抗肿瘤疫苗的研究进展及应用现状

抗肿瘤疫苗是利用含有肿瘤特异性抗原（tumor specific antigen,TSA）或肿瘤相关抗原（tumor-associated antigen,TAA）的肿瘤细胞、胞外体（exosomes,EXO）、多肽及核酸序列等诱发患者自身特异性免疫应答,克服免疫抑制状态,从而抑制肿瘤生长甚至清除肿瘤的主动免疫治疗方法。其优势在于特异性抗肿瘤效应强,安全性相对较高,

榄香烯复合抗肿瘤疫苗免疫的效应机制

以小鼠H22腹水型肝癌和L615白血病为实验模型,采用榄香烯或/和热休克等为应激原(stressor),对小鼠H22腹水型肝癌细胞和L615白血病细胞进行不同浓度榄香烯、不同时间热休克处理,用透射电镜观察肿瘤细胞的形态变化;采用直接免疫荧光法流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞凋亡百分率及对肿瘤细胞膜HSP70、HSP90表达的影响;进而分离纯化不同应激原(榄香烯、丝裂霉素-C)诱导的H22和L615肿瘤细胞的HSP70-肽复合物,并用之免疫Balb/c和615小鼠,进行体内抗瘤免疫效应的研究。透射电镜显示,榄香烯或热休克处理都能引起2种肿瘤细胞的凋亡和坏死,L615白血病细胞较H22肝癌细胞更敏感,形态学变化更剧烈;流式细胞术检测进一步证明,榄香烯与热休克都能诱导2种肿瘤细胞发生凋亡,两者复合作用更能促进肿瘤细胞的凋亡,在一定范围内L615细胞凋亡与榄香烯的浓度和热休克的时间呈明显的依赖关系;用榄香烯或MMC诱导的2种肿瘤细胞分离纯化的HSP70-肽复合物给Balb/c和615小鼠进行主动免疫,免疫组小鼠在1个月内全部存活。而buffer D免疫对照组小鼠无一存活。

抗肿瘤疫苗的研究进展

抗肿瘤疫苗是一种通过增强或者诱导机体对肿瘤细胞产生特异性应答的免疫治疗方式。利用肿瘤细胞或抗原物质制备抗肿瘤疫苗,促进T淋巴细胞增殖、活化以及细胞因子释放,以期达到抑制肿瘤的生长、转移和复发的目的。本文综述目前肿瘤免疫治疗的进展,着重介绍细胞疫苗、DNA疫苗、多肽疫苗、树突状细胞疫苗等四类抗肿瘤疫苗,旨在探讨目前肿瘤免疫治疗学存在的问题以及肿瘤免疫在未来临床治疗中的应用。

表皮生长因子受体为靶向重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗的构建及免疫活性

利用RT-PCR技术从人A431细胞中克隆表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)基因N端序列,经测序鉴定正确。将膜外序列不同功能及模拟抗原呈递较佳的亚克隆DNA片段插入T7噬菌体表达载体,从而构建了重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗并用于动物免疫注射,用斑点印迹(dotblot)和MTT法分别检测到特异性抗体和细胞毒性T淋巴细胞反应。结果显示,以噬菌体颗粒为载体的疫苗可以诱导体液免疫反应和细胞免疫反应。

表皮生长因子受体靶向重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗的免疫活性

目的探讨表皮因子受体为靶向,重组T7噬菌体疫苗在体诱导的免疫活性。方法用构建的重组T7噬菌体疫苗免疫动物,Dot-Blot和流式细胞仪检测产生的特异性抗体,MTT法检测产生的特异性杀伤肿瘤细胞活性。结果实验组动物均产生特异性抗体,与A431细胞结合的阳性细胞率分别为37.6%、47.6%和35.1%;T7415-1b-90和T7415-1b-132实验组均诱导产生对A431细胞的特异性杀伤作用,检测的ODE+T与对照组相比具有显著性差异(P<0.01);T710-3b-638实验组对肿瘤细胞无杀伤作用。结论异源EGFR分子构建的重组T7噬菌体疫苗可以诱导机体产生体液免疫反应和细胞免疫反应。

