周氏克金岩方抗A549肺癌细胞多糖组分的研究

目的研究周氏克金岩方治疗肺癌的物质基础。方法用醇沉法提取周氏克金岩方多糖,采用Sevag法纯化,DEAE纤维素阴离子交换树脂制备多糖组分,紫外光谱检测蛋白存留情况,红外光谱分析组方药的归属,采用蒽酮-硫酸比色法测定多糖组分含量。结果该有效多糖组分在240nm和260nm处无吸收,其红外光谱图与组方药玉竹、猫爪草和仙鹤草的红外光谱图有很大的相似性,周氏克金岩方中该多糖组分含量为1.41%。结论抗A549肺癌细胞多糖组分不含蛋白和核酸,来源于组方药玉竹、猫爪草和仙鹤草,周氏克金岩方中含有一定量的多糖组分。

N2对肺癌A549细胞的体外抗肿瘤活性及其机制研究

目的评价1-[4-(2-喹喔啉基)苯基]-5-(4-甲基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮(N2)的体外抗肿瘤活性并初步探讨其作用机制。方法将不同浓度的N2和阳性对照药物吉非替尼(gefitinib)作用于非小细胞肺癌A549细胞,溶剂二甲基亚砜(DMSO)作为阴性对照组,利用CCK-8法、形态学观察、DAPI染细胞核,Annexin V-FITC/PI双染、罗丹明123染色和PI单染等方法检测N2对A549细胞的增殖、凋亡、周期的影响。结果N2浓度为20μM时作用24h、48h、72h,抑制率分别为47.54%、75.80%、87.60%,高于吉非替尼的抑制率,差异具有显著性(P<0.05);IC50值分别为30.85μM、6.61μM、5.68μM,与吉非替尼26.64μM、11.93μM、7.18μM相比48h、72h作用更强,差异具有显著性(P<0.05)。DAPI染色、细胞凋亡、线粒体跨膜电位实验显示N2诱导了A549细胞的凋亡,并且随着药物浓度增加,细胞凋亡率逐渐增加。细胞周期实验发现,N2能够将A549细胞阻断在G1期。结论N2对非小细胞肺癌A549具有较高的抑制活性和较低的细胞毒性,属于浓度依赖型周期抑制药物,可通过阻断细胞周期、抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡起到显著的抗肿瘤作用,提示N2是一种较理想的新型抗肿瘤药物。

信号肽重组hβD2在A549细胞中表达纯化及抗菌活性测定

目的 通过构建在A5 49细胞中高表达人防卫素hβD2的表达体系 ,获得人源化hβD2。 方法 构建pLNCX2 CEA信号肽 hβD2成熟肽逆转录病毒表达载体 ,经逆转录包装细胞PT67包装后获得含融合基因的侵袭性病毒 ,该病毒感染宿主细胞A5 49后将融合基因整合入宿主基因组中 ,收集培养基上清 ,分离纯化获得目的蛋白hβD2 ,测定目的蛋白的抗菌活性。结果 收集转染有融合基因的A5 49细胞培养基上清 ,经WesternBlot和质谱仪分析 ,纯化后的目的蛋白为hβD2 ,具有较强的抗菌活性。结论 将CEA信号肽重组hβD2基因转染A5 49细胞后 ,细胞具有表达分泌型hβD2的功能。

肺癌患者胸水TIL与自身外周血淋巴细胞抗肿瘤活性研究

以NK敏感的K562细胞和NK非敏感的人肺腺癌Anip细胞为靶细胞，对肺癌患者的恶性胸水浸润淋巴细胞(TIL)和外周血淋巴细胞(PBL)的抗肿瘤效果进行了比较，以期为临床应用不同来源的免疫活性细胞进行肿瘤AIT治疗提供参考依据。

苯胺基嘧啶/偶氮鎓二醇盐杂合物的设计、合成及其抗非小细胞肺癌活性

为寻找活性强的抗非小细胞肺癌(NSCLC)药物,设计、合成了15个结构新颖的苯胺基嘧啶/偶氮鎓二醇盐杂合物9a^9e、10a^10e、11a^11e,采用MTT法考察其对表皮生长因子受体(EGFR)L858R/T790M突变的人肺腺癌细胞H1975的增殖抑制活性。结果表明,化合物9a^9e显著抑制H1975细胞的增殖,优于对照药吉非替尼(gefitinib)。其中,化合物9b活性最强(IC_(50)=0.65μmol/L)。分子对接提示,化合物9b可能通过氢键和静电作用力等与EGFR T790M活性部分结合,值得进一步研究。

