建立膜抗原荧光抗体试验评价北京株冻干水痘疫苗免疫效果

为了建立用于水痘疫苗接种后血清中特异性抗体检测的膜抗原荧光抗体(FAMA)法,并对接种水痘疫苗后儿童血清中水痘特异性抗体进行检测,评价北京株水痘疫苗的免疫效果。以水痘带状疱疹病毒(VZV)感染细胞作为抗原制备成固定抗原玻片,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗人IgG作为二抗建立FAMA法,并对该法的敏感性、特异性进行验证。运用此法对不同剂量北京株水痘疫苗接种后儿童血清中特异性抗体进行检测,分析儿童血清中水痘特异性抗体水平以及免后抗体阳转率,并与Oka株水痘疫苗进行比较。结果显示,FAMA法敏感性可达0.0196IU/ml,特异性好。应用此法检测300名观察者免前免后双份血清样本中抗VZVIgG,易感者中北京株水痘疫苗原苗(39810PFU/0.5ml)、2000PFU/0.5ml、500PFU/0.5ml接种组儿童血清免后抗体阳转率分别为100%、98.77%、85.42%,抗体几何平均滴度(GMT)分别为36.4、34.3、18.6,原苗与2000PFU间的抗体阳转率和GMT均无显著性差异(P>0.05),但原苗与500PFU、2000PFU与500PFU间的抗体阳转率和GMT均有显著性差异(P<0.05)。对照国产、进口Oka株水痘疫苗接种后抗体阳转率分别为95.35%、96.97%,抗体GMT分别为13.3、16.0,不同剂量北京株疫苗抗体阳转率与国产、进口Oka株疫苗相比,差别无显著性(P>0.05),但北京株疫苗原?

基于Vero E6细胞的水痘-带状疱疹病毒抗膜抗原荧光抗体试验的建立与评价

目的 建立并评价基于非洲绿猴肾细胞(Vero E6)的水痘-带状疱疹病毒(VZV)抗膜抗原荧光抗体(FAMA)试验方法。方法 在VZV-Oka减毒活疫苗株在Vero E6细胞中的适应培养毒株VZV-Oka-E6的基础上,首先使用3个不同感染剂量(10、10和10TCID)的VZV-Oka-E6病毒株感染Vero E6细胞,于显微镜下观察病变情况确定最佳的VZV-Oka-E6病毒株感染量;然后对比使用不同固定液固定感染细胞后制备的固定抗原片可检测到的灵敏度确定最优的固定液,从而建立基于Vero E6细胞的中和抗-VZV检测FAMA试验方法;采用建立的FAMA法,检测不同效价的VZV免疫球蛋白国际标准品,确定该方法的敏感性;检测人单纯疱疹病毒(HSV)1、2型特异性抗体,评价该方法的特异性;分别使用同一批次制备和4个不同批次制备的VZV感染细胞固定抗原片检测VZV免疫球蛋白国际标准品的中和抗-VZV,确定该方法的批内和批间重复性;检测已知的3种效价的VZV免疫球蛋白国际标准品,评价该方法的相对准确性。分别应用新建立FAMA法和ELISA法检测20(人)份单采血浆样品的抗-VZV效价,对2种试验检测结果做Spearman相关性分析。结果 通过优化确定了FAMA试验中最佳的VZV-Oka-E6病毒株感染量为10TCID,-20℃预冷的丙酮作为固定液。FAMA试验检测中和抗-VZV效价的灵敏度为31.25 mIU/mL;检测HSV 1、2型特异性抗体时结果为阴性;使用同一批次和4个不同批次制备的VZV感染细胞固定抗原片检测VZV免疫球蛋白国际标准品,变异系数分别为29.95%和26.71%;对3种效价VZV免疫球蛋白国际标准品的检测(值)与其理论值一致;FAMA法和ELISA法对20份单采血浆样品检测抗-VZV结果的相关系数为0.268。结论 所建立的FAMA试验检测中和抗-VZV效价具有良好的敏感性、特异性、重复性和相对准确性,可用于单采血浆和水痘-带状疱疹免疫球蛋白(VZIG)产品的中和抗-VZV效价检测。

超微量荧光抗体膜抗原法(FAMA)测定麻疹抗体

麻疹抗体的测定,现在一般采用红血球凝集抑制法(下称HI法),该法和中和抗体测定法相关,在实践中被广泛使用。但在评价疫苗接种后的抗体效价上,灵敏度存在问题。 灵敏度好的麻疹抗体测定法除中和法(下称NT法)外,还有放射免疫测定法(下称RIA法)、酶联免疫吸附测定法(下称ELISA法)。

