抗肝吸虫成虫单抗的制备及其在感染豚鼠血、尿循环抗原检测中的初步应用

目的 :制备抗肝吸虫成虫单抗 ,用于检测肝吸虫宿主血、尿中肝吸虫循环抗原 ( CAg)。方法 :采用杂交瘤技术 ,制备抗肝吸虫成虫单抗 ,经鉴定、筛选后 ,以特异性、敏感性均高的单抗做双抗体夹心 EL ISA,检测肝吸虫动物宿主——感染豚鼠血、尿中的肝吸虫CAg。结果 :获得 4株稳定分泌抗肝吸虫成虫单抗的杂交瘤细胞株 D2 G8、D2 E1 1 、E1 1 H8和 H3B4 ,其 Ig类型鉴定结果均为 Ig G1,κ( kappa)型 ;其腹水单抗效价分别为 1∶ 640 0 0、1∶ 12 80 0 0、1∶ 3 2 0 0 0及 1∶ 2 0 0 0 ;其中 D2 G8、D2 E1 1 和 E1 1 H8的免疫组化显示均定位于肝吸虫成虫的皮层。其中 ,D2 G8、D2 E1 1 和 E1 1 H8与血吸虫、肺吸虫、姜片虫、牛丝虫成虫抗原和棘球蚴囊液、囊虫抗原均无交叉反应 ,H3B4 则仅与血吸虫成虫抗原有弱阳性交叉反应。以混合 D2 E1 1 、E1 1 H8株单抗作包被抗体 ,以 D2 G8株单抗作酶标抗体 ,建立 EL ISA夹心法进行检测。感染豚鼠血、尿中肝吸虫 CAg检出率分别为 95 .4 %和 90 .9% ,CAg平均检出量分别为 0 .3 3 7μg/ml和 0 .13 4 μg/ml。血、尿 CAg联合检测检出率则可达 10 0 %。结论 :抗肝吸虫单抗 D2 E1 1 、E1 1 H8及酶标 D2 G8联合 EL ISA检测肝吸虫宿主血、尿中肝吸虫CAg具有高度的敏感性和特异性 ,对?