酶联免疫吸附法检测抗肝素/血小板因子4复合物抗体的临床意义

目的:评价酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗肝素/血小板因子4复合物抗体对临床诊断肝素诱导的血小板减少症(HIT)的敏感性及特异性。方法:选取应用肝素制剂患者197例(男120例、女77例),ELISA法进行HIT抗体检测,并根据临床4Ts评分法分析其敏感性和特异性。结果:临床诊断HIT患者6例,ELISA法检测HIT抗体对诊断HIT的敏感性为83.3%,特异性为90.0%,阳性预测值为20.8%,阴性预测值为99.4%。结论:4Ts评分系统仍是目前临床诊断HIT的重要依据,HIT抗体的检测对HIT诊断的敏感性及特异性较好、可用于辅助诊断HIT。

肝素／血小板因子4抗体与肝素诱导的血小板减少症

肝素诱导的血小板减少症(heparin-induced thrombocytopenia,HIT)是肝素治疗引起的严重并发症,可导致血栓形成和栓塞。HIT的发病机制主要与肝素/血小板因子4抗体介导的免疫反应有关,IgG类是主要的致病抗体,能与肝素和血小板因子4结合形成复合物,引起血小板凝集和凝血反应增强,同时抗体还通过作用于血管内皮细胞和单核细胞参与HIT的形成。抗体相关的实验室检测包括功能性血小板试验和免疫学试验,临床表现结合实验室检测有助于本病的早期诊断和治疗,但是在检测方面目前尚没有理想的方法。本文就AHPF4抗体、HIT发病机制、临床实验室检测和免疫学试验检测等问题进行了综述。

血液透析患者体内肝素-血小板因子4抗体的检测及其临床意义

目的检测89例维持血液透析的患者体内IgG型抗肝素-血小板因子4(H-PF4)抗体发生率,并探讨该抗体的作用。方法取血液透析患者透析前的血清,应用酶联免疫吸附法检测IgG型抗H-PF4抗体。结果8例(8.9%)患者IgG型抗H-PF4抗体阳性,其中3例发生血栓性并发症,抗体阳性组中动静脉血栓性并发症的发生率明显高于抗体阴性组(3/8vs8/81,P<0.05)。结论IgG型抗H-PF4抗体可能是血液透析患者发生血栓性并发症的危险因素。

肝素/血小板因子4抗体在维持性血液透析患者中的临床意义

目的分析维持性血液透析(MHD)患者肝素/血小板因子4(H/PF4)抗体的阳性率,并探讨其临床意义。方法选择54例海军军医大学(第二军医大学)长征医院肾内科收治的MHD患者作为研究对象,所有患者以普通肝素/低分子肝素抗凝透析≥3个月,排除感染及其他活动性疾病。收集MHD患者透析前血清,采用颗粒免疫过滤法检测IgG型H/PF4抗体。比较H/PF4抗体阳性与阴性患者的一般情况、血红蛋白水平、血小板计数、抗凝方式(普通肝素/低分子肝素)、抗凝剂剂量及透析方式(常规血液透析/夜间延长血液透析)的差异。随访3年比较H/PF4抗体阳性与阴性患者血小板变化趋势、血管通路血栓形成发生率、心血管事件、脑血管事件、住院率及死亡率等的差异。结果所有MHD患者H/PF4抗体阳性率为63.0%(34/54)。H/PF4抗体阳性和阴性患者在性别、年龄、透析龄、血红蛋白水平、血小板计数方面的差异均无统计学意义(P均>0.05)。H/PF4抗体阳性与原发病、抗凝方式、抗凝剂剂量及透析方式均无关(P均>0.05)。经过3年的随访,H/PF4抗体阳性和阴性患者的血小板变化趋势无差异(P>0.05)。H/PF4抗体阳性患者与H/PF4抗体阴性患者比较,血管通路血栓形成发生率差异无统计学意义[14.7%(5/34)vs 25.0%(5/20),P>0.05],心血管事件、脑血管事件、住院率及死亡率差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论MHD患者H/PF4抗体阳性率高。H/PF4抗体的产生与使用肝素的种类、剂量及透析方式均无关。H/PF4抗体阳性对血小板计数及不良事件包括血栓形成、心脑血管事件等均无明显影响。

