咖啡炭疽病菌致病性测定及其拮抗菌筛选

炭疽病是咖啡的一种常见病害,对咖啡果实的产量和质量造成严重损失,开展引起咖啡炭疽病的病原菌致病性及其生物学特性研究,并筛选有效的拮抗菌,将为咖啡炭疽病的生物防治提供参考依据。对实验室分离并保存的4株咖啡炭疽病病原Wyq1(Colletotrichum siamense)、Yyq1(C. fructicola)、Xbd1(C. gloeosporioides)、Hb1(C.theobromicola)孢子悬浮液进行致病性测定,并选择致病力最强的菌株进行后续试验;通过平板培养法测定病原菌的生物学特性,采用平板对峙法对病原菌进行拮抗菌筛选。致病性测定结果显示,4株菌株均可侵染健康咖啡叶片,且在4株病原菌中菌株Xbd1的致病力最强;对菌株Xbd1的生物学特性测定结果表明,营养生长最适培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA),最适氮源为胰蛋白胨,最适碳源为葡萄糖,最适温度为28℃,最适pH为7,不同光照对其营养生长的差异不显著。室内拮抗菌筛选中有5株拮抗效果较好,分别是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)MC4-2、特基拉芽孢杆菌(B. tequilensis)D5-8、贝莱斯芽孢杆菌(B. velezensis)MC2-1、弯曲芽孢杆菌(B. flexus)ZLSY3和解淀粉芽孢杆菌(B. amyloliticus)GJ7,其中拮抗效果最好的是枯草芽孢杆菌MC4-2,抑制率达57.8%。通过咖啡炭疽病病原菌致病性测定及其拮抗菌筛选,明确了该病原菌的致病性,筛选得到的5株拮抗菌的拮抗效果均较好,为炭疽病的防治及其生防菌剂的开发奠定基础。

猕猴桃根际土壤可培养细菌分离及溃疡病拮抗菌筛选

[目的]了解湘西地区猕猴桃根际土壤可培养细菌多样性,并分离溃疡病菌的拮抗菌株。[方法]通过纯培养法分离根际土壤样品中的细菌(含放线菌),基于16S rRNA基因序列的系统发育分析鉴定分离菌株。采用牛津杯法筛选拮抗溃疡病菌的菌株。[结果]从猕猴桃根际土壤中分离获得了142株细菌,通过16S rRNA基因序列分析,142株细菌分别归属4个门、6个纲、11个目、18个科、28个属,其中Bacillus为优势属。从分离菌株中筛选出4株对猕猴桃溃疡病菌有拮抗效果的细菌(A11、D1h、A4、B15),经过系统发育分析初步鉴定A11和D1h属于红球菌属(Rhodococcus),A4属于芽孢杆菌属(Bacillus),B15属于链霉菌属(Streptomyces)。[结论]猕猴桃根际土壤可培养细菌具有丰富的类群、物种和遗传多样性,并存在拮抗溃疡病菌的微生物类群。

新疆阿克苏地区红枣黑斑病病原的鉴定及拮抗菌筛选

从新疆阿克苏地区采集红枣黑斑病病果和红枣根围土壤,通过形态和分子生物学方法对病原进行鉴定,并采用平板对峙法筛选红枣黑斑病生防菌。通过分离得到2种病原菌,编号为ZY01和ZR01,经鉴定均为细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)。采用平皿对峙法,共得到7株对病原菌ZY011拮抗效果高于60%的菌株,19株对病原菌ZR01拮抗效果高于60%的菌株。其中,对2种病原菌拮抗效果都高于60%的生防菌有5株,此结果为大枣黑斑病的生物防治提供了一定的理论依据。

苦豆子内生放线菌的分离鉴定及其拮抗菌筛选

采用3种消毒时间对健康苦豆子植株体内的内生放线菌进行分离。结果表明:消毒3 min消除非内生菌的影响效果较好;同一植株分离内生放线菌的数量,根部比茎、叶部多。经初步鉴定,苦豆子内生放线菌以链霉菌属和诺卡氏菌属为最多,分别占分离总数的35%和27%;其次为小多孢菌属,占12%;而类诺卡氏菌属、小单孢菌属、孢囊放线菌属和分枝杆菌属分离较少。26株纯化菌株对茄子枯萎病菌进行平板对峙培养,筛选出3株抑菌带宽度达到10 mm以上的菌株,其中菌株KDS22发酵液抑菌效果最好。

