗体,并对其特异性及抗原表位进行了初步鉴定,对猪NK细胞亚群的筛选及探究猪NK细胞的生物学功能具有重要意义。

抗TL1A单克隆抗体通过影响巨噬细胞极化减轻结节病肉芽肿形成的机制研究

目的 探讨抗TL1A单克隆抗体是否可通过影响结节病中巨噬细胞的极化水平,减轻结节病肉芽肿的形成。方法 采用随机分组法将32只C57BL/6小鼠分成空白对照组、结节病组、结节病+TL1A Ab治疗组和结节病+地塞米松治疗组(n=8)。通过肺组织病理学染色(HE染色)观察各组小鼠肺部肉芽肿的形成;通过流式细胞术检测各组小鼠脾脏单个核细胞(PBMC)中M1/M2型巨噬细胞的水平。提取各组小鼠股骨和胫骨内的原代骨髓源性巨噬细胞(BMDM),培养并分别诱导各组BMDM向M1或M2型巨噬细胞方向分化,使用流式细胞术与qPCR分别测定各组小鼠BMDM中M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的细胞数目和相关因子的mRNA表达情况。结果 与结节病组相比,结节病+TL1A Ab组小鼠肺组织中肉芽肿的数目明显减少(P<0.001)。相较于空白对照组,结节病组PBMC中M1型巨噬细胞水平增高(P<0.001),给予TL1A Ab后可逆转这一现象(P<0.001);结节病+TL1A Ab组PBMC中M2型巨噬细胞的水平高于结节病组(P<0.001)。各组小鼠BMDM经诱导分化后,结节病+TL1A Ab组M1型巨噬细胞极化水平较结节病组下降(P<0.001);而TL1A Ab组M2型巨噬细胞极化水平高于结节病组(P<0.001)。结论 抗TL1A单克隆抗体通过调控结节病中巨噬细胞的极化水平而抑制结节病中的肉芽肿性炎。

食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体的制备及其特性的初步鉴定

【目的】制备抗食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体 ,用于寻找肿瘤的标志物和癌的病理诊断。【方法】以食管癌组织核基质为抗原 ,采用足垫法免疫Balb/c小鼠 ,运用杂交瘤技术建立分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株 ,制备食管癌细胞抗原片和食管癌冰冻切片 ,采用免疫组化检测并采用蛋白印迹法 (Westernblotting)分析 ,鉴定是否为特异性单克隆抗体。【结果】获得一细胞株 (1 7/E)能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株 ,1 7/E能与食管癌细胞和其他 10种癌细胞的核仁反应 ,不与正常食管上皮细胞核仁反应。Westernblotting分析表明 ,1 7/E与食管癌组织核基质 41ku处有一反应带 ,与正常食管组织核基质无反应。【结论】 1 7/E可能是对食管癌等多种肿瘤细胞核仁抗原的特异性单克隆抗体 ,为深入研究肿瘤细胞核仁抗原的生物学特性及肿瘤病理诊断提供了有效的制剂 ,并具开发的潜在价值。

单克隆抗体与多克隆抗体的混合在胱抑素C测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)中的应用

为优化兔抗人胱抑素C多克隆抗体和人胱抑素C单克隆抗体的混合比例,将不同比例混合的抗体制备成胱抑素C(胶乳免疫比浊法)测定试剂盒,对试剂盒的灵敏度进行测定,从而筛选出最适的混合比例,与进口抗体和市面上较为认可的试剂盒进行应用比较。结果表明,兔抗人胱抑素C多克隆抗体和人胱抑素C单克隆抗体最适的混合比例为70%:30%;将国产兔抗人胱抑素C多克隆抗体、进口胱抑素C多克隆抗体与最适混合比例的抗体相同质量投量料同时包被成试剂,分别命名为试剂1、试剂2、试剂3,三种试剂校准后同时进行临床样本测定及相关性分析、线性实验及抗原过剩测定,数据显示,试剂3与试剂1及试剂3与试剂2之间均具有很强的临床相关性,线性实验和抗原过剩测定数据无明显差异,都可以满足应用要求;将试剂3与市场上口碑较好的的胱抑素C试剂盒进行临床样本测定比对,实验数据显示,两者在临床应用上无明显差异;通过胱抑素C单克隆抗体和多克隆抗体混合,减少了交叉反应的可能性,实现了较好的批间和批内一致性,具备更广泛的识别范围,提供了更全面、准确的识别和检测结果。