应用单克隆抗体确定汉坦病毒囊膜糖蛋白抗原决定簇的特性(文摘)

应用一组24种抗汉坦病毒囊膜糖蛋白G1和G2的单克隆抗体(McAb)来检测抗原位点的表面分布和功能特性。用竞争结台法证明其中9种抗原位点性质不同，部分位点有重迭，有2个在G1上，7个在G2上。用血凝抑制试验和空斑减少中和试验分析表明，所有抗原位点除G1中的一种外均与病毒血凝活性有关。仅G1中的一个和G2中的2个位点具有病毒中和作用。

两种方法检测血清抗磷脂酶A2受体抗体在膜性肾病中的应用分析

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测血清抗磷脂酶A2受体抗体(抗PLA2R抗体)在膜性肾病(MN)中的阳性率,分析两种方法在MN的诊断效能,为临床MN的诊治提供特异度更高的实验指标。方法选取该院肾内科就诊行肾病理活检并确诊的MN患者31例,对照组50例包括该院住院自身免疫性疾病及肾病综合征、肾功能不全患者38例及健康体检者共12例,收集血清同时进行以上两种方法检测,分析两种方法在MN中的诊断效能,并分析其对MN的诊断一致性。结果 MN组中,ELISA法及IIF法检测结果均为阳性17例,两种方法分别显示阳性和阴性各1例,两种方法同时阴性12例,两种方法检测阳性率为58.06%(18/31);对照组50例均为阴性,阳性率为0.00%(0/50)。两种方法检测抗PLA2R抗体阳性率在MN组和对照组间比较,差异有统计学意义(χ~2=37.32,P<0.05)。两种方法诊断MN的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率指标依次为58.06%(18/31),100.00%(50/50),100.00%(18/18),79.37%(50/63),83.95%(68/81);两种方法单独检验与联合检验对MN的诊断性能比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。ELISA法在MN组及对照组中抗PLA2R抗体水平分别为45.42(2.00,760.40)及2.00(2.00,3.21)RU/mL,两组间抗体水平比较,差异有统计学意义(Z=-5.345,P<0.05)。结论 ELISA法及IIF法检测血清抗PLA2R抗体在MN诊断中具有较高的特异度与准确率,可作为MN诊断,尤其是特发性MN及无法行肾活检患者的必要和特异性血清学检测指标。

用单克隆抗独特型抗体检测肾综合征出血热(HFRS)病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体的临床意义

用抗独特型抗体(Ab2)检测细胞表面抗原受体是将Ab2作为探针用于免疫学检测而出现的新的研究方法。本文在制备了HFRS病毒抗独特型抗体的基础上应用单克隆抗独特型抗体(1B1)作间接免疫荧光试验，检测了HFRS病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体。首先，采取病人外周肝素抗凝血用淋巴细胞分离液按常规方法分离淋巴细胞，将淋巴细胞用RPMI 1640不完全培养液离心洗一次后弃上清，将沉降细胞重新悬浮后调至0．1ml并加入5％小牛血清．混匀，取约10—30μl加在预置于离心细胞沉淀器的玻片上，800rpm离心5分钟，取下玻片待干燥后加丙酮-福尔马林固定液固定30秒，水洗，吹干。

酶联免疫吸附试验检测血清抗中性粒细胞胞质抗体方法的建立与临床应用

目的建立总抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)的方法,初步探讨其在ANCA相关血管炎中的表达及临床应用价值。方法从人的中性粒细胞中提取总抗原,用棋盘滴定法选择ELISA测定的最佳条件,确定临界值。测定系统性红斑狼疮(SLE)、肾病、血管炎、类风湿关节炎(RA)等患者血清总ANCA,并与间接免疫荧光(IIF)法、特异性髓过氧化物酶(MPO)-ANCA及蛋白酶3(PR3)-ANCA进行分析比较。结果总抗原ELISA与IIF法检测肾病、SLE、血管炎及RA患者血清ANCA阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。抗原特异性ELISA、IIF法检测肾病、血管炎、RA患者血清ANCA阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05),而SLE差异有统计学意义(P<0.05)。结论ELISA检测ANCA可行且具有广泛的推广应用前景。