一株抗人血小板第4因子单克隆抗体(SZ-95)的特异性鉴定

目的 研究一株新制备的抗人血小板第４因子（ＰＦ４）单克隆抗体（ｍＡｂ）ＳＺ－９５的抗原表位和对ＰＦ４结合肝素功能的影响。 方法通过间接ＥＬＩＳＡ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ以及肝素－ＰＦ４复合物ＥＬＩＳＡ研究ＳＺ－９５所识别的抗原决定簇和其对ＰＦ４生物学功能的影响。 结果 这株特异性识别人ＰＦ４的ｍＡｂ不识别与ＰＦ４高度同源的β－血小板球蛋白（β－ＴＧ），以及包括ＰＦ４分子中部大部分β折叠的合成多肽（Ｐ３４－５８）。并且，抗体结合肝素－ＰＦ４复合物的数量随复合物中的肝素量增加而减少。结论我们推测ＳＺ－９５识别的抗原表位可能位于人ＰＦ４ Ｎ末端的可变区域或者Ｃ末端α螺旋。并且ｍＡｂ结合肝素－ＰＦ４复合物的肝素剂量依赖性改变，说明ＳＺ－９５识别的抗原表位与肝素与ＰＦ４的结合位点有关，可能影响ＰＦ４中和肝素的功能，有助于ＰＦ４结构和功能的进一步研究。

矫形手术患者使用方达肝素和依诺肝素预防血栓栓塞中的抗血小板因子4／肝素抗体

肝素引起血栓栓塞（HIT）是通过血小板激活IgG抗体产生的，而这种被激活的IgG抗体可识别结合到肝素上的血小板因子4（PF4）。各种肝素的免疫原性都不同，其间，未经分馏的肝素（UFH）可比低分子量肝素（LMWH）诱导出更多的抗PF4／肝素抗体，UFH还可引起更多的HIT。一般认为方达肝素（fondaparinux）不具有免疫原性，它是抗凝血酶结合戊糖形成的一种合成的抗凝血剂。

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进脐静脉内皮细胞迁移及炎症因子表达

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/β2GPI antibody)复合物促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移和炎症因子的表达以及与Toll样受体4(TLR4)的关系。方法 oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、脂多糖(LPS)等刺激物处理HUVEC,采用划痕实验观察HUVEC的迁移能力;根据实验分组,收集HUVEC的总蛋白和总RNA,实时荧光定量PCR和Western blot法检测TLR4的mRNA和蛋白表达。利用上述刺激物分别刺激经TLR4抑制剂TAK-242预处理和未经处理的HUVEC,实时定量PCR检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA水平,ELISA检测细胞上清液中MCP-1、IL-1β、IL-6的蛋白水平。结果 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物加速HUVEC迁移和诱导TLR4表达,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进MCP-1、IL-1β、IL-6三种因子的mRNA和蛋白表达,TAK-242能够显著抑制该现象。结论 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进HUVEC迁移和相关炎症因子的表达,该过程与TLR4密切相关。

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进A7r5细胞趋化和迁移及脂质累积

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab)复合物对A7r5大鼠胸主动脉平滑肌细胞迁移、趋化和脂质累积的影响,以及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法体外传代细胞株,分别以oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、β2GPI、抗β2GPI抗体、β2GPI/β2GPI-Ab复合物、oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物刺激经TLR4阻断剂TAK-242预处理和未经预处理的A7r5细胞。提取细胞总RNA,实时荧光定量PCR检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、乙酰辅酶A乙酰基转移酶1(ACAT1)的mRNA水平;收集培养上清,ELISA检测细胞上清液中MCP-1、MMP-9的蛋白水平;划痕实验观察A7r5细胞的迁移。以oxLDL、oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物刺激经TAK-242预处理和未经处理的A7r5细胞,用胆固醇试剂盒检测细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)含量并计算胆固醇酯(CE)的含量。结果oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物促进A7r5细胞的迁移,加速胞内胆固醇的累积,促进MCP-1、MMP-9、ACAT1的表达,而TLR4阻断剂TAK-242能够抑制上述现象。结论 oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物能经TLR4依赖的方式促进A7r5细胞趋化、迁移和脂质累积,参与动脉粥样硬化进程。

ox-LDL/β2GPI/aβ2GPI复合物促进小鼠RAW264.7细胞凋亡和炎症因子表达

目的 探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(ox-LDL/β2GPI/aβ2GPI)复合物对小鼠RAW264.7细胞凋亡和炎症因子表达的影响及机制。方法 分别用培养基、ox-LDL、β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、ox-LDL/β2GPI复合物、ox-LDL/抗β2GPI抗体复合物和ox-LDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物处理细胞。用TAK-242阻断Toll样受体4(TLR4)、雷帕霉素(rapamycin)阻断哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)探究相关通路的作用。最后,用不同浓度的TNF-α刺激细胞。用凋亡试剂盒检测细胞的凋亡,实时定量PCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的mRNA表达,Western blot法检测TNF-α、IL-1β、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)的蛋白水平。结果 ox-LDL/β2GPI/aβ2GPI复合物能够诱导细胞凋亡、Bcl2表达降低、c-caspase-3表达增加,还可促进TNF-α和IL-1β表达,通路抑制剂可部分减轻凋亡水平和炎症因子表达;一定浓度的TNF-α可促进细胞凋亡。结论 ox-LDL/β2GPI/aβ2GPI复合物通过TLR4、mTOR通路诱导RAW264.7细胞表达炎症因子,促进细胞凋亡。