硇洲岛牡蛎相关细菌抗菌筛选及系统发育分析

以8个敏感菌株作为指示菌,采用管碟法对分离自湛江硇洲岛(20°52'N^20°56'N,110°33'E^110°38'E)潮汐带香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis)中的72株细菌的发酵液进行抗菌筛选,并对阳性菌株进行基因组DNA提取、16S rRNA基因PCR扩增和序列测定,继而进行系统发育分析。抗菌实验结果表明,受试菌株中有23株菌的发酵产物具有抗菌活性(阳性率31.9%),其中有5个菌株(JSM 111024、JSM 111027、JSM111029、JSM 111076、JSM 111083)具有较强的抗菌活性。基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,这23株菌具有较高的类群多样性和物种多样性,属于3个系统发育群/门(Alpha-Proteobacteria、Gamma-Proteobacteria、Bacteroidetes)中的8个科(Aeromonadaceae、Flavobacteriaceae、Halomonadaceae、Idiomarinaceae、Phyllobacteriaceae、Pseudoalteromonadaceae、Shewanellaceae、Xanthomonadaceae)的8个属(Idiomarina、Halomonas、Myroides、Nitratireductor、Oceanimonas、Pseudoalteromonas、Shewanella、Wohlfahrtiimonas),可分为11个物种。优势类群为Gamma-Proteobacteria亚门(14株),其中优势属为Oceanimonas属(6株);第二大类群为Bacteroidetes门(7株),都属于Flavobacteriaceae科的Myroides属。具有较强抗菌活性的5个菌株中,有4个菌株(JSM 111024、JSM 111027、JSM 111029、JSM 111083)属于Alpha-Proteobacteria亚门Phyllobacteriaceae科Oceanimonas属,而菌株JSM 111076属于Gamma-Proteobacteria亚门Aeromonadaceae科Nitratireductor属。

拮抗放线菌的筛选培养基与筛选方法研究

从黄土高原人工植被土壤中分离得到若干放线菌,研究了从中筛选的50株拮抗性放线菌在不同培养基上对8种供试靶标菌的拮抗性。结果表明:1在黄豆粉琼脂和玉米粉琼脂培养基上,放线菌生长较好,在PDA和高氏1号琼脂培养基上生长次之。玉米粉和黄豆粉琼脂均可作为拮抗性放线菌的筛选培养基。2反向放置琼脂块是筛选拮抗性放线菌的一种有效且可靠的方法。3筛选拮抗性放线菌时,制备琼脂块的培养时间应控制在8～12d,培养时间过长将会导致拮抗作用减弱。4筛选得到的50株供试放线菌中对辣椒疫霉、黄瓜枯萎菌、棉花枯萎菌、西瓜枯萎菌、青霉、假丝酵母、金黄色葡萄球菌及大肠杆菌有拮抗性的放线菌株数分别为27,26,33,36,35,29,35和20株。

以高通量方法筛选红桑叶的抗菌活性并进行活性组分的分离研究(英文)

目的通过一种简单快速的高通量方法筛选具有抗菌活性的植物提取物,并通过此种方法从有活性的粗提物中纯化活性组分。方法首先建立植物提取物库和抗菌的高通量筛选方法。然后针对转糖链球菌Streptococcus mutans和伴放线放线杆菌Actinobacillus actinomycetemcomitans进行高通量筛选。结果通过筛选发现红桑叶具有很强的抑菌活性。为了进一步研究其活性,将其粗提物通过HPLC进行分离得到71个组分,再通过同样的高通量筛选方法进行抗菌活性测定,对有活性的组分通过血琼脂法进行验证。实验数据表明红桑叶的一个组分#31对两种细菌有几乎完全的抑制(抑制率>99%),而另外两个组分对伴放线放线杆菌Actinobacillus actinomycetemcomitans有部分抑制。结论所建立的高通量筛选方法简便快捷,筛选结果稳定可靠,可用于大规模的植物提取物的抗菌活性筛选。红桑叶具有很强的抗菌活性,且可分离得到活性组分,红桑叶具有进一步开发为抗菌药物和保健品的潜力。

抗革兰阴性菌靶向筛选平台的建立

目的建立靶向筛选抗革兰阴性菌新药的综合模型体系。方法以大肠埃希菌DH5α菌株作为革兰阴性菌的模式菌,利用反义RNA沉默技术特异性降低靶基因的表达水平,构建系列反义RNA低表达菌株,并基于这些菌株构建靶向抗菌筛选平台。结果建立了针对72个菌体生长的必需基因,10余个途径的全细胞筛选模型,形成可全面评价化合物活性位点的模型体系。对已知药物进行了模拟筛选和靶点评价,证实了筛选体系的可靠性。结论利用本文建立的筛选体系,可完成抗革兰阴性菌靶向药物筛选和机制评价两个功能。