IIFT法检测血清抗-PLA_2R抗体诊断特发性膜性肾病的效应

目的:探讨间接免疫荧光试验(IIFT)法检测血清抗-PLA2R抗体对诊断特发性膜性肾病(IMN)的敏感性和特异性。方法:收集2016年1月至2017年7月间在温州医科大学附属第一医院肾内科经肾活检诊断的104例肾小球疾病患者,其中成人IMN 80例、拟诊的继发性膜性肾病(SMN)7例和其他病理类型17例。抽取清晨空腹血样,按照血清抗-PLA2R抗体的检测方法分IIFT法组和ELISA法组,2组分别设部分SMN和其他病理类型病例作为对照。结果:IIFT法检测血清抗-PLA2R抗体40例,其中33例IMN血清抗-PLA2R抗体阳性26例,灵敏度为78.8%;2例SMN均阴性;5例其他病理类型中仅1例狼疮性肾炎IV型可疑阳性,其余4例阴性;IIFT法的特异度为85.7%(6/7)。ELISA法检测血清抗-PLA2R抗体64例,其中47例IMN患者中37例血清抗-PLA2R抗体阳性,灵敏度为78.7%;在5例SMN中,慢性乙型病毒性肝炎合并不典型膜性肾病1例和结肠癌合并IMN 1例阳性,另外3例阴性;12例非膜性肾病均阴性;ELISA法的特异度为94.1%(16/17)。结论:在成人IMN的诊断价值上,IIFT法检测血清抗-PLA2R抗体的敏感性和特异性与ELISA法基本相同。

不孕症患者精子核抗原相关抗体的测定与意义

精子有复杂的抗原系统,诱导的抗精子抗体(AsAb)是引起部分男女不育的重要原因。目前,国内常用的检测AsAb的试管-玻片凝集试验、间接酶标记抗体染色试验以及ELISA试验,所测的AsAb 大多是针对精子膜抗原的抗体。与精子核抗原相关的AsAb(简称AsnAb)。

免疫荧光技术检查自身抗体病的点滴体会

免疫荧光技术检查自身抗体病的点滴体会赵丽华（四平市中心人民医院检验科，吉林１３６０００）免疫荧光检查自身抗体病是目前较好的诊断方法之一。特别是对早期系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）诊断效果更佳。我们四平市中心人民医院检验科开展免疫荧光检查的点滴体会报告如下：...

应用膜抗原荧光抗体试验检测人群水痘-带状疱疹病毒血清抗体阳性率

目的应用膜抗原荧光抗体试验（FAMA）方法调查广州地区正常人群水痘-带状疱疹病毒（VZV）的流行现状。方法采用以VZV感染细胞作为抗原、异硫氰酸荧光素（FITC）标记的羊抗人IgG作为二抗的FAMA试验，对随机抽取的592份正常人血清标本进行特异性VZV抗体检测。结果FAMA试验检测VZV抗体与其他的疱疹类病毒的相应抗体不产生交叉反应。应用此法检测592份血清标本中，VZV抗体总体阳性率为76．52％；1～、4～、7～、14～、20～、30～、40～及≥50岁年龄组血清抗体阳性率分别是14．67％、51．56％、73．91％、91．26％、92．78％、95．65％、98．11％和100％。1～3岁年龄组血清抗体阳性率最低，血清抗体阳性率随年龄的增大而升高；不同性别间阳性率差异无统计学意义（P〉0．005），不同年龄组间阳性率差异有统计学意义（P〈0．001）。结论采用FAMA法检测人群中VZV抗体与其他疱疹类病毒的相应抗体不产生交叉反应，是VZV抗体检测的可靠方法。应以1～3岁儿童为VZV疫苗免疫的首选对象.

自身抗体与原因不明习惯性流产的相关性研究

目的通过对原因不明习惯性流产(HA)患者多项自身抗体的检测,探讨原因不明性HA患者的发病与自身抗体的关系。方法对96例原因不明的HA患者采用ELISA法检测血清抗心磷脂抗体(ACA)、抗子宫内膜抗体(EMAb)、抗精于抗体(ASAb)和抗双链DNA抗体(dsDNA),间接免疫荧光法测定抗核抗体(ANA),斑点法检测可抽提核抗原抗体(ENA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗线粒体抗体(AMA)。结果原发性和继发性HA患者ACA、EMAb、ANA、SMA阳性率差异无显著性(P〉0.05),但均高于对照组,差异有显著性(P〈0.05)。各组之间dS-DNA、Sm、URNP、SSA、SSB、Scl-70、To-l差异无显著性。结论:多数原因不明性HA患者体内存在自身抗体,主要有ACA、EMAb、ANA、SMA等,体内自身抗体的存在可能是原因不明性HA的原因之一,对不明原因HA患者进行自身抗体的检测对明确病因有重要意义。