双靶点抗肿瘤疫苗研制项目提升大学生综合能力

以大学生创新训练项目为契机,依托国家级生物制药实验教学示范中心平台,围绕"双靶点抗肿瘤疫苗研制"项目指导大学生进行相关理论知识的学习、科研思路的设计,并完成实验操作、数据整理、专利申请和论文写作等训练。初步选择鼠源粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(mGM-CSF)和促胃泌素释放肽(GRP)为双靶点,完成了基因工程菌的构建、目标蛋白的制备、细胞培养、动物肿瘤模型的建立、肿瘤疫苗药效初步分析与探索。通过指导学生申请专利、发表文章、参加药苑论坛、挑战杯等各类比赛完成对学生的训练,提升其自主设计实验、自主完成实验、自主管理实验等综合能力。

树突状细胞抗肿瘤疫苗的基础及临床研究现状

树突状细胞(Dendritic Cells,DCs)是目前发现的免疫系统中功能最强的专职递呈细胞。大量研究表明DCs疫苗在抗肿瘤免疫性中扮演着非常重要的角色。本文就DC的生物学特性及功能?在临床肿瘤治疗中的意义?国内外应用DC治疗常见肿瘤的现状进行综述。这将为有关DC的基础和临床试验提供有价值的信息。

靶向肝癌抗肿瘤疫苗临床研究进展

抗肿瘤疫苗是癌症免疫疗法的一种。由于癌细胞表面高表达多种癌症相关抗原分子,利用这类分子可激活树突状细胞抗原呈递,激活辅助性T细胞和细胞毒性T细胞的免疫响应,从而清除相应的癌细胞。抗肿瘤疫苗在黑色素瘤、白血病等癌症的临床研究中取得了很好的效果。现就基于常见肝癌相关抗原如甲胎蛋白(AFP)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、多药耐药相关蛋白3(MRP3)、癌症-睾丸抗原(CTA)设计的靶向肝癌的抗肿瘤疫苗的临床研究进行综述。

高效液相色谱-示差折光法测定NMM抗肿瘤DNA疫苗中甘露醇含量

目的 建立测定NMM抗肿瘤DNA疫苗中甘露醇含量的高效液相色谱-示差折光法。方法 检测器为示差折光检测器,色谱柱为SUGAR SC1011阳离子钙型交换柱(300 mm×8 mm,6μm),流动相为纯化水,流速为1.0 mL/min,柱温为80℃,检测池温度为37℃,进样量为10μL。结果 甘露醇的质量浓度在0.02~5.00 mg/mL(R2=1.000 0,n=6)范围内与峰面积线性关系良好;定量限为13.37μg/mL;精密度、重复性、稳定性试验结果的RSD均小于2.0%;加样回收率为97.76%,RSD为0.97%(n=9)。3批小试样品和中试样品中甘露醇的含量分别为20.02,19.95 mg/mL。结论 该方法操作简便、重复性好、结果准确,可用于NMM抗肿瘤DNA疫苗中甘露醇的含量测定。

NMM抗肿瘤DNA疫苗原液大肠杆菌菌体蛋白质残留量检测方法的建立与验证

目的建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白质残留量的双抗体夹心ELISA试验方法。方法使用双抗体夹心ELISA试验方法检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白残留量,采用四参数logstic曲线进行回归分析,并对该方法的专属性、检测限、定量限、线性与范围、精密度、准确度、耐用性等进行验证,验证通过对5批样品进行检测。结果采用双抗体夹心ELISA试验方法进行大肠杆菌蛋白质残留量检测时,DNA疫苗原液无需进行稀释。NMM抗肿瘤DNA疫苗原液对大肠杆菌菌体蛋白质的检测无干扰及抑制作用,方法的专属性良好;本法检测限为0.41 ng/ml;定量限为0.98 ng/ml;该方法测定宿主菌蛋白质残留量在0~100 ng/ml范围内线性良好,R^(2)≥0.9999;本方法重复性试验中宿主菌蛋白质含量RSD值均低于15%,中间精密度实验中样品吸光值RSD值低于10%,精密度结果良好。在检测线性范围内加入高、中、低3种浓度的大肠杆菌菌体蛋白,回收率均值为100.35%(n=9,RSD=3.58%);本方法检测实验条件发生微小变动时(不同人员、不同批次试剂盒),对测定结果的影响在可接受范围内。应用该方法对5批NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌蛋白质残留量进行检测,大肠杆菌菌体蛋白残留量均在1 ng/mg左右,远低于相关指导原则中规定的不高于1μg/mg的质量标准。结论该方法可用于NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中宿主菌蛋白质含量的检测。