木霉拮抗烟草赤星病菌菌株的筛选及其生防机制

利用诱捕法从土壤中分离得到 1 8株木霉 (Trichodermaspp .)菌株 ,采用对峙法从中测定、筛选出一株对烟草赤星病菌 (Alternariaalternata)具有极强拮抗作用的菌株 (Tv - 1 ) ,光学显微镜及透射电镜观察结果表明 ,Tv - 1菌株的生防机制主要为生长竞争、重寄生作用以及产生生物活性类物质使病菌菌丝消解的直接抗菌作用 ,表现为Tv - 1菌株菌丝生长迅速 ;能附着、缠绕于病菌菌丝上 ,并产生吸器侵入菌丝 ;同时还能分泌使病菌菌丝原生质浓缩、断裂。

柑橘溃疡病土壤拮抗菌的筛选、鉴定及防效测定

为了筛选具有生防潜力的柑橘溃疡病拮抗菌,从湖南省不同地区采集了16个土壤样品,经分离、纯化、筛选获得3株拮抗效果突出的菌株,其中CLT3为链霉菌属,CLH2为假单胞菌属,CZR1为伯克氏菌属;拮抗菌室内防效试验结果表明:3个菌株的防效基本都在50%以上,其中CLT3的防效最佳,达到83.85%。这说明3株拮抗菌对于柑橘溃疡病的防治有一定的作用,并显现出较大的开发潜能。

云南重楼植物内生真菌的分离及抗菌活性筛选

从云南重楼[Paris polyphylla Smithvar.yunnnanensis(Franch.)Hand.Mazz.]块状茎中分离出166株内生真菌,对其进行形态分类鉴定归于4目,6科,20个属,体现了云南重楼植物内生真菌的生物多样性特征。同时,选择与人类和植物相关的37株病原微生物作为抗菌活性筛选指示菌,进行了云南重楼植物内生真菌抗菌活性的初步研究。结果表明,4株内生真菌对细菌、植物致病真菌、皮肤致病真菌多种病原微生物具有显著抑制生长的作用。

过路黄叶斑病病原鉴定及拮抗细菌的筛选

为明确贵州省施秉县过路黄叶斑病的病原种类,探索该病害的生物防治方法,本试验利用组织分离法、致病性测定法获得致病菌株GLHYB,并结合形态学特征和基于内转录间隔(ITS)、β-微管蛋白(β-tubulin)、延伸因子(EF-1α)3个基因构建系统发育树,将该菌株鉴定为腐皮镰刀菌(Fusarium solani)。利用组织块培养法、平板对峙法从太子参(Pseudostellaria heterophylla)健康块根内分离筛选出1株对F.solani抑菌率达50%以上的拮抗细菌X14,根据生理生化特性及16S rDNA、促旋酶(gyrAse)A亚单位基因序列分析,将X14鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。该菌株能引起F.solani菌丝畸形和膨大,且具有广谱抑菌性,对4种供试病原真菌的抑菌率为50%~70%。本研究为防治镰刀菌属引起的过路黄叶斑类病害提供了生物材料及理论参考。

黄海葵相关细菌抗菌活性菌株的筛选及其初步分类鉴定

目的对分离自硇洲岛黄海葵(Anthopleura xanthogrammica)样品的126株细菌进行抗菌活性筛选和初步分类鉴定。方法以8种微生物(3株革兰阳性菌、3株革兰阴性菌和2株真菌)作为指示菌,采用琼脂扩散法筛选抗菌活性菌株,采用基于16S rRNA基因序列的系统发育分析和生物学特性研究对其中抗菌谱较广且抗菌活性稳定的菌株进行初步分类鉴定。结果 67株菌具有抗菌活性,阳性率为53.2%,抗菌谱较广且活性较强的9株,占受试菌株总数的7.1%。经过形态观察、生理生化特征及基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,9株具有较强抗菌活性的菌株分别属于芽孢杆菌属(Bacillus)、盐芽孢杆菌属(Halobacillus)、短杆菌属(Brachybacterium)、拟诺卡菌属(Nocardiopsis)、盐单胞菌属(Halomonas)、假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)和弧菌属(Vibrio)菌株。结论分离自中国南海的黄海葵相关微生物抗菌活性菌株具有丰富的类群多样性。

防治烟草野火病拮抗细菌菌株的筛选

从多种植株根际土壤中和烟草叶面分离到188个细菌分离物,室内抑菌圈法测定抑菌效果,温室测定防效,结果筛选出有明显抑菌作用的菌株21个,温室采用高压喷雾接种烟草野火病菌株,普通喷雾接种生防菌菌株,建立了以病斑减轻率和病斑扩展抑制率2个指标的活体筛选方法,温室防效试验筛选出防效较好的菌株6个,其中2 e',1 010 D防效较好,其次为C 3和3 g'.病斑减轻率为58%～91%,病斑扩展抑制率为56.58%～78.08%.这为生产上防治烟草野火病提供了新思路.