抗血小板糖蛋白IIb/IIIa Fab抗体的原核表达及其生物活性

目的 :研制抗血小板膜糖蛋白IIb/IIIaFab抗体。方法 :通过间接免疫荧光试验和血小板聚集抑制试验 ,选取鼠源抗血小板糖蛋白IIb/IIIa单克隆抗体 (mAbP14 0 )。从分泌该mAb的杂交瘤细胞株 (P14 0 )中 ,克隆到抗体轻链基因和重链Fd段基因 ,构建原核表达重组质粒p3MH/P14 0к Fd ,并在XLI Blu菌株中进行表达。采用钴亲和层析法对P14 0Fab抗体进行纯化 ,用SDS PAGE、ELISA和Westernblot等方法 ,对P14 0Fab抗体进行检测 ,并通过血小板聚集抑制试验 ,观察P14 0Fab抗体的抗栓活性。结果 :SDS PAGE和Westernblot表明 ,纯化的P14 0Fab抗体的相对分子质量 (Mr)约为 4 70 0 0。ELISA的结果显示 ,P14 0Fab抗体可与人血小板特异性结合。在体外ADP诱导的血小板聚集试验中 ,P14 0Fab抗体对血小板聚集的抑制作用成剂量依赖性 ,IC50 的平均值为 16 .85mg/L。结论

膜抗原荧光抗体法与ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒血清抗体的比较

目的比较膜免疫荧光抗体法（fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA）与ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）血清抗体的效果。方法以FAMA法为＂金标准＂,同时用德国Serion定量ELISA试剂盒检测184份血清样本（水痘疫苗免前92份、免后92份）的VZV Ig G抗体滴度,并对两种方法的测定结果进行比较。结果 FAMA法检测的阳性率为64.7%,抗体几何平均滴度（GMT）为1∶6.34,ELISA法检测的阳性率为47.8%,平均抗体活性值为492.33 m IU/ml。ELISA法的特异性为100%,阳性符合率（灵敏度）为69.7%,阳性符合率随着抗体滴度的增加而升高（z=-6.03,P〈0.001）。Fisher精确概率法分析结果显示,抗体滴度1∶8、1∶16和1∶32组与≥1∶64组阳性符合率差异均有统计学意义（P〈0.05）,其余各组间阳性符合率差异均无统计学意义（P〉0.05）。ELISA抗体活性值与抗体滴度呈明显正相关,相关系数R2=0.656,P〈0.001;Kappa值为0.707,两种方法具有较高的吻合度。结论德国Serion定量ELISA试剂盒在检测低抗体滴度VZV抗体时易出现假阴性,在检测高滴度VZV抗体时,两种方法敏感性相当;ELISA试剂盒检测的滴度临界值为1∶8-1∶32。该试剂盒可用于疫苗免疫效果评价和人群VZV抗体水平监测。

ELISA法联合CLIFT法检测抗双链DNA-IgG抗体应用于系统性红斑狼疮的诊断价值

目的:采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA),观察抗双链DNA (doublestranded DNA, dsDNA)IgG抗体在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)患者和非SLE患者中的分布特点,并评估ELISA法联合绿蝇短膜虫间接免疫荧光试验(crithidia luciliae immunofluorescence test, CLIFT)检测抗dsDNA-IgG抗体用于SLE诊断的效能。方法:收集上海交通大学医学院附属瑞金医院检测抗dsDNA-IgG抗体的住院患者的临床资料,共4 726例采用ELISA法,其中830例同时采用CLIFT检测,用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve, ROC)分析2种检测方法辅助诊断SLE的效能。结果 :采用ELISA法检测的4 726例住院患者中,dsDNA抗体阳性者398例,其中SLE 183例,占dsDNA阳性者46.0%,非SLE疾病依次为肝脏疾病(28.4%)、其他结缔组织病(7.5%)、血液系统疾病(5.3%)及呼吸系统疾病(3.8%);830例采用CLIFT检测ds DNA,134例结果显示为dsDNA抗体阳性的患者中,其中SLE者占94.0%,另有非SLE诊断病例包括自身免疫性肝病3例,肝硬化、肾炎、银屑病和抗磷脂综合征各1例。830例完成ELISA法与CLIFT双检测的患者中,SLE患者共197例,非SLE患者633例,ELISA法检测灵敏度为74.6%,特异度仅为92.9%;而CLIFT法测dsDNA抗体具有较高的特异度,为98.7%,灵敏度为64.0%。联合2种方法平行检测dsDNA抗体可明显提高SLE的诊断效能,ROC曲线下面积最高(0.869 0)。结论:单独应用ELISA法时,应警惕假阳性较高,需排除其他非SLE疾病的诊断;联合使用ELISA法和CLIFT法检测抗dsDNA抗体可较单独应用CLIFT法明显提高SLE的诊断效能,二者联合平行检测结果为阴性,用于排除SLE更有意义。