间接ELISA法用于细胞抗原特异的单克隆抗体筛选

在单克隆抗体（ｍＡｂ）制备过程中，间接ＥＬＩＳＡ方法用于可溶性蛋白为抗原的ｍＡｂ筛选。当得不到可溶性抗原的情况下，用细胞膜抗原或克隆抗原分子，再以痘苗病毒为载体转入真核细胞制备ｍＡｂ，可以用间接免疫荧光法进行筛选。由于此种方法费时，所需细胞数量大，影...

功能差异细胞模型筛选抗肺癌功能性单克隆抗体及其抗原

目的:筛选获取抗肺癌细胞膜的功能性单克隆抗体及其靶抗原,为肺癌靶向治疗提供候选治疗剂及靶标。方法:将新鲜人肺癌组织细胞免疫BALB/c小鼠,采用脾细胞融合法制备大容量单克隆抗体库。建立肺癌细胞增殖、侵袭、迁移等定向功能差异细胞模型,采用活细胞免疫荧光与功能差异模型筛选其抗原在定向功能(细胞增殖、迁移、侵袭)差异模型细胞膜上差异表达的单抗,再经体外相应功能实验筛选具有抑制作用的功能性单抗,Western blotting鉴定这些单抗的抗原,裸鼠体内抑瘤实验鉴定部分单抗对肺癌的抑制作用。结果:细胞融合后共获得2 893株杂交瘤克隆,其中与肺癌细胞膜结合反应的309株。分别建立了3种体外肺癌细胞增殖、侵袭、迁移差异模型用于筛选,筛选获得20株单抗能显著抑制肺癌细胞增殖、10株单抗能显著抑制肺癌细胞侵袭、5株单抗能显著抑制肺癌细胞迁移(P<0.05或P<0.01)。Western blotting鉴定了其中6株的抗原。选取其中2株单抗均能在裸鼠体内显著抑制肺癌移植瘤的生长(P<0.05或P<0.01)。结论:采用大容量功能性单抗库技术结合功能差异细胞模型可批量筛选获得具有体内外抑制肺癌细胞恶性生物学行为的功能性单抗,为筛选肺癌靶向治疗剂及靶标提供了一种潜在的新方法。

抗丙型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心区合成肽作抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细节与骨髓瘤细胞ＳＰ＾２／０进行融合。经有限稀释法克隆３代后获得一株抗ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株３Ｅ７，并对其分泌抗体进行初步鉴定。杂交瘤细胞培养上清的抗体滴度为１：３２０，诱生同系小鼠腹水的滴度为１：１２８００，该ＭｃＡｂ能与ＣＰ１０特异性结合，杂交瘤细胞染色体数目为１０６条。

抗巨细胞病毒pp65抗原单克隆抗体的制备及临床初步比对检测

目的制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体并建立外周血巨细胞病毒抗原血症免疫荧光检测方法。方法 CMV AD169感染人胚胎肺成纤维细胞MRC-5后24、48、72h,超声波破碎和甲醛灭活制备CMV抗原,以及CMV pp65重组抗原免疫BALB/C小鼠,标准方法制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体。利用所得单克隆抗体建立检测外周血巨细胞病毒抗原血症检测的实验方法,并与进口试剂盒CMV BriteTM Kit进行比对。结果共有两株杂交瘤细胞产生特异性抗体,克隆名称为13D1-3和29F1-1,免疫球蛋白亚型分别是IgG1型和IgG2a型,制备的腹水抗体纯化后仍具有良好的免疫学特性。单克隆抗体13D1-3与CMV BriteTM Kit试剂盒比对,阳性符合率为88.8%,阴性符合率为98.9%,总符合率为97.3%,Kappa值为0.895,吻合度较高。结论成功制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体,建立以13D1-3单克隆抗体为基础的检测外周血巨细胞病毒抗原血症方法,与CMV BriteTM Kit试剂盒比对具有良好的符合性。

抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体的前列腺癌免疫病理研究

目的观察前列腺干细胞抗原(PSCA)在前列腺癌中的表达情况,探讨其与前列腺癌病理组织学分级及临床分期的关系。方法采用EnVisionTM两步免疫组织化学染色法,以抗人PSCA单克隆抗体检测正常前列腺、前列腺增生、前列腺癌及膀胱、肾脏等组织中PSCA的表达。结果PSCA在5例正常前列腺组织、10例前列腺增生组织、38例前列腺癌组织中有不同程度的阳性染色;膀胱、肾脏等正常组织的染色为阴性。95%(38/40例)的前列腺癌PSCA染色呈阳性、强阳性染色,50%～100%的肿瘤细胞着色,与前列腺增生及正常前列腺组织相比,其染色强度及范围的差异有显著性(P<0.01),但与前列腺癌的病理分级和临床分期不相关。结论前列腺干细胞抗原具有前列腺组织特异性,可用于前列腺癌免疫病理、放射免疫显像诊断及免疫治疗的研究。

抗入肝细胞癌单克隆抗体的产生及其相应抗原P60的免疫组化定位研究

本文用肝癌手术标本,制备细胞悬液,免疫BALB/c小鼠,融合产生杂交瘤,用ABC染色法筛选单克隆抗体,获得特异性较好的杂交瘤-HAb_(18),抗体亚类为小鼠IgG1,抗原经亲和层析获得,分子量为60KD,过碘酸-Schiffs染色阴性,脂蛋白电泳阴性,PI:8.2。肝癌免疫组化染色阳性率为75％。

抗人红细胞M型抗原单克隆抗体的研制及初步应用

应用杂交瘤枝术,用人M型RBC免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞系NS-1融合,筛选出抗M血型抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株13H_2;经过8个多月连续传代培养增殖良好,仍能稳定分泌效价高、特异性强的单克隆抗体。细胞培养上清效价1∶512,亲和力11s。通过将此株单抗用于血型检测、标准红细胞谱细胞的鉴定和在法医上检测血痕,均证明此株单抗识别的只是红细胞上的M血型抗原,与其它血型抗原无关。较多克隆抗M型抗原血清特异性强,效价高,亲和力好,是检测MN血型的良好诊断试剂。

抗人白细胞分化抗原单克隆抗体研究进展

作为人白细胞特征标志及功能结构的分化抗原对造血细胞及血液有形成份的分化、发育、识别、激活及其生物学功能具有非常重要的价值。近年来。

用单克隆抗体识别出一种与马立克病肿瘤细胞相关的淋巴细胞表面抗原

从经马立克病病毒（ＭＤＶ）诱发的肿瘤细胞系ＭＳＢ－１细胞免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合中，筛选到一株杂交瘤细胞１４Ｂ３６７。在酶标抗体和荧光抗体反应中，单抗１４Ｂ３６７对ＭＳＢ－１细胞及ＭＤＶ诱发的另二株肿瘤细胞系ＲＰ４和ＲＰ１细胞表现明显的阳性反应，但与鸡白血病病毒及网状内皮增生病病毒诱发的肿瘤细胞系ＲＰ９和ＲＰ１３，以及ＳＰＦ鸡的脾、胸腺、腔上囊细胞仅产生微弱的交叉反应。免疫转印试验和免疫沉淀反应表明，单抗１４Ｂ３６７可从ＭＳＢ－１及ＲＰ１细胞中识别出大小分别为９０、１０５－１１０、１４０－１４５Ｋｄ３条蛋白带，从ＲＰ４细胞中识别出大小为７０、８５、１３０，１３５Ｋｄ３条带，它们是糖蛋白或其前体。但ＲＰ９、ＲＰ１３细胞及脾、胸腺细胞、纤血球、鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）及ＭＤＶ感染ＣＥＦ均呈阴性反应。然而，单抗１４Ｂ３６７也能从７２和１０×７品系鸡的外周血淋巴细胞识别出一条大小为１３０－１３５Ｋｄ或１４０－１４５Ｋｄ的条带，表明由单抗１４Ｂ３６７识别的与ＭＤＶ转化细胞上相关的蛋白质是一种与ＭＤＶ无关但存在于某些亚群正常淋巴细胞表面的一种抗原。对该抗原特性的比较表明，这是一种不同于其它已报道的淋巴细胞表面抗?