CD4^+T细胞在原发性免疫性血小板减少症中作用机制的研究进展

原发性免疫性血小板减少症（Immune thrombocytopenic purpura,ITP）属于自身免疫性出血无序性疾病,具有器官特异性。该病存在血小板减少、血小板生存时间缩短及抗血小板抗体出现、骨髓巨核细胞增多伴成熟障碍等特征。在一些情况下,ITP患者出血并不明显,已经导致了其缩写含义由先前的特发性血小板减少性紫癜修订为免疫性血小板减少症。

二种检测肝素/PF4复合物抗体免疫学方法在肝素诱导的血小板减少症中的诊断价值

目的比较颗粒免疫过滤法(PIFA)和乳胶免疫比浊法(LIA)检测肝素/血小板因子4(PF4)复合物抗体在诊断肝素诱导的血小板减少症(HIT)中的效力.方法前瞻性分析2016年5月至2018年7月连续送检至我院行肝素/PF4复合物抗体(HIT抗体)检测的94例疑诊HIT患者的临床资料、检测结果,并随访治疗方案及疗效.根据患者临床资料评估4Ts评分、结合患者临床结局诊断或排除HIT,并据此分析单独或联合应用PIFA法及LIA法的灵敏度、特异度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV),并以4Ts评分为先验概率分析其诊断HIT的后验概率(PTP).结果在94例患者中,15例(16.0%)患者临床诊断为HIT,中危组37例中有6例(16.2%),高危组15例中有9例(60.0%).PIFA法的诊断效力:灵敏度100%(15/15),特异度51.9%(41/80),PPV 28.3%(15/53),NPV 100%(41/41),4Ts评分中危、高危的阳性PTP分别为28.7%、75.7%,阴性PTP均为0%.LIA的诊断效力:灵敏度66.7%(10/15),特异度94.9%(75/79),PPV 71.4%(10/14),NPV 93.8%(75/80),4Ts评分中危、高危的阳性PTP分别为71.8%、95.2%,阴性PTP分别为6.3%、34.4%.受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,LIA法诊断价值大于PIFA法,两种检测方法联合应用优于单一检测方法.结论4Ts评分系统是临床诊断HIT的重要依据,联合肝素/PF4抗体检测可提高确诊和除外HIT的准确性.尽管LIA法的诊断价值优于PIFA法,PIFA法以其100%的NPV和临床操作方便性也具备一定优势.联合应用两种方法检测可获得更高的诊断效力.

血液透析中肝素／血小板因子4复合物抗体的研究状况

随着肝素在血液透析中的广泛应用，肝素／血小板因子4复合物抗体（AHPF4抗体）的产生及其引起的并发症已日益受到重视。长期使用肝素抗凝的维持性血透患者，具有产生AHPF4抗体的风险，AHPF4抗体可以导致肝素诱导的血小板减少症以及血栓形成。AHPF4抗体介导的HIT治疗原则主要为停用肝素，选择其他抗凝药物。

维持性血液透析患者血清抗-PF4/H抗体阳性率、危险因素及与血栓栓塞发病率的相关性

目的探讨维持性血液透析患者抗-PF4/H抗体的阳性率,分析影响抗体的危险因素及其与血栓栓塞事件的相关性。方法招募解放军总医院血液净化中心157例患者,分别设计横断面和队列研究,利用统计学方法分析抗-PF4/H抗体水平的影响因素及其与血栓栓塞事件的关系。结果 40.8%(64/157)的患者表现为抗-PF4/H抗体阳性;血清抗体阳性组与抗体阴性组患者既往血栓栓塞事件、抗凝剂类型、每周透析总时间和透析龄等因素差异具有统计学意义(P<0.05);抗体阳性患者血栓栓塞事件发生率高于阴性患者(P<0.05),抗-PF4/H抗体对血栓栓塞的危险度RR=2.349。服用阿司匹林或氯吡格雷的抗体阳性患者血栓栓塞发病率低于未服用抗血小板药物的透析患者。结论本组维持性血液透析患者抗-PF4/H抗体阳性率为40.8%,影响该抗体水平的危险因素包括既往血栓栓塞事件、抗凝剂类型、每周透析总时间和透析龄等。该抗体可以作为血栓栓塞事件的标志物,抗血小板药物对预防抗体阳性患者血栓栓塞事件效果显著。