丙型肝炎病毒感染实验室诊断进展

据世界卫生组织统计,全球丙型肝炎病毒（HCV）的感染率约为3%,每年新发HCV病例约315万例,而高度慢性化是该病的最大特征。据报道慢性丙型肝炎患者10年内约有20%发展为肝硬化,肝硬化患者每年约3%发展为肝细胞癌,严重威胁着人类的健康。

更昔洛韦联合匹多莫德治疗水痘患者的疗效分析

目的了解膜抗原荧光抗体试验法在检测血清水痘-带状疱疹病毒抗体（人抗VZV—IgG）中的作用，观察更昔洛韦联合匹多莫德治疗水痘的临床疗效。方法127例水痘患者随机分为观察纽72例和对照组55例，观察组采用更昔洛韦联合匹多莫德治疗，对照组仅采用更昔洛韦治疗：另随机选取387例健康人群为健康组。采用膜抗原荧光抗体试验法检测人抗VZV—IgG；治疗期间观察两组的退热时间、皮疹干涸时间和皮疹结痴时间，并在治疗1个疗程之后评价疗效。结果观察组和对照组人抗VZV-IgG测定结果均为阳性。健康组中不同年龄人群的A-＆vzv—IgG阳性率差异有统计学意义（x2=104．815，P〈0．05）；而不同年龄人群的阳性率性别差异无统计学意义（P〉0．05）。观察组退热时间、皮疹干涸时间和皮疹结痂时间均低于对照组（t=3．122、3．387、7．892，P〈0．05）。观察组显效率55．56％，总有效率95．83％，总有效率与对照组比较差异有统计学意义（x2=4．246，P〈0．05）。观察组药物不良反应发生率5．56％，对照组药物不良反应发生率7．27％，两组比较差异无统计学意义（x2=0．156，P〉0．05）。结论在水痘临床治疗中，更昔洛韦联合匹多莫德具有更好的疗效，药物不良反应发生率较低，具有良好的临床应用价值。

水痘-带状疱疹病毒Oka-7S株的免疫原性分析

目的比较水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)Oka-7S与Oka株免疫原性。方法用高、中、低(1000、250、62.5 PFU/剂)剂量VZV Oka-7S及Oka株皮下分别免疫雌性BALB/c小鼠,每组12只,共免疫2次,每次间隔14 d。基于膜抗原荧光抗体试验(fluorescent antibody to membrane antigen assay,FAMA)进行VZV特异性体液免疫评价,酶联免疫斑点(ELISPOT)试验进行VZV特异性细胞免疫评价。结果VZV Oka-7S和VZV Oka株均可引起特异性体液免疫应答和细胞免疫应答,且具有相当的免疫效果;随免疫次数增加和免疫剂量升高,Oka-7S-2.2组小鼠血清中抗VZV特异性IgG抗体水平均明显升高。结论VZV Oka-7S株免疫原性与VZV Oka株相当。

非溶血性输血反应实验室分析的最新进展

非溶血性输血反应（NHTRs）是最常见的输血反应,包括输血相关急性肺损伤（TRALI）、过敏与发热.血液成分中的抗人类白细胞抗原（HLA）和人中性粒细胞抗原（HNA）白细胞抗体（Abs）通常与NHTRs相关,尤其是TRALI.最近,我们建立一个5-细胞-谱系的免疫荧光试验,一个改进的粒细胞免疫荧光试验,以及一个能稳定表达HNAs细胞谱系,以有效检测抗HNA-1至5和其他抗中性粒细胞抗原抗体.

病毒性感染快速诊断的实验室技术(备忘录)

这个备忘录是:对病毒性感染快速诊断的实验室技术作出评价,尤其考虑到在发展中国家的应用。这些技术具有以下特点:(1)借助于免疫荧光及免疫过氧化物酶技术,检测病毒抗原,方法简单、可靠、快速;(2)酶免疫测定(EIA)又称为酶联免疫吸附测定(ELISA),可以检测病毒抗原及抗体,方法快速简便。