转染A549细胞总RNA的树突状细胞疫苗抗肿瘤效应的体外研究

目的探讨人肺腺癌细胞株A549总RNA转染的人树突状细胞(DCs)在体外诱导特异性抗肿瘤免疫反应的能力。方法利用密度梯度离心法从血细胞分离机新鲜采集的外周富集血中分离出单个核细胞(PBMCs),贴壁获得单核细胞,加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)进一步诱导为树突状细胞(DCs),同时利用提取的A549细胞总RNA转染DCs来制备疫苗,并与T细胞混合培养诱导扩增细胞毒性T淋巴细胞(CTLs);实验分为转染A549细胞总RNA的DC组、未转染DC组和转染空脂质体DC组,分别以流式细胞术(FCM)鉴定DCs表型、酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-12、IFN-γ分泌水平、3H-TdR掺入检测T细胞增殖能力及乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定杀伤肿瘤活性并比较各组差异。结果1)转染总RNA组DCs表面CD40、CD80、CD83、HLA-DR的表达较未转染组DCs和转染空脂质体组DCs均有升高,CD40在3组的表达率分别为(69.01±7.67)%、(19.28±3.51)%和(39.62±2.72)%;CD80在3组的表达率分别为:(74.39±6.46)%、(15.48±3.03)%和(25.70±2.92)%;CD83在3组的表达率分别为:(81.79±4.61)%、(13.29±2.34)%和(31.42±1.97)%;HLA-DR在3组的表达率分别为:(76.53±5.13)%、(49.23±4.05)%和(29.94±3.53)%,差异有统计学意义(P<0.05);2)转染总RNA组DCs的IL-12和IFN-γ分泌水平较未转染组及转染空脂质体组明显升高(P<0.05),3组IL-12分别为(543.24±68.33)、(77.11±27.65)和(167.78±31.84)pg/ml;3组IFN-γ分别为:(122.95±32.84)、(41.06±10.97)和(56.08±15.96)pg/ml;3)3H-TdR掺入试验所得的cpm,3组分别为(7437±720)、(3 807±476)和(4 543±719),阳性对照组为:16 739±91,差异有统计学意义(P<0.05);4)LDH释放法可见转染A549总RNA的DC组的特异性杀瘤活性(58.54±8.27)%,明显高于未转染组(36.03±4.03)%和转染空脂质体组(33.47±8.21)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论人肺腺癌细胞A549总RNA转染的DC疫苗体外诱导的特异性抗肿瘤免疫能力显著增强,有望为肺腺癌的治疗提供新的手段。