1例冠状动脉介入术后肝素诱导的血小板减少症患者的护理

肝素(heparin)是目前临床常用的抗凝药物之一,其使用范围在不断扩展,肝素诱导的血小板减少症(heparin-induced thrombocytopenia,HIT)是一种由肝素所引起的严重而少见的并发症,HIT作为一种特异性自身免疫性疾病,是由于抗体对肝素--血小板因子4复合物的识别,损伤了血小板以及内皮细胞而导致,主要表现为血小板减少,血小板激活和血栓形成[1]。随着肝素的广泛应用,HIT日益被人们所认识并得到重视,我院曾收治一例冠状动脉介入术后出现HIT的患者,现将其护理报告如下。

心脏外科围术期肝素诱导血小板减少症的诊治进展

肝素诱导血小板减少症(HIT)是应用肝素后由抗体介导的不良反应,以血小板减少、伴或不伴血栓形成为主要临床表现.由于HIT发病率低、诊断结果时效长以及诊断技术要求高,大大降低了HIT的诊出率.治疗上非肝素抗凝剂种类繁多且适用阶段不同,临床上并无规范诊疗策略.部分研究已涉及新型口服抗凝剂(NOACs)、血浆置换及免疫抑制治疗,但未得到临床上广泛应用.心脏手术后HIT发病率较其他手术或内科疾病高,其围术期治疗也有特殊性.本文就近几年心脏手术围术期HIT的诊治进展进行综述,以期为临床医师提供参考.

肝素诱导的血小板减少症发病率及其抗体阳性率调查

目的了解住院患者肝素诱导的血小板减少症（HIT）发病率和HIT抗体阳性率及相关临床因素。方法选取应用肝素制剂的患者197例（男120例、女77例），进行4Ts评分（PretestClinicalScoringSystem）及应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HIT抗体，并按4Ts评分及病种分组、分别统计HIT发病率及HIT抗体阳性率。结果HIT总发病率为3．0％（6／197）；HIT抗体总阳性率为12．2％（24／197），抗体阳性率在4Ts评分低、中、高可能性组分别为10．1％（18／178）、7．7％（1／13）、83．3％（5／6）。HIT抗体阳性率和抗体检测平均值，在高可能性组与低、中可能性组之间差异均有统计学意义（P值均=0．000）。HIT发病率及HIT抗体阳性率均为外科高于内科（5．8％比0．9％，P=0．047；19．8％比6．3％，P=0．004）。结论肝素制剂应用人群中HIT的发病率和HIT抗体阳性率不低，且均与病种有关。HIT抗体检测在4rrs评分高可能性患者中的临床应用价值更大。

双膝关节置换术后并发肝素诱导的血小板减少伴血栓形成综合征一例

肝素诱导的血小板减少伴血栓形成综合征（heparininduced thrombocytopenia with thrombosis syndrome,HITTS）为肝素与机体产生的血小板因子4抗体形成超大具有抗原性的复合物。其与血小板FcγRIIA受体结合,触发血小板的活化和聚集现象,可引起血小板减少、病理性血栓（通常是致命性的）形成等临床表现。膝关节置换术后,由于患者高龄,血液粘滞状态,术后肢体活动少,血流缓慢,

颅内出血患者抗栓药逆转指南美国神经重症监护学会和美国重症医学会对医疗卫生专业人员的声明

背景抗栓药的使用，包括抗凝药、抗血小板药和溶栓药，在过去10年中日益增多并且预计将继续上升。虽然抗栓药相关性颅内出血可能是灾难性的，但快速逆转凝血功能障碍可能有助于限制血肿增大和改善转归。方法美国神经重症监护学会联合美国重症医学会组建了一个国际性多机构委员会，涉及的专业领域包括神经重症监护、神经内科、神经外科、卒中、血液学、血液病理学、急诊医学、药学、护理和指南制定，目的是进行文献评价并制定一份循证实践指南。该委员会进行了正式的文献检索，并对符合标准的研究进行了评价。结果利用GRADE方法学，委员会提出了在颅内出血情况下逆转维生素K拮抗药、直接Xa因子拮抗药、直接凝血酶抑制药、普通肝素、低分子肝素、类肝素、戊多糖、溶栓药和抗血小板药的推荐意见。结论该指南提供了及时和循证的抗栓药逆转策略以协助临床医生治疗抗栓药相关性颅内出血。