抗氧化肽对人肺癌细胞A549,红细胞和肝组织氧化性损伤的抑制作用

研究了抗氧化肽A对人肺癌细胞A549,红细胞溶血和肝组织氧化性损伤的抑制作用。结果表明抗氧化肽A能够有效地抑制体外培养的人肺癌细胞A549的增殖,同时也能抑制红细胞的溶血和肝组织氧化性损伤的发生。

益肺饮对A549人肺癌细胞株酶活性的实验研究

[目的]研究益肺饮对A549人肺癌细胞株酶活性的作用机制,为中药复方临床应用提供可靠的实验依据.[方法]利用血清药理学方法,制备益肺饮中药组,西药顺铂组,对照组大鼠血清,加入RPMI1640培养液后对A549人肺癌细胞株施加处理48h,观察A549人肺癌细胞株酶活性改变.[结果]中药益肺饮与顺铂组的细胞质膜标志酶Mg-ATPase阳性细胞百分比分别为58.5%和64.5%,内质网标志酶G-6-Pase活性阳性细胞百分数分别为65.5%和73.0%,提示酶活性明显下降.[结论]益肺饮具有降低A549人肺癌细胞MgATPase、G-6-Pase活性的作用.

基于网络药理学及体外实验探讨过氧麦角甾醇对非小细胞肺癌A549细胞的作用机制

目的基于网络药理学结合体外实验,探究过氧麦角甾醇(EP)对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的作用,并分析其可能机制。方法采用网络药理学对EP治疗人非小细胞肺癌的关键靶点进行筛选,并通过Metascape数据库对其关键靶点进行GO和KEGG通路富集分析;用0(空白对照)、2.5、5、10、20、40、80μmol·L^(-1)的EP作用于A549细胞24、48和72 h,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性。以0(空白对照)、10、20、40μmol·L^(-1)的EP作用于A549细胞48 h后,AO/EB染色法和Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞的凋亡率;JC-1染色法观察A549细胞的线粒体膜电位变化;DCFH-DA染色法观察细胞的活性氧水平。Western blot法检测各组细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达变化。结果经网络药理学预测,得出EP治疗人非小细胞肺癌存在170个共有靶点,GO富集分析结果显示EP治疗人非小细胞肺癌主要涉及的生物过程有蛋白质的磷酸化、磷酸化的正向调节、磷酸转移酶活性、蛋白丝氨酸激酶活性等,KEGG富集分析结果显示EP治疗人非小细胞肺癌的前列腺癌信号通路、人乳头状瘤病毒感染信号通路、PI3K-AKT信号通路等;MTT结果显示EP显著抑制A549细胞增殖,呈现时间和剂量相关性;与空白对照组相比,经EP作用后A549细胞的总凋亡率、活性氧水平显著升高,线粒体的膜电位显著下降;此外,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论EP可抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT/mTOR通路介导线粒体凋亡途径有关。

蝙蝠葛活性成分对人白血病K562及肺癌A549细胞株的抑制增殖作用

[目的]探讨蝙蝠葛活性成分对体外人白血病K562及肺癌A549细胞株的抑制增殖作用.[方法]利用倒置显微镜及HE染色方法观察给予20mg/L蝙蝠葛活性成分处理后的体外人白血病K562细胞株的形态学变化;采用血清药理学实验方法观察含药(20mg/L蝙蝠葛活性成分)血清对体外人肺癌A549细胞株的抗增殖作用.[结果]倒置显微镜观察结果显示,给予20mg/L蝙蝠葛活性成分后早期K562细胞出现凋亡形态学变化,细胞膜鼓泡,凋亡小体形成,晚期K562细胞出现膜破裂坏死.HE染色结果显示,给予20mg/L蝙蝠葛活性成分后,K562细胞出现典型凋亡形态学变化,凋亡小体形成,细胞核浓缩呈蓝黑色,胞浆呈淡红色,核染色质浓缩呈碎块状.血清药理学实验结果显示,终质量分数分别为10%,20%,25%的灭活的含药大鼠血清对人肺癌A549细胞株的增殖抑制率分别为29.03%,30.55%,41.67%,与空白对照组比较明显增高(P<0.05).[结论]蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株具有抑制增殖和诱导凋亡的作用;含蝙蝠葛活性成分血清对体外人肺癌A549细胞株具有抑制增殖作用.