德夯嗜盐耐盐菌抗菌活性筛选和系统发育

以8个敏感菌株作为指示菌,采用琼脂扩散法,对分离自湖南省德夯峡谷（28°15′~28°43′N,109°30′~109°45′E）普通非盐环境土壤样品中的294株嗜盐及耐盐细菌进行抗菌活性筛选,并对其中具有较强抗菌活性的菌株进行基于16S rRNA基因序列的系统发育分析.受试菌株中有109株的发酵产物具有抗菌活性（阳性率37.1%）,其中5个菌株具有较强抗菌活性（JSM 102030,JSM 102052,JSM 102054,JSM 102066,JSM 102082）.基于16SrRNA基因序列的系统发育分析表明,这5个菌株分别属于细菌域（Eubacteria）的3个门（Actinobacteria,Firmicutes,Proteobacteria）中的3个科（Bacillaceae,Halomonadaceae,Nocardiopsaceae）的4个属,菌株JSM 102030属于Halobacillus属,与该属已知种Halobacillus trueperi DSM 10404T的系统发育关系最为密切（序列相似性为99.1%）,JSM 102052和JSM 102054属于Halomonas属,与Halomonas alkaliphila 18bAGT的系统发育关系最为密切（序列相似性为98.3%）,JSM 102066属于Nocardiopsis属,与其系统发育关系最为密切的是Nocardiopsis prasina DSM43845T（序列相似性为99.3%）,JSM 102082与Oceanobacillus属的Oceanobacillus kimchii X50T以99.6%的16SrRNA基因序列相似性聚在一起.研究结果表明,分离自湖南省德夯峡谷普通非盐环境土样的嗜盐及耐盐细菌中存在较高比例的抗菌活性菌株,且这些细菌具有较为丰富的系统发育多样性.

基于基因与抗菌活性筛选的菌株FIM060022多相鉴定

利用PKS-NRPS基因筛选与抗菌活性测定,选取筛选结果为阳性以及广谱抗菌的FIM060022菌株进行多相分类鉴定。结果显示,该菌株对大肠埃希菌(E. coli)、金黄色葡萄球菌(S. aureus)、枯草芽胞杆菌等细菌(B. subtilis),以及白色念珠菌(C. albicans)、红酵母(R. rula)与新型隐球菌(C. neoformans)等真菌具有抗菌活性。通过对菌株的培养特征、形态观察、生化特性、细胞壁组成分析、脂肪酸组成分析、G+C mol%含量组成,结合16S r DNA序列以及PKS/NRPS基因序列分析,将菌株FIM060022鉴定为小单胞菌科疣孢菌属。结果提示FIM060022是一株具有广谱抗菌活性的海洋稀有放线菌,具有产药用化合物的潜能。

辣椒炭疽病菌拮抗菌的筛选与鉴定

辣椒炭疽病对辣椒生产影响很大,为了有效地防治辣椒炭疽病,从土壤中筛选到对辣椒炭疽病菌有较强抑制作用的生防菌株A和B,通过形态观察和生理生化测试,初步认为这两个菌株均为链霉属(Streptomyces)。

乳链菌肽抗性嗜热链球菌的筛选

采用两倍稀释法在脱脂乳培养基和乳清培养基中测定了乳链菌肽(Nisin)对嗜热链球菌9的最小抑菌浓度(MIC)。在脱脂乳培养基中逐渐增加Nisin的浓度,驯化嗜热链球菌9,直到其抗性达到300IU·mL-1。经生产性能鉴定和遗传性状实验,获得两株适宜做酸奶发酵剂的Nisin抗性嗜热链球菌9.31和9.4。

甜叶菊斑枯病生物防治拮抗菌株的筛选

从甜叶菊根部土壤中分离到放线菌A01和A64菌株,生长繁殖速度快,抗污染能力强,抑菌效果好,为高效拮抗菌株。2个拮抗菌株的拮抗活性能稳定遗传。初步鉴定两菌株为链霉菌属(Streptomyces Waksman and Henrici),A01为黄色类群的1个种,A64为蓝色类群的1个种,种名未定。喷施抗生菌剂,可有效降低斑枯病病情指数,平均防效为56.3%。A01和A64混合构成的抗生菌剂防治效果明显好于两个菌剂单用,差异达到显著水平。抗生菌剂可显著提高甜叶菊叶片产量,平均增产18.7%,尤其在连作小区,增产效果更为明显。

Nisin抗性嗜热链球菌的筛选

采用两倍稀释法在脱脂乳培养基和乳清培养基中测定了nisin对嗜热链球菌9的最小抑菌浓度(MIC)。在脱脂乳培养基中逐渐增加nisin的浓度,驯化嗜热链球菌9,直到其抗性达到300IU/ml。经生产性能鉴定和遗传性状实验,获得两株适宜做酸奶发酵剂的nisin抗性嗜热链球菌9.31和9.4。