MHSP65-TCL疫苗对不同病理类型三阴性乳腺癌治疗效果的差异

目的评估及比较改良后的结核分枝杆菌热休克蛋白65-肿瘤细胞裂解物(MHSP65-TCL)疫苗对不同类型三阴性乳腺癌的疗效和差异。方法首先,生物信息学分析不同病理类型三阴性乳腺癌肿瘤微环境中免疫细胞浸润活化情况;其次,分析三阴性乳腺癌细胞中RACK1、Bcl-2、CTNNBL1等细胞活化因子,及细胞凋亡诱导因子PDL1、HMGB1、Fas-L在三阴性乳腺细胞中的丰度及其影响免疫细胞活化的信号通路。进而,在制备MHSP65-TCL去除TCL中的PDL1或增加TCL中Bcl-2,再通过体内外抗肿瘤实验,检测、比较两种方法治疗不同类型三阴性乳腺癌效果的差异。结果蛋白表达丰度的检测,MDA-MB-453细胞中HMGB1的表达量是最高的,但Bcl-2表达最低,结合各类型三阴性乳腺癌淋巴浸润,体外杀伤实验以及体内动物实验,3种不同类型的三阴性乳腺癌细胞尤其是LAR型细胞系MDA-MB-453,主要依赖HMGB1抑制免疫细胞。从TCL中去除HMGB1可以更为有效地提高MHSP65-TCL的抗肿瘤效果。结论阐明MHSP65-TCL疫苗对各类型三阴性乳腺癌疗效差异及机制,并建立起一种三阴性乳腺癌治疗的新方法。

抗肿瘤树突状细胞疫苗研究进展

树突状细胞(DCs)是一类独特的抗原递呈细胞,具有活化T细胞并诱导抗原特异性毒性T淋巴细胞的能力。研究表明,DCs构成了一套启动并调节免疫应答的复杂系统,能够诱导免疫应答,调控免疫耐受。近年来,针对癌症患者的治疗方案迅速增加,负载肿瘤抗原的树突状细胞疫苗作为一种新兴的免疫治疗技术,也被应用于癌症患者的治疗。本研究拟对目前关于DCs的特点和功能,以及在癌症的免疫耐受机理等方面的研究结果进行综述,并讨论与展望DCs疫苗所存在的问题与发展方向。

新的抗肿瘤疫苗研究

抗肿瘤疫苗从上世纪90年代开始研发,多是基于共享的肿瘤抗原,未能诱导显著的免疫反应,经过几十年的失望的尝试,终于有一些进展重燃人们对抗肿瘤疫苗的兴趣。这些进展包括基于新技术和预测方法的个体化疫苗和与免疫检查点抑制剂的联合应用等。在欧洲肿瘤内科学会(ESMO)举办的肿瘤免疫治疗大会上,有研究者指出,我们现在可以基于患者肿瘤的基因组学信息,生产针对每例患者的个体化疫苗.

抗白血病树突状细胞疫苗的制备

目的 探索抗白血病异体树突状细胞疫苗的制备方法。方法 从健康者外周血中诱生DC ,用不同方法负载K5 6 2抗原(化学融合法 ,冻融抗原冲击法 ,肿瘤与DC共培养法 ) ,比较这些DC疫苗在递呈抗原激活T细胞增殖及杀伤功能方面的差异。结果 从健康者外周血中可诱生出具有正常免疫表型和抗原递呈功能的DC。不同抗原负载方法致敏的DC均能激活T细胞特异性杀伤K5 6 2细胞。冻融抗原负载的DC能有效刺激T细胞增殖 ,其活化的CTL对K5 6 2的杀伤毒性最强。结论 异体DC可有效递呈肿瘤抗原 ,激活T细胞杀伤肿瘤 ,冻融抗原负载的DC激活T细胞对肿瘤的杀伤最强 ,为今后临床DC疫苗的选择提供了实验依据。

肿瘤多肽疫苗研究进展

肿瘤的发生、发展和治疗与机体免疫系统功能密切相关,伴随着肿瘤抗原、抗原递呈、T细胞识别机制的突破性研究进展,研究者发现抗肿瘤多肽疫苗能够通过肿瘤抗原多肽识别抗原递呈细胞表面的主要组织相容性复合体(MHC)分子,形成肽-MHC-T细胞受体复合物,引起相应的细胞毒性T淋巴细胞免疫反应,从而杀伤肿瘤。因此,研制既能打破肿瘤患者存在的免疫耐受又能诱发针对肿瘤相关抗原特异性免疫应答的高效多肽疫苗已成为肿瘤免疫治疗研究的热点。论文综述了肿瘤多肽疫苗抗肿瘤相关机制及其在该领域所取得的最新临床研究进展。