脱氢姜酮对人肺癌细胞A549细胞毒活性的研究

对生姜中有效成分脱氢姜酮对人肺癌细胞A549细胞（简称A549细胞）毒活性进行研究,同时考察其氢化产物姜酮的细胞毒活性,研究其构效关系.实验利用MTT法测定脱氢姜酮和姜酮对A549细胞的生长抑制作用,DNA电泳研究脱氢姜酮和姜酮对DNA切割作用,免疫印迹实验检测相关蛋白的表达.实验结果表明：脱氢姜酮对A549细胞增殖具有一定的抑制作用,在40~300μmol/L之间呈剂量依赖性;脱氢姜酮抑制A549细胞增殖的能力和对DNA的切割能力大于姜酮;N-乙酰基-L-半胱氨酸（NAC）明显抑制脱氢姜酮的活性,对姜酮没有影响.免疫印迹结果显示脱氢姜酮可诱导CHOP蛋白的表达,表明脱氢姜酮通过内质网应急途径发挥作用.

抗ENO1抗体联合二甲双胍通过靶向肿瘤干细胞逆转人非小细胞肺癌A549细胞对西妥昔单抗的抵抗

目的:探究抗烯醇化酶1(enolase 1,ENO1)抗体、二甲双胍(metformin,MET)通过靶向肿瘤干细胞对西妥昔单抗(cetuximab,CTX)耐药型非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和干性的影响及其可能的作用机制。方法:10 mmol/L MET联合40μg/ml抗ENO1抗体处理CTX(35μg/ml)耐药型非小细胞肺癌细胞A549,4 d后通过增殖、克隆形成、迁移、侵袭、甲基纤维素成球实验等检测联合治疗对A549肺癌细胞的影响。同时通过流式细胞术检测CTX、MET和抗ENO1抗体分别以单药及三药联合处理对ALDH+和CD44+两种肺癌干细胞亚群的影响。结果:CTX、MET和抗ENO1抗体联合处理显著抑制A549细胞的增殖、迁移、侵袭能力及A549细胞的自我更新能力。流式细胞术分析发现MET可显著抑制ALDH+干细胞亚群,而抗ENO1抗体可显著抑制CD44+干细胞亚群,三药联合处理可同时显著抑制ALDH+和CD44+干细胞亚群。结论:MET和抗ENO1抗体分别靶向ALDH+和CD44+肿瘤干细胞亚群,两者联合可有效逆转A549细胞对CTX的抗性,从而更有效地抑制A549细胞的干性、增殖、迁移和复发。

牡蛎低分子活性物质对人肺腺癌A549细胞的生物学效应

以新鲜牡蛎为材料 ,经特酸抽提和分子筛凝胶层析 ,获得牡蛎低分子活性物质 ,SDS PAGE凝胶电泳分析鉴定为该组分主要由 8种蛋白组成 .应用该物质处理人肺腺癌A5 49细胞 .实验结果显示 ,经 0 .1mg/mL牡蛎低分子活性物质处理的人肺腺癌A5 49细胞 ,细胞生长抑制率达 6 2 .2 % ,细胞分裂指数下降 2 8.95 % .光镜观察显示经牡蛎低分子活性物质处理的细胞形态发生明显改变 .结果表明 。

