枸杞抗羟脯氨酸细胞变异系筛选及其耐盐特性的研究

试验以枸杞(Lycium barbarum L.)成熟胚诱导的胚性愈伤组织为材料研究了:(1)^(60)Co-γ射线诱变处理对愈伤组织的影响;(2)耐羟脯氨酸(HYP)愈伤组织变异系的筛选;(3)耐HYP愈伤组织变异系的耐盐性及稳定性分析;(4)耐HYP愈伤组织变异系生理生化特性;(5)变异系的分化和再生苗的生理生化特性。研究结果表明:由胚性愈伤组织经30Gy的^(60)Co-γ辐射处理,在含16mmol/L HYP选择培养基和无HYP培养基上交替培养4代,分离出耐HYP的愈伤组织变异体;该变异体游离脯氨酸含量比对照高3.3倍,其再生植株叶片游离脯氨酸比对照高13.5倍。

柑桔抗羟脯氨酸细胞变异系的选择及其抗寒性研究

采用γ射线诱变与高浓度羟脯氨酸（ＨＹＰ）离体选择的方法，获得抗羟脯氨酸（ＨＹＰ）锦橙悬浮细胞系，并再生植株。抗性细胞系比供体细胞系（对照）含有较高的脯氨酸（Ｐｒｏ），有较高的ＰＯＤ与ＣＡＴ活性及较强的抗ＨＹＰ能力，经冷驯化后抗性细胞系的抗寒性比供体细胞提高１．４℃，同时进一步加大了抗性细胞系在抗氧化酶ＳＯＤ、ＣＡＴ活性和脯氨酸（Ｐｒｏ）、可溶性糖含量及水势上与供体的差异。这表明，抗氧化酶活性的提高及渗透调节能力的加强与抗性系抗寒性的增强有关。

苜蓿培养细胞抗羟脯氨酸变异体的筛选和特性分析

以返地卫星搭载的苜蓿（ＭｅｄｉｃａｇｏｓａｔｉｖａＬ．）种子为实验材料，取其无菌苗下胚轴切段诱导愈伤组织，该愈伤组织经正筛选法，获得抗脯氨酸类似物Ｌ羟脯氨酸（Ｈｙｐ）的变异细胞系（Ｈｙｐｒ）．Ｈｙｐｒ脱离选择压力３ｍｏ后，对Ｈｙｐ的抗性仍比对照强，ＦＷ细胞内游离脯氨酸ｗ＝０．７２ｍｇ／ｇ，是ＣＫ的３．４３倍，同时还具有对ＮａＣｌ和ＰＥＧ的交叉抗性．和ＣＫ相比，Ｈｙｐｒ愈伤组织可溶性蛋白质ＳＤＳＰＡＧＥ图谱出现两条新多肽（Ｍｒ≈５６×１０３、３２×１０３）；其过氧化物酶同工酶谱中酶活性明显高于对照，并出现１条新带，酯酶同工酶酶谱中亦出现３条新带．这些特性分析表明，该变异细胞系对Ｈｙｐ的抗性是稳定的．

紫花苜蓿耐羟脯氨酸变异体的筛选及抗性研究

以紫花苜蓿Medicagosativa(敖汉苜蓿和龙牧801苜蓿)种子为材料,培养无菌幼苗。以无菌苗的茎段为外植体,诱导愈伤组织,并用叠氮化钠(NaN3)200 mg/L对愈伤组织进行诱变,以脯氨酸类似物L-羟脯氨酸(L-Hyp)作为选择压力,通过在含半致死浓度的L-Hyp(8 mmol/L)选择培养基及无L-Hyp培养基上交替培养,分离出抗L-Hyp的愈伤组织变异体。该变异体以高脯氨酸含量为特征,其脯氨酸含量分别比原型高2.84倍(敖汉)和3.17倍(龙牧801),同时进一步测定其生理生化指标,发现变异体的可溶性糖含量是对照的1.56(敖汉)倍和1.76倍(龙牧801),过氧化物酶(POD)活性与原型相比差异极显著。分别对2种苜蓿愈伤组织进行聚乙二醇(PEG)(敖汉)和低温(龙牧801)胁迫处理,结果显示,变异体具有更强的抗逆性(抗旱、抗寒),能更好的适应恶劣(干旱、寒冷)的生长环境。

无花果细胞系耐盐性与抗氧化酶活性的变化

经 60Coγ射线辐射后再由羟脯氨酸筛选出的无花果抗羟脯氨酸细胞AH 具有更强的耐盐力。将这些细胞进一步分成不同的细胞系, 培养在含有NaCl167 mmol/L的MS培养基上,7 d 后, 不同细胞间存活率和相对生长量表现出一定差异, 最高的是AH22 和AH33 ,而AH2 细胞几乎全部死亡。盐胁迫诱导绝大多数细胞SOD、POX、CAT和APX 活性增加, 而且盐分对细胞生长的抑制程度与POX、CAT和APX 活性增加倍数存在一定的负相关关系, 而SOD相反。耐盐细胞AH22 的POX、CAT 和APX 活性分别增加了24 .1 倍、48.7 倍和16.5 倍。