用单克隆抗体筛选小细胞肺癌相关抗原基因

用分子生物学技术克隆肿瘤相关抗原基因对认识肿瘤抗原本质、深入研究肿瘤抗原的结构和功能、研究肿瘤多肽疫苗有重要意义。我们已获得一组抗人小细胞肺癌单克隆抗体，并在体外证实该抗体所识别的抗原在靶细胞有较好的特异性和较高分布密度，是多肽性抗原决定簇。在此基础上，以抗体为探针，筛选小细胞肺癌基因库，目的在于寻找编码抗体所识别抗原的肿瘤相关基因。

巨细胞病毒感染的快速诊断——低速离心和单克隆抗体间接免疫荧光方法检测早期抗原

应用低速离心和巨细胞病毒早期核抗原单克隆抗体间接免疫荧光方法(简称DEACF),检测临床标本中巨细胞病毒(CMV),并与传统病毒分离方法进行比较。结果:139份临床标本病毒分离方法阳性16份(11.5%),细胞病变(CPE)出现时间平均9.2日,其中2份DEACF检测阳性;DEACF检测阳性18份(13.0%),培养16h61.1%出现阳性,培养88h可检出全部阳性标本,其中4份病毒分离阴性标本中,3份有证据不是DEACF的假阳性反应。DEACF的敏感性为89.5%,特异性为99.2%。DEACF检测的139份标本中,用低速离心可使培养88h的阳性检出率从未离心的44.4%提高到100%。

人巨细胞病毒重组抗原及单克隆抗体在ELISA中的应用

用重组人巨细胞病毒（rhCMV）gp52蛋白作抗原及相应的单克隆抗体酶标记物建立捕获ELISA,检测人血清中的HCMV特异性IgM抗体。其工作浓度均由方阵滴定法确定。并进行精密度、特异性和干扰实验。用该法检测体检献血员 病毒性肝炎患者及疑似CMV感染的肝炎综合症患者血清共计939份。结果gp52蛋白抗原最佳浓度为1μg/ml,酶标单抗的工作浓度为1:1600,批内平均变异系数CV3.7％,批间CV7.9％。634例献血员IgM抗体阳性17例（2.7％）;288例病毒性肝炎患者,阳性10例（3.5％）;17例肝炎综合症患者,阳性11例（64.7％）。均经免疫印迹法证实。该组合特异性强,灵敏度高,不受类风湿因子的影响,结果可靠,优于全病毒抗原构成的检测试剂。适用于临床诊断和流行病学调查。

三株肝癌单克隆抗体相应抗原在肝癌细胞中的表达与分布

应用免疫细胞化学方法、图像分析技术和免疫电镜技术 ,对 3株肝癌 m Abs A10 ,E5和 F11在肝癌细胞株中的表达情况及分布特点进行了研究。结果显示 :3株单抗抗原在肝癌细胞株 HHCC中均有较高表达 ;单抗 A10 ,F11相应抗原主要分布在肝癌细胞的胞膜和胞浆中 ,而在胞核上无明显分布。单抗 E5相应抗原除分布在胞膜和胞浆外 ,在细胞核上也有明显浓聚。本实验明确了 3株肝癌单抗相应抗原在肝癌细胞中的分布特点 ,对于深入分析抗原的本质有重要参考价值。