紫苏醇对肺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用机制的研究

目的:探讨紫苏醇(Perillyl alcohol,PA)对肺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用机制,并阐明其对肿瘤血管生成信号的影响。方法:不同浓度PA和厄洛替尼加入到A549细胞中,利用溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑(MTT)法测定药物组对A549细胞的抑制作用,Transwell法检测PA对A549细胞侵袭的抑制作用,采用间接荧光标记法测定细胞内活性氧(ROS)水平的变化;分光光度法检测PA对细胞凋亡蛋白Caspase-3活性的影响,Western blot法检测A549中VEGF、HIF-1α及COX-2的表达,凝胶迁移或电泳迁移率实验测定A549细胞中NF-κB活性。结果:与空白对照组比较,随着浓度的增加(10、50、100μg/ml),PA和厄洛替尼对A549细胞生长的抑制率在不断地增加,差异均有统计学意义(P<0.05),A549细胞侵袭能力呈现不断下降的趋势,差异均有统计学意义(P<0.05),A549细胞内活性氧水平随厄洛替尼浓度的增加变化不大,而ROS水平随着PA的浓度的增加而增加,在100μg/ml浓度的PA下引起的ROS百分率达到了(80.43±6.92)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞活力检测结果显示,随着PA和厄洛替尼浓度的增加和作用时间的延长,A549细胞中凋亡蛋白Caspase-3活性明显增加(P<0.05),随着紫苏醇浓度的增加,COX-2、VEGF和HIF-1α的表达呈不断降低的趋势,EMSA检测结果显示,随着PA浓度的增加,NF-κB的条带面积不断减少。结论:PA可能参与并促进了ROS的生成和Caspase-3活性增加,最终诱导A549细胞的凋亡,PA可能通过降低NF-κB的表达,进而诱导COX-2、VEGF等的表达减少,使血管生成滞后,能够有效地使细胞的穿透能力下降和凋亡发生。

白英甾体总生物碱对人肺癌细胞A549裸鼠异种移植瘤的药效研究

目的探讨白英抗肿瘤有效部位对人肺癌细胞A549裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用及作用强度。方法在裸鼠腹腔内接种人肺癌细胞A549细胞株复制肿瘤模型,给予阳性对照药紫杉醇和白英甾体总生物碱干预后,测量肿瘤体积和肿瘤质量,计算肿瘤生长抑制率,比较组间抗肿瘤药效强度。结果白英低、中、高剂量组(12,24,48 mg·kg-1)的相对肿瘤增殖率(T/C)分别为85.52%、60.64%、45.24%,抑瘤率分别为2.35%、49.79%、48.93%,而相同条件下,紫杉醇组(8 mg·kg-1)的T/C和抑瘤率分别为14.68%、82.59%。紫杉醇有明显的抗肿瘤作用,白英甾体总生物碱均有一定的抗肿瘤作用,其中中、高剂量组抗肿瘤作用更明显。结论白英甾体总生物碱对人肺癌细胞A549裸鼠异种移植肿瘤的生长具有抑制作用。

藤茶双氢杨梅树皮素诱导人肺癌A549细胞凋亡及其机制研究

目的:探讨藤茶双氢杨梅树皮素(ampelopsin,APS)抗人肺癌A549细胞的作用。方法:以MTT法和集落形成法观察APS对人肺癌A549细胞的体外抑制作用;采用RT-PCR技术测定APS对人肺癌细胞株A549抑瘤基因p53表达的影响。结果:APS能明显抑制体外培养的A549细胞的生长,MTT法中IC50为9.8μg·mL-1;细胞生长曲线法提示其对A549细胞的生长也有明显的抑制作用;集落形成试验中,当药物浓度为14.84,9.90,6.60,4.40μg·mL-1时,抑制率分别为100%,91.6%,64.5%和23.4%;当浓度为25μg·mL-1时,APS能显著增强p53基因的表达水平。结论:APS对体外培养的人肺癌A549细胞的生长有明显的抑制作用,对抑癌基因p53表达的影响是其抗肿瘤的作用机制之一。

培养不同时间CIK细胞免疫表型变化与其抗肿瘤活性关系的研究

目的探讨培养不同时间的CIK(cytokine induced killer cells)细胞免疫表型变化及其对肿瘤细胞杀伤活性的关系,为CIK临床治疗肿瘤提供实验数据。方法分离人外周血单核细胞,加IFNγ、IL1α、CD3Ab、IL-2等细胞因子诱导CIK细胞并进行鉴定,将经过鉴定的CIK与肺癌细胞A549共同培养,检测不同时间培养的CIK表型变化与对A549的体外杀伤效果的关系。结果培养不同时间(10天、15天、20天)的CIK细胞CD3+CD56+CD16+表达率分别为42.1%,63.3%,77.1%,对A549的杀伤效率分别为41.75%,54.43%,79.31%。结论随着培养时间延长,CIK免疫表型表达率逐渐上升,对A549的杀伤效率也随之逐渐增强,本实验杀伤活性最高为20天,提示在临床应用时可以根据不同时间CIK免疫表型表达情况选择应用时间,达到使用的最佳效果。

