血清抗缪勒管激素(AMH)联合性激素检测在预测卵巢早衰中的应用价值

目的研究血清抗缪勒管激素(anti mullerian hormone,AMH)联合基础性激素检测在预测卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)方面的临床应用价值。方法以2018年9~12月蚌埠医学院第一附属医院诊治的38例卵巢储备功能下降(diminished ovarian reserve,DOR)女性患者(DOR组)及35例POF女性患者(POF组)作为实验组,对照组为同期健康体检且月经周期正常的28例女性。3组女性的血清基础性激素如血清卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、雌二醇(estradiol,E2)以及AMH的水平均采用罗氏电化学发光全自动免疫分析仪检测,检测结果进行对比分析。结果POF组血清AMH水平于三组内最低,DOR组血清AMH水平呈显著减少,AMH水平最高为对照组,三组差异具备统计学意义(P<0.05)。相较于对照组,POF组LH、FSH表达水平更高,DOR组中也略有升高,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。三组中E2水平最低为POF组,相较于正常对照组,差异具备统计学意义(P<0.05),但对照组、DOR组无显著差异。结论POF、DOR患者以及正常健康女性中AMH的表达水平不同,联合检测血清中性激素水平在诊断和预测早期卵巢早衰具有一定的临床应用价值。

双氢睾酮对小鼠卵泡颗粒细胞增殖与抗苗勒管激素表达的影响

【目的】探讨双氢睾酮(DHT)对小鼠颗粒细胞增殖与抗苗勒管激素(AMH)表达的影响。【方法】给3周龄的昆明小鼠注射孕马血清促性腺激素(PMSG,10 IU/只)以获取颗粒细胞,颗粒细胞传代后48 h HE染色鉴定形态,绘制颗粒细胞的生长曲线,免疫荧光法鉴定促卵泡素受体(FSHR)的表达。当第2代颗粒细胞汇合度达到50%时,先用无血清的DMEM/F12培养基饥饿处理12 h,然后在培养基中添加不同浓度的DHT(0、10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)、10^(-5)mol/L),培养48 h后检测颗粒细胞增殖情况,实时荧光定量PCR法及ELISA法分别测定AMH基因及蛋白的表达。在颗粒细胞培养液中分别添加10^(-6)mol/L Flutamide(雄激素受体(AR)特异性抑制剂)、10^(-7)mol/L DHT、10^(-7)mol/L DHT+10^(-6)mol/L Flutamide、10^(-5)mol/L DHT、10^(-5)mol/L DHT+10^(-8)mol/L 11-ketodihydrotestosterone(AR特异性激动剂),分别记为F、D7、DF、D5、DK组,以不添加药物为对照组。培养48 h后,检测各组颗粒细胞增殖及AMH蛋白含量。【结果】体外培养的小鼠颗粒细胞呈梭形或铺路石状,生长曲线呈S形,细胞普遍表达FSHR;与0 mol/L DHT组相比,10^(-8)、10^(-7)mol/L DHT组细胞增殖分别显著和极显著增加(P<0.05;P<0.01),10^(-5)mol/L DHT组细胞增殖显著降低(P<0.05);10^(-7)mol/L DHT组AMH基因的相对表达量和AMH蛋白含量均极显著增加(P<0.01)。与D7组相比,DF组颗粒细胞增殖和AMH蛋白含量均极显著降低(P<0.01);与D5组相比,DK组颗粒细胞增殖和AMH蛋白含量均极显著升高(P<0.01)。【结论】10^(-7)mol/L DHT能够显著促进颗粒细胞增殖和AMH表达,而10^(-5)mol/L显著降低了颗粒细胞增殖以及AMH表达,且AR介导了DHT调控颗粒细胞增殖和AMH表达。

促性腺激素释放激素类似物缓解环磷酰胺导致卵巢损伤的机制研究

目的:通过动物实验和细胞实验初步探索促性腺激素释放激素类似物在环磷酰胺暴露下保护卵巢功能的机制。方法:构建乳腺癌荷瘤小鼠36只,随机分成Control组,CTX组和CG(CTX+GnRHa)组,药物干预后麻醉下剥离肿瘤和子宫卵巢并称重,计数卵巢原始卵泡和生长卵泡数目,提卵巢蛋白进行Western blot检测抗缪勒氏管激素(Anti-Müllerian hormone,AMH)蛋白表达量,提取卵巢RNA进行qRT-PCR实验检测mRNA水平,心尖取血检测血清AMH水平。卵巢颗粒细胞加药处理36小时后,收细胞蛋白进行Western blot检测AMH蛋白表达量,提细胞RNA进行qRT-PCR检测mRNA水平,ELISA法检测细胞培养基上清中AMH水平。结果:成瘤后第21天,CTX组和CG组小鼠肿瘤质量无统计学差异(P>0.05)且均小于Control组(P<0.05);CTX组子宫和卵巢的总重量均显著低于Control组和CG组(P<0.01),卵巢内原始卵泡数量均低于Control组和CG组(P<0.001),生长卵泡数量无统计学差异(P>0.05)。动物实验,Western blot结果提示,CTX组卵巢AMH蛋白含量显著高于Control组或CG组(P<0.05);由ELISA结果提示,CTX组血清AMH蛋白浓度显著低于CG组(P<0.01)。细胞实验,由Western blot可见,CTX组AMH蛋白含量显著高于Control组和CG组(P<0.05);由ELISA实验可见,CG 750组和CG1000组培养基上清的AMH蛋白浓度均高于对应CTX剂量组(P<0.01)。无论在动物实验还是细胞实验中,各组AMH的mRNA表达水平均无统计学差异(P>0.05)。结论:在CTX化疗的同时运用GnRHa,可以在不干扰化疗疗效的前提下,通过减少CTX所致细胞内AMH潴留程度,增加细胞外和血清中的AMH浓度从而发挥保护卵巢储备的功能。