拮抗菌RY3抗菌粗蛋白理化性质及其对柑橘绿霉病菌的抑菌活性

解淀粉芽孢杆菌RY3是从冬枣果园根际土壤分离获得的一株具有高效广谱拮抗活性的拮抗细菌，其发酵液经盐酸沉淀后得到抗菌粗蛋白。为明确该抗菌粗蛋白的理化性质和抑菌活性，研究温度、pH、紫外线、蛋白酶等对抗菌蛋白稳定性的影响，并研究抗菌粗蛋白对柑橘绿霉病菌的抑菌作用。结果表明：该粗蛋白具有较高的热稳定性，100℃处理60min后押菌活性仍为原有活性的82．84％；其耐酸且在pH2～10时均有抑菌活性；对紫外线、胰蛋白酶不敏感，对蛋白酶K具有一定的耐受性。该抗菌粗蛋白对柑橘绿霉病菌分生孢子具有明显的抑制萌发活性，10倍稀释液处理的孢子萌发率仅为2．86％，该抗菌粗蛋白还可导致芽管变短变粗、菌体细胞质凝集、菌丝消融等。

解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌粗蛋白的初步研究

解淀粉芽孢杆菌TF28是从大豆根部分离得到的一株具有广谱高效拮抗作用的内生细菌,其发酵上清液经20%～40%硫酸铵盐析后获得抗菌粗蛋白。为明确该粗蛋白的理化性质,研究了温度、pH值、UV照射和蛋白酶对其稳定性的影响。结果表明:该粗蛋白具有一定的热稳定性,100℃处理30min后抑菌活性仍为原有抑菌活性的85.9%;且在较广pH(3～11)范围内比较稳定,活性均能保持在95%以上;对紫外线、胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K具有一定的耐受性。初步研究了抗菌粗蛋白的抑菌作用,结果显示,对所测定的12种病原真菌均有抑制作用,其中对大豆根腐病菌和水稻恶苗病菌的抑制作用尤为明显。其对水稻恶苗病菌病原菌孢子的萌发起到抑制作用,有效抑制中浓度(EC50)为138.32μg/mL。此外,该抗菌粗蛋白能破坏病原菌菌丝结构导致畸形。

特基拉芽胞杆菌JN-369抗菌粗蛋白的理化性质和抑菌效果

特基拉芽胞杆菌Bacillus tequilensis JN-369是1株对稻瘟病菌Magnaporthe oryzae有较好拮抗作用的植物内生细菌,其发酵液经硫酸铵沉淀后得到抗菌粗蛋白。为明确菌株JN-369抗菌粗蛋白的抑菌机理,首先确定了该抗菌粗蛋白抑菌谱、热稳定性、酸碱稳定性、紫外稳定性以及酶稳定性,并观察研究了抗菌粗蛋白对稻瘟病菌菌丝和分生孢子的抑制作用。并采用针刺离体接种法测定了40%稻瘟灵EC、25%三环唑WP及不同浓度JN-369抗菌粗蛋白对水稻稻瘟病的拮抗效果。结果表明:菌株JN-369抗菌粗蛋白抑菌谱广,对葡萄灰霉病菌、草莓灰霉病菌和水稻稻瘟病菌等13种植物病原真菌及卵菌表现出抑制作用,而对油菜菌核病菌没有抑制作用;该粗蛋白理化性质相对稳定,具有应用于粮食作物生物防治的潜力;对稻瘟病菌的菌丝生长和分生孢子萌发有双重抑制作用,能使病原菌菌丝细胞膨大,并可抑制病菌分生孢子的萌发;离体防效试验显示,供试杀菌剂对水稻稻瘟病均有显著的拮抗效果,菌株JN-369抗菌粗蛋白在浓度为50~100μg/mL时对稻瘟病的拮抗效果最好,该菌株有望开发为防治稻瘟病的生防菌株。

深海贝莱斯芽孢杆菌DH82的筛选、鉴定及其抗菌粗蛋白性质分析

本研究从西太平洋雅浦海沟6 000 m深的水样中分离得到106株深海细菌,其中筛选到一株能较强拮抗迟缓爱德华氏菌等水产致病菌的DH82菌株。采用16S rDNA和gyrB基因(NCBI登录号:MK203035与MK203036)分子生物学分析,结合形态学和生理生化特性,鉴定DH82菌株为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。对其抗菌粗蛋白性质进行研究发现:该粗蛋白具有较好热稳定性,在100℃,处理30 min后,仍有85.5%抑菌活性;木瓜蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶及胰蛋白酶对粗蛋白影响不显著;粗蛋白在pH7.0条件下抑菌活性最佳;金属离子K+和Na+对粗蛋白抑菌活性有促进作用,Mg2+、Ca2+及Fe3+等多价金属离子对粗蛋白抑菌活性有抑制作用。

一株抗多种植物病害菌株的筛选、鉴定及其活性成分研究

从农田土壤中分离得到1株对多种植物病原真菌有拮抗作用的菌株Loq18,经生理生化及分子鉴定确定为一株枯草芽孢杆菌,其无菌发酵液经硫酸铵沉淀得抗菌粗蛋白。为明确此抗菌粗蛋白的理化性质,研究了温度、pH变化、UV照射、有机溶剂和蛋白酶对抗菌蛋白稳定性的影响。结果表明,该抗菌粗蛋白具有良好的热稳定性,121℃高压灭菌处理20 min后仍具有对照活性的95%以上;对酸碱不敏感,在pH值4～11范围内相对稳定;对紫外线稳定,在紫外光下照射10 h以上时,其活性基本不受影响;经乙醚、丙酮等有机溶剂处理后仍具有对照活性的90%以上;对蛋白酶较稳定。