六神丸对肝癌BEL7402、肺癌A549和白血病HL60的体外抗肿瘤作用

目的研究六神丸对肿瘤细胞生长的影响。方法采用MTT法,对六神丸进行体外抗肿瘤活性的研究。结果显示六神丸对人癌细胞系,白血病细胞株HL60、肝癌BEL7402H和肺癌A549均有不同程度抑制作用(P<0.01),其中高浓度组对白血病细胞株HL60、肝癌BEL7402H、肺癌A549的抑制率分别达到87.4%、91.3%、80.0%。结论六神丸在实验给药浓度下对上述3种人癌细胞的生长具有一定的抑制作用。

新型3-芳甲基-5-芳氧甲基丁内酯的合成及其抑制肺癌细胞生长活性评价

通过2-芳氧甲基环氧烷与α-芳甲基丙二酸二乙酯在乙醇钠条件下反应,合成了8个新型3-芳甲基-5-芳氧甲基丁内酯,收率为13%～81%.由IR,1HNMR和MS波谱数据进行了结构表征.所得化合物均具有抑制A549肺癌细胞生长的活性,其抑制效果具有浓度依赖性.

肺腺癌A549细胞抗失巢凋亡相关基因的确认及C8orf4基因的表达

目的:比较抗失巢凋亡及正常贴壁生长肺腺癌A549细胞基因组表达差异,从中筛选肺癌抗失巢凋亡相关基因,并探讨C8orf4基因的高表达及其对失巢凋亡的正性调剂作用意义。方法:建立抗失巢凋亡肺癌A549细胞系;用基因芯片技术检测其与正常贴壁生长A549细胞的差异基因,利用NCBI Pubmed数据库筛选出肺癌细胞抗失巢凋亡相关的基因,找出差异表达倍数最大的基因,运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术及蛋白质印迹技术测定其表达。结果:共检测到表达差异的基因745个,筛选出63个与肺癌细胞抗失巢凋亡相关的基因,C8orf4基因差异表达倍数最大,在脱落培养A549细胞中C8orF4基因及其编码蛋白表达明显高于贴壁培养A549细胞,P<0.02。结论:基因芯片技术为筛选肺癌抗失巢凋亡相关基因提供了有效方法,C8ORF4基因可能参与调控肺癌细胞抗失巢凋亡过程。

清热解毒类与活血化瘀类中药对肺癌A549细胞增殖抑制的机制研究

目的探讨清热解毒类与活血化瘀类中药对肺癌A549细胞抑制增殖的可能机制。方法利用动物含药血清技术平台获得清热解毒类、活血化瘀类中药及正常血清。对数期A549细胞株随机分为3组(清热解毒药组、活血化瘀药组、正常血清组),将相对应的血清分别作用48h后,WB法检测CyclinD1、P53、PCNA、TNF-α、IL-1、CD4、CD8、BCL-2、Bax、VEGF,RT-PCR法检测BAX、bcl-2、VEGF,ELISA法检测TNF-α、IL-1。结果清热解毒药组与空白组相比,CyclinD1、PCNA表达明显下降(P<0.01),TNF-α、IL-1,CD4、CD8表达明显升高(P<0.01),CD4/CD8升高;P53、Bcl-2、Bax、VEGF无明显变化(P>0.05)。活血化瘀组与空白组相比,PCNA、BCL-2、VEGF表达明显下降(P<0.01),P53、Bax表达明显上升(P<0.01),CyclinD1、TNF-α、IL-1,CD4、CD8表达无明显差异(P>0.05)。结论清热解毒药与活血化瘀药既有共同的抗肿瘤机制,也有各自不同的抗肿瘤机制。清热解毒药的抗肿瘤机制体现在抑制增殖,诱生细胞因子,增强免疫活性方面,而活血化瘀类中药的抗肿瘤机制具体体现在抑制增殖,促进凋亡,抑制